淫羊藿總黃酮對雌性小鼠性器官及相關激素的影響

摘 要 目的:研究淫羊藿總黃酮(TFE)對雌性小鼠性器官及垂體-性腺軸相關激素的影響。方法：正常昆明種雌性幼齡小鼠48只，隨機分成生理鹽水組、乙烯雌酚組、淫羊藿總黃酮低劑量組與淫羊藿總黃酮高劑量組，經口給予TFE 6天，于第7天處死動物。取性腺和附性器官稱重以計算其臟器系數，觀察小鼠體重變化，放免法測定其雌二醇(E2)、促卵泡生成素(FSH)、促黃體生成素(LH)濃度。結果：給予TFE即可顯著提高雌性小鼠子宮的臟器系數及體重系數，高劑量TFE作用較低劑量TFE強；TFE連續給予6天可顯著提高雌鼠血清提高其E2水平，而FSH、LH水平在6天內無顯著變化。結論：淫羊藿總黃酮能刺激小鼠子宮發育，促進其體重增長，改變其血清E2激素水平，具有一定的植物雌激素活性。

關鍵詞 淫羊藿 黃酮 子宮增重 雌性激素 垂體-性腺軸

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.14.002

女性進入絕經期后，體內雌激素水平下降，卵巢功能衰退，出現更年期綜合征，某些疾病的發病率也隨之上升，如常見的骨質疏松、心血管疾病、老年性癡呆等。而雌激素替代療法［1］雖然可明顯緩解上述癥狀，但長期服用易產生一些嚴重的不良反應，如高血凝狀態、高血壓、水腫、癡呆，并會增加乳腺癌及子宮內膜癌等婦科腫瘤的發病危險。因此，人們一直在尋求雌激素替代物，期望這種替代物既能發揮雌激素對心腦血管等系統的保護作用，緩解更年期綜合征；同時又能避免上述的一些不良反應，植物雌激素正是其中的重要一類。

淫羊藿為傳統的補腎壯陽中藥，因其獨特的化學成分和顯著的生物活性一直是國內外研究的熱點之一。各種淫羊藿均以黃酮為主要成分［3］。淫羊藿的雌激素樣作用是否是通過淫羊藿總黃酮所發揮的，在體內如何發揮雌激素樣作用，與劑量是否具有相關性。為此，本實驗擬通過體內試驗了解淫羊藿總黃酮對雌性小鼠性腺、附性器官和相關激素的影響。希望能進一步確定中藥淫羊藿的雌激素樣作用，并初步揭示其作用機理，為進一步開發利用淫羊藿這一傳統中藥材提供一定的依據。

資料與方法

實驗動物：昆明種小鼠48只，雌性，出生后20天(剛斷乳)，體重9～12g，購自河南省實驗動物中心。實驗期間飼喂在二級動物室，溫度25±1℃。

藥物與試劑：淫羊藿總黃酮提取物，購自鄭州市東明路本草國藥館。實驗時用雙蒸水溶解，濃度為每毫升含033g生藥。陽性藥物為乙烯雌酚(北京益民藥業有限公司生產)，配制成20mg/L的懸濁液。雌激素(E2)、黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)酶聯放免試劑盒購自尚柏生物技術公司。生理鹽水、雌二醇放免試劑盒，天津市協和醫藥科技有限公司產品；黃體生成素放免試劑盒、卵泡生成素放免試劑盒，美國phoenix公司產品。

儀器：γ-免疫計數器；BS210S型分析天平(北京賽多麗斯天平有限公司)；普通手術器械。

分組與給藥：將實驗動物幼齡雌性昆明小鼠(21天齡)48只，隨機(按體重區組隨機分組法)分成4組，即空白對照組、乙烯雌酚陽性對照組、淫羊藿總黃酮低劑量組、淫羊藿總黃酮高劑量組，每組12只。實驗動物到達后適應性飼養6天，開始實驗。陽性藥對照組每天按35mg/kg給予乙烯雌酚；淫羊藿低劑量組和高劑量組分別按114g/kg、342g/kg給予淫羊藿總黃酮溶液；空白對照組給予等體積生理鹽水。灌胃分早、晚2次進行，持續給藥6天。

取材、稱重：每2天稱一次體重；各組動物于最后一次給藥30分鐘之后用小鼠自主活動儀測定小鼠自主活動；末次給藥結束后禁食，12小時后摘眼球取血，4℃，2000r/分，離心10分，小心分離血清，-20℃貯存備用；24小時后斷頸處死后迅速剖開腹腔，分離出肝、腎、脾、子宮等器官立即用分析天平分別稱取濕重。計算子宮系數，即子宮濕重/體重×100%，并計算給藥前后體重變化率。

血清性激素水平測定：采用放免試劑盒檢測小鼠血清E2、LH、FSH水平。

統計學處理：均用X±S表示，應用Excel進行數據處理，用t檢驗進行統計學分析。

結 果

淫羊藿總黃酮對性未成熟小鼠體重的影響：淫羊藿總黃酮342g/kg灌胃給予3天即可使雌性小鼠體重明顯增加，但3天后，體重增長速度減慢，而114g/kg作用稍弱。見表1。

淫羊藿總黃酮對小鼠臟器指數的影響：淫羊藿總黃酮34g/kg灌胃給予6天可使雌性小鼠子宮的臟器系數明顯提高，而114g/kg作用較弱；淫羊藿總黃酮可明顯降低小鼠肝的臟器指數，且高劑量組與低劑量組作用相當；淫羊藿總黃酮，對小鼠腎、脾的影響不明顯。見表2。

