MMP—9在胃癌細胞中的表達及意義

摘 要 目的：探討MMP-9在人胃癌細胞SGC7901、BGC-823中的表達及意義。方法：選擇兩種不同的胃癌細胞（人胃癌轉移淋巴結細胞SGC7901，人胃低分化腺癌細胞BGC-823細胞），采用細胞免疫化學SABC法對兩種胃癌細胞中MMP-9表達情況進行檢測和分析。結果：MMP-9在兩種胃癌細胞中都高表達，且差異有統計學意義（P<0.01）。結論：MMP-9在胃癌細胞SGC7901中的高表達與其細胞的轉移能力密切相關。

關鍵詞 胃癌細胞 金屬蛋白酶-9 細胞免疫化學doi：10.3969/j.issn.1007-614x.2012.30.214

胃癌是我國消化道最常見的惡性腫瘤之一，其死亡率占腫瘤的首位，本研究選擇胃癌細胞株SGC7901、BGC-823，旨在研究MMP-9在胃癌細胞中的表達情況，探討MMP-9在促進胃癌細胞侵襲轉移中的作用。

資料與方法

細胞及試劑：人胃癌轉移淋巴結細胞SGC7901購自武漢生命科學細胞中心，人胃低分化腺癌細胞BGC-823細胞購自武漢博士德生物工程有限公司。RPMI-1640購自Gibeo公司；MMP-9單克隆抗體購自北京中杉金橋有限生物公司；DAB顯色試劑盒及即用型（鼠/兔）SABC免疫組化染色試劑盒購自北京中衫生物技術有限公司。PIRA裂解液購自北京中衫生物技術有限公司。

方法：①細胞培養：將復蘇的胃癌細胞SGC7901、BGC-823細胞分別接種于5ml培養液的培養瓶中，在37℃二氧化碳的恒溫培養箱內（CO2濃度為5%）培養2～3天，所用的培養液1640均含10%小牛血清、青霉素、鏈霉素個1U/ml，每天觀察培養細胞的生長情況，根據培養液的顏色變化，每1～2天換一次培養液，待培養細胞長滿培養瓶底70%～80%時備用。②細胞免疫化學法：常規消化細胞，制備細胞懸液，將細胞經胰酶消化收集后，并調整細胞密度為2×105/ml。將高壓滅菌的蓋玻片放入6孔培養板內，常規培養。棄去培養基，PBS清洗細胞3次，在各細胞爬片上滴加一抗工作液MMP-9，37℃孵育1～2小時。PBS沖洗5分鐘×3次。滴加生物素標記二抗工作液，37℃孵育10～30分鐘；同上洗滌。滴加SABC，37℃孵育10～30分鐘；DAB顯色，蘇木精復染后常規脫水、透明、封片。鏡下觀察并攝片。

結果判定標準：MMP-9陽性細胞均表現為細胞核內含棕黃色顆粒。在光鏡下，結合免疫細胞化學染色強度和陽性細胞率兩個參數，綜合判定MMP-9的陽性染色。用BioMias圖像處理系統在100倍鏡下選取癌視野中5個區域，分別在高倍鏡（400×）下隨機選擇25個視野。采用Image Pro Plus 5.0圖像分析軟件檢測陽性染色的積分光密度值（IOD）。

統計學處理：采用SPSS13.0統計軟件，數據以X±S表示，根據數據來源和統計學要求進行重復測量的方差分析。P<0.05表示差異有統計學意義。

結 果

免疫細胞化學法檢測MMP-9在胃癌細胞中的蛋白表達：MMP-9在胃癌細胞株中陽性表達均呈棕黃色，并且主要表達于癌細胞漿和/或細胞膜，在轉移性的胃癌細胞SGC7901細胞中表達（5381.209±1738.744）明顯高于BGC-823細胞（4634.018±1017.023），兩種細胞的差異有統計學意義（P<0.01）。提示MMP-9的表達和轉移與否有密切相關。

討 論

細胞的惡性增殖與腫瘤的發生、浸潤及轉移密切相關。而轉移是惡性腫瘤主要的生物學行為之一，也是腫瘤復發和預后的重要指標。已經眾多研究證明，腫瘤細胞浸潤轉移的能力與其產生和誘導降解細胞外基質的蛋白酶的能力密切相關[1]。基質金屬蛋白酶（MMPs）是一組重要的細胞外基質降解酶，可通過對細胞外基質的降解促進腫瘤細胞對周圍組織的浸潤轉移能力。其中最重要的是MMP-2和MMP-9。

Kowluru RA等[2]在研究中發現，MMP-9在有淋巴結轉移的腫瘤中的表達高于非轉移性腫瘤。Cha MC等[3]對多種惡性腫瘤組織中的MMPs進行研究，認為MMP-9與大腸癌關系最為密切。Cha MC[3]研究發現，隨腫瘤浸潤程度的增加，分化程度的變差或伴有淋巴結的轉移，MMP-9的陽性表達率明顯增高。本研究結果表明轉移的胃癌細胞SGC7901中MMP-9表達明顯高于BGC-823細胞，證實了MMP-9在促進胃癌淋巴結轉移中的作用。因此檢測MMP-9在胃癌中的表達情況將有助于臨床醫師更準確評估患者的預后，并指導臨床制定更合理的治療方案。

參考文獻

1 No JH，Jo H，Kim SH，et al.Expression of MMP-2，MMP-9，and urokinase-type plasminogen activator in cervical intraepithelial.Neoplasia，2009，1171：100-104.

2 Kowluru RA.Role of Matrix Metalloproteinase-9 in the Development of Diabetic Retinopathy and its Regulation by H-RasInvest.Ophthalmol Vis Sci，2010（10）：150.

3 Cha MC，Purslow PP.The activities of MMP-9 and total gelatinase respond differently to substrate coating and cyclic mechanical stretching in fibroblasts and myoblasts.Neoplasia，2010（11）：205.