水通道蛋白1在羊水過多患者胎盤及胎膜組織中的表達及意義

摘 要 目的：研究水通道蛋白1(AQP1)在羊水過多患者胎盤及胎膜組織中的表達，探討其在羊水過多發(fā)病機制中的作用。方法：采用免疫組織化學(xué)法檢測20例羊水過多患者(羊水過多組)及20例正常孕婦(正常妊娠組)的胎盤及胎膜組織中AQP1的表達。結(jié)果：兩組胎盤及孕婦腹膜組織中均有AQP1表達且表達部位相同，分別位于胎盤組織中血管及毛細血管的內(nèi)皮細胞、胎膜組織羊膜上皮細胞上。羊水過多組胎盤中AQP1表達水平明顯高于正常妊娠組；羊水過多組胎膜中AQP1表達水平明顯低于正常妊娠組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論：與正常妊娠相比，AQP1在羊水過多患者胎盤中的表達增強、在其胎膜中的表達減弱，可能與羊水過多的發(fā)病機制有關(guān)。

關(guān)鍵詞 羊水過多 水通道蛋白1 免疫組織化學(xué)

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.07.275

羊水過多是常見的妊娠期并發(fā)癥，但其分子病理機制并不清楚。水通道蛋白(AQPs)是一族廣泛存在于機體組織細胞膜上，選擇性高效轉(zhuǎn)運水的特異孔道。AQPs參與母胎間的液體交換，與羊水的形成、成分及羊水量有關(guān)［1］。本研究采用免疫組織化學(xué)方法對羊水過多患者胎盤及胎膜組織中AQP1表達情況進行檢測，以探討AQP1在羊水過多發(fā)病中的作用。

資料與方法

2006年1月～2007年4月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院、第三附屬醫(yī)院以及鄭州市婦幼保健院婦產(chǎn)科分娩的孕婦40例，其中正常妊娠婦女20例為正常妊娠組，平均年齡26±7歲，平均分娩孕周39±4周，平均羊水量(AFV)880±168ml。羊水過多患者20例為羊水過多組，平均年齡27±5歲，平均分娩孕周38±2周，平均AFV 2752±443ml。羊水過多的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照高等醫(yī)學(xué)院教材《婦產(chǎn)科學(xué)》第6版中的標(biāo)準(zhǔn)［2］。兩組孕婦AFV比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，兩組孕婦平均年齡和分娩孕周比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。所有產(chǎn)婦均無其他妊娠合并癥及并發(fā)癥。

方法：①標(biāo)本采集：胎盤娩出后，分別取胎盤組織母面中央(避開鈣化、機化灶)大小約1.0cm×1.0cm×1.0cm，胎膜約2.0cm×2.0cm大小，生理鹽水漂洗3次后，置10%中性福爾馬林溶液中固定24～48小時，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，制成4μm厚的切片備用。②AQP1免疫組化檢測：常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化、蒸餾水洗5分鐘共3次；枸椽酸緩沖液中抗原修復(fù)；3%過氧化氫封閉內(nèi)源性過氧化氫酶活性20分鐘，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗3分鐘共3次；10%山羊血清室溫作用20分鐘，滴加一抗(兔抗人AQP1多克隆抗體，美國Santa Crutz公司，工作濃度1:100)，置于冰箱4℃過夜；復(fù)溫后，PBS洗3分鐘共3次；生物素化羊抗兔二抗(鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶免疫組化染色超敏試劑盒S-PKit，Ultra Sensitive產(chǎn)品)室溫下作用20分鐘，PBS洗3分鐘共3次；滴加試劑過氧化物酶標(biāo)記鏈酶卵白素，室溫作用20分鐘，PBS洗3分鐘共3次；二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色3分鐘，自來水沖洗，切片用蘇木素復(fù)染，脫水、透明、封片。免疫組化染色陰性對照采用PBS代替一抗，以已知AQP1陽性表達的正常腎臟組織標(biāo)本做陽性對照，光學(xué)顯微鏡觀察。③結(jié)果判定：參照Fromowitz綜合計分法進行半定量分析［3］。以細胞膜或細胞漿出現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒為陽性細胞，無著色或與背景顏色一致的為陰性細胞，隨機選擇10個高倍視野，每個視野計數(shù)100個細胞，按陽性細胞數(shù)占總計數(shù)細胞的百分比，得出陽性細胞百分率及計分，陽性細胞百分率≤5%為0分，陽性細胞百分率6%～25%為1分，陽性細胞百分率26%～49%為2分，陽性細胞百分率≥50%為3分；根據(jù)多數(shù)細胞的著色強度計算強度得分，無著色為0分，淺棕褐色為1分，棕褐色為2分，深棕褐色為3分；陽性率和強度相加后的結(jié)果：0～1分為(-)，2分為(+)，3～4分為(++)，5～6分為(+++)。將(+)、(++)、(+++)視為陽性。

