痰標本在細菌學檢驗中的應用分析

摘要目的：探討痰標本在細菌學檢驗中的應用價值。方法：選擇送檢于檢驗科的300例痰標本，分別接種培養于不同的培養基上。結果：1例標本在923TBL液體培養基渾濁，有細菌生長，在7H9L半固體蔗糖培養基中有油煎蛋樣的菌落出現，而在羅氏培養基、923TBB和7119B培養基中沒有菌落生長。結論：用高滲半固體培養基可以從臨床痰標本中分離出結核分枝桿菌L型菌株，表明痰標本在細菌學檢驗中仍有一定的價值。

關鍵詞痰標本細菌學檢驗

在感染疾病的病原菌中，細菌L型是細菌細胞壁部分缺損或完全喪失而造成的，細菌胞壁的缺失可以是自發的，也可以是人工誘導的，但人工誘導的頻率遠比自發為高。痰標本在瓊脂培養基上，菌落呈“油煎蛋”樣式^[1]。本實驗旨在篩查臨床痰標本中結核分枝桿菌L型細菌的存在情況，論述了痰標本在細菌學檢驗中的應用效果，為進一步研究結核分枝桿菌L型細菌的形成提供思路，現報告如下。

資料與方法

實驗對象：2009年6月～2012年5月送檢于檢驗科的300例痰標本。

培養基配制：羅氏培養基的配制：基礎液，谷氨酸鈉1.8g、磷酸二氫鉀1.2g，枸櫞酸鎂0.3g，葡萄糖0.3g，硫酸鎂0.1g，丙三醇6ml、蒸餾水300ml。上述溶液加熱充分溶解，加入土豆粉6g，搖勻加熱5分鐘。冷卻到40～50℃時，加入500ml全卵液，加入已經高壓滅菌的2%孔雀綠10ml，搖，靜置后進行分裝。呈斜面放置于干燥箱85℃，1.5小時。冷卻后，培養基斜面顏色鮮艷，表面光滑無氣泡，4℃保存。

痰標本的細菌培養：取痰標本，以1：3的比例加入消化液，漩渦振蕩，3000轉/分，離心15分鐘，加入適量PBS重懸沉淀，取300ml分別接種于Middlebrook MGIT 7H9液體、7H9L、7H9B半同體培養基、923TBB和923TBL液體培養基中，37℃靜置培養。消化液的配制：4%NaOH 50ml，2.9%枸櫞酸鈉50ml，N-乙酰-L-半胱氨酸0.5g當天配制，24小時內使用。染色涂片后光學顯微鏡下鏡檢。

結果

細菌培養結果：痰液經預處理后接種于Middlebrook MGIT 7H9液體、7H9L、7H9B半同體培養基、923TBB和923TBL液體培養基，培養結果顯示1例標本在923TBL液體培養基渾濁，有細菌生長，在7H9L半固體蔗糖培養基中有油煎蛋樣的菌落出現，而在羅氏培養基、923TBB和7119B培養基中沒有菌落生長。

涂片鏡檢分析：1例標本菌株的煎蛋樣菌落經抗酸染色可見大小不等的短桿狀的細菌。

病歷分析：患者，男，19歲，漢族。患者于2010年10月曾患“頸淋巴結核”抗癆治療好轉，2011年10月患者無誘因出現咳嗽，以干咳為主伴少量白色稀薄液，X線左肺上中野見斑片狀陰影，邊界模糊，CT左肺斑片狀密度不均一影。入院檢查：痰檢三次均為陰性，醫師根據影像學結核胸片病灶形態以臨床癥狀，考慮為繼發性肺結核。常規：粒細胞百分比71.7%（30～90），淋巴細胞絕對值1.3×109（2～10），入院后給予抗炎，抗癆支持治療：INH 0.4g，1次/日，RFP 0.4g，1次/日，PZA 1.5g，1次/日，SM 0.759g，1次/日癥狀，緩解，無藥物不良反應，痊愈后出院。

討論

細菌細胞壁缺陷型（細菌L型），在某種情況下細胞壁肽聚糖結構可遭破壞，或當其合成受到抑制時，革蘭陽性菌細胞壁幾乎完全缺失，原生質僅被一層胞膜包繞，一般呈球形，稱原生質體^[2]。革蘭陰性菌經溶菌酶處理后，因其細胞壁中肽聚糖含量較少，且可保留某些或全部的外膜保護，內部滲透壓又比革蘭陽性菌低，故形成一種對低滲環境具有一定抵抗力的圓球體，或稱原生質球^[3，4]。

痰是病理產物，主要是肺、支氣管和氣管內的炎性分泌物。咳嗽的患者采集痰標本，主要目的是為了檢查，進行病原菌的鑒定，并有助于診斷和治療。我們知道，肺結核患者痰中能否找到L型細菌，除痰中含菌量大小外，正確留取痰標本的方法是：在留痰之前先用清水漱口數次，以清除口腔內的食物殘渣及部分雜菌。留取的痰應是用力咳嗽后自氣管內咳出的痰，然后盛于痰盒內送檢。不要將唾液或鼻涕吐入痰盒，以免影響查痰結果。初次就診需查痰，醫生要求送3個痰標本：即時痰：就診當時咳出的痰；夜間痰：前1天晚間咳出的痰；清晨痰：起床后深咳吐出的痰，其中以清晨第1次咳出的痰效果最好^[5]。應采集12～24小時內的痰液。測定24小時痰量或觀察分層情況時，容器可加少量石炭酸防腐。用于細菌培養的標本，必須無菌采集，并先用無菌水漱口，以避免口腔內正常菌的污染。為了防止痰液污染，用過的標本應滅菌后再處理^[6]。本文通過痰檢驗結果顯示，本文1例患者是多次抗癆治療，抗癆藥物中異煙肼對細胞壁的合成有抑制作用，這給L型細菌的形成提供了條件，但是經過痰涂片抗酸染色沒有發病病原菌，通過將痰液消化處理，接種于培養L型細菌的7H9高滲半固體發現了L型細菌。

總之，用高滲半固體培養基可以從臨床痰標本中分離出結核分枝桿菌L型菌株，表明痰標本在細菌學檢驗中仍有一定的價值。

參考文獻

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