淫羊藿總黃酮對小鼠自主活動的影響：淫羊藿總黃酮低劑量組使小鼠的行為學指數顯著降低，其作用與乙烯雌酚組作用相當；高劑量組可使小鼠行為學指數發生較大增長。見表3。

淫羊藿總黃酮對小鼠血清指標的影響：對雌性小鼠，淫羊藿總黃酮342g/kg連續給予6天可顯著提高血清E2水平，其作用比淫羊藿總黃酮低劑量組強，比乙烯雌酚組弱。而各組小鼠血清中FSH、LH水平在6天內均未觀察到顯著變化。見表4。

討 論

從本實驗可以看出，淫羊藿總黃酮激素樣作用具有以下特點：①淫羊藿總黃酮發揮雌激素樣作用與劑量有關。劑量小的時候，血清激素水平升高較少，當達到一定程度的時候，雌激素水平會顯著升高。這一特點與植物雌激素的特點很相似。②當淫羊藿總黃酮劑量小的時候，能降低雌性小鼠的行為學指數，隨著劑量的增加，行為學指數增加，與劑量呈正相關。③淫羊藿主要是通過其所含總黃酮發揮雌激素樣作用。此外文獻研究中還表明，當淫羊藿與外源性雌激素聯用時，能顯著降低外源性雌激素的作用。

資料顯示植物雌激素如異黃酮植物雌激素能明顯促進動物的生長［2］。本實驗結果可見，用藥后雌性小鼠體重增幅顯著高于陰性對照組，提示淫羊藿總黃酮有生長促進作用。

另有研究發現，淫羊藿有拮抗雌激素的作用。金勛杰等［3］發現淫羊藿復方補骨膠囊可以對抗炔雌醇對子宮的刺激作用。許碧蓮等［4］發現淫羊藿提取物與雌激素組成的復方對去卵巢大鼠腰椎松質骨的作用比單用雌激素更強。淫羊藿提取物與乙烯雌酚合用組成復方淫羊藿組，大鼠子宮內膜厚度均小于單用乙烯雌酚組。說明在雌激素水平比較高的時候，淫羊藿能夠拮抗雌激素的作用。此外，雌激素生成的主要途徑是通過芳香化酶的作用，將雄激素變為雌激素，由于體內芳香化酶的轉化量是一定的，這一點可以解釋本實驗中隨著淫羊藿總黃酮劑量的增加，LH、FSH并沒有一直增加。

值得注意的是經口給予后在腸道即已基本代謝為icariside-Ⅱ，這也是其吸收入血的主要物質［5］，故上述體外試驗并不能作為淫羊藿具有直接刺激性激素分泌的佐證；而由于其可提高血清雌二醇水平，故其提高附性器官重量的結果也不能完全歸結為直接結合激素受體的擬性激素作用。同時，由于已有文獻報道淫羊藿可影響下丘腦和垂體的激素分泌，故其有可能作用于HPGA上游，進而表現性激素樣作用［6］。鑒于此，本研究將評估經口給予淫羊藿總黃酮對小鼠性腺及附性器官臟器系數的影響，進而采用其有效劑量初步研究不同給藥劑量對HPGA相關激素的影響及其相關性。本文研究結果顯示，淫羊藿總黃酮342g/kg灌胃給予6天可使雌性小鼠子宮的臟器系數明顯提高，提示在該劑量淫羊藿總黃酮不僅可通過性激素樣作用或促性激素分泌的作用提高附性器官重量，尚可提高雌鼠性腺本身重量，因而有可能作用于HPGA的上游器官。與同期對照相比，淫羊藿總黃酮連續給予6天可顯著提高雌鼠血清E2水平。該結果顯示淫羊藿總黃酮可促進促性腺激素的分泌。

近來植物雌激素作為人工合成雌激素的替代品，以其特有的安全性及顯著的療效，用于治療女性更年期綜合征，及骨質疏松等癥，受到越來越多的關注。通過本實驗發現，淫羊藿總黃酮的這些性質非常符合上述植物雌激素的特點，預示著淫羊藿總黃酮在植物雌激素的篩選方面具有巨大的潛在價值，值得深入的研究。

淫羊藿總黃酮能刺激小鼠子宮發育，促進其體重增長，改變其血清E2激素水平，具有一定的植物雌激素活性。由于給藥時間較短，且所設置的檢測點較為疏離，淫羊藿總黃酮影響兩類激素分泌的動態關系，以及是否通過影響更上游的GnRH分泌而形成該效應則有待深入研究。

參考文獻

1 劉文和，雷光華.淫羊藿的藥用成分、藥理作用及典型制劑中的鑒別研究進展［J］.湘南學院學報:自然科學版，2005，7(2):66-69.

2 宋澤遠，周維仁，樂國偉.異黃酮植物雌激素對動物生長的影響及其作用機制［J］.獸藥與飼料添加劑，2003，8(5):25-27.

3 金勛杰，吳鐵，李青南，等.補骨膠囊與17α-炔雌醇聯合用藥對大鼠骨質疏松的預防及對子宮刺激作用的研究［J］.中國骨傷，2003，16(5):272-274.

4 許碧連，吳鐵，崔燎，等.復方淫羊藿對去卵巢大鼠腰椎松質骨的影響［J］.中國老年學雜志，2006，26(2):232-234.

5 Qiu F，Chen YJ，Kano Y，et al.Metabolites of icariin in urine following Oral administration［J］.Chinese Chemical Letters，1998，9(4):393-395.

6 李波，安睿，王新宏.淫羊藿苷和補腎復方對腎陽虛大鼠下丘腦crh基因和垂體pomc基因表達的影響［J］.中成藥，2008，30(1):132-134.