統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理。對數(shù)據(jù)進行X²檢驗和秩和檢驗，P＜0.05差異有顯著性。

結(jié) 果

兩組婦女胎盤組織中AQP1表達的比較：兩組胎盤組織中均有AQP1表達，主要表達于胎盤組織中血管及毛細血管內(nèi)皮細胞的胞膜及胞漿中。羊水過多組胎盤組織中的AQP1的表達強度高于正常妊娠組(P＜0.05)。見表1。

兩組婦女胎膜組織中AQP1表達的比較：兩組胎膜組織中均有AQP1表達，主要表達于羊膜上皮細胞的胞膜及胞漿中。羊水過多組胎膜組織中的AQP1的表達強度高于正常妊娠組(P＜0.05)。見表2。

討 論

膜內(nèi)轉(zhuǎn)運途徑是指羊水與胎兒血液間的交換，主要指通過胎盤胎膜的交換。AQPs在妊娠期母胎之間的液體交換及羊水平衡中起重要作用。

用免疫組化法對羊水過多患者胎盤及胎膜組織中AQP1進行定位和定量分析，發(fā)現(xiàn)其分布與正常妊娠基本一致，主要位于胎盤血管及毛細血管的內(nèi)皮細胞、胎膜羊膜上皮細胞中。本試驗結(jié)果與文獻報道的一致［4］。但羊水過多組胎盤AQP1表達強度較正常妊娠組顯著增強，羊水過多組胎膜AQP1表達強度較正常妊娠組顯著減弱，差異有顯著性(P均＜0.05)。此結(jié)果與Beall等報道的AQP1在胎膜促進膜內(nèi)水轉(zhuǎn)運，其變化與羊水量呈反相關(guān)一致。這些發(fā)現(xiàn)暗示AQP1的在胎盤內(nèi)增多及胎膜內(nèi)減少可能與羊水過多相關(guān)聯(lián)。需要進一步的研究闡明羊水增多和AQP1在胎盤內(nèi)表達增多、胎膜內(nèi)表達減少的機制。進一步深入研究AQP1在羊水過多中的作用，不僅有助于對羊水過多發(fā)病機制的認識，而且有可能從蛋白和(或)基因水平找到新的干預(yù)靶點，通過使用特異性拮抗劑為羊水過多治療提供新途徑。

參考文獻

1 Beall MH，Wang S，Yang B，et al.Placental and membrane aquaporin water channels correlation with amniotic fluid volume and composition［J］.Placenta，2007，28(5-6):421-428.

2 樂杰.婦產(chǎn)科學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社，2004:99-101.

3 Fromowitz FB，Viola MV，Chao S，et al.Ras P21 expression in the progression of breast cancer［J］.Hum Pathol，1987，18(12):1268-1275.

4 Mann SE，Ricke EA，Yang BA，et al.Expression and localzation of aquaporin 1 and 3 in human fetal membranes［J］.Am J Obstet Gyneco1，2002，187(4):902-907.