熒光PCR檢測乙肝病毒DNA的臨床意義

乙型肝炎是一種由乙肝病毒(HBV)感染引起的傳染病。我國屬HBV感染高流行區，我國是乙肝攜帶者高于人群的10%。急性乙肝中有20%會轉為慢性，進而可能發展為肝硬化和肝癌，因此準確迅速診斷對乙肝的治療和預后顯得極為重要。熒光定量PCR技術把PCR、雜交及光譜技術相融合，達到了對原始模板量定量的目的。HBV-DNA是乙肝病毒的遺傳物質，HBV-DNA(PCR)是從血清中檢測HBV存在的靈敏而直接的方法。進一步證實HBV-DNA檢測在乙型肝炎早期診斷、傳染性識別、病毒復制水平判斷以及抗病毒藥物的選擇、治療效果以及監測的臨床價值。以285份血清標本分別用酶免法檢測乙肝兩對半和熒光定量PCR法檢測HBV-DNA，進行對比分析。

資料與方法

血清標本均取自2010年1月～2010年5月門診及住院患者，選擇其中285例臨床資料完整病例進行方法的靈敏性、實用性及臨床應用價值的探討，并通過綜合分析，對乙型肝炎血清標記物進行評價。

血清標本的采集：采用滅菌的一次性真空塑料管，清晨空腹抽取靜脈血5ml，離心分離血清，-20℃凍存備用，集中檢測。

試劑與方法：①測定方法：血清HBV-DNA測定采用FQ-PCR，實驗儀器Lightcycler20，檢測方法嚴格按照試劑盒說明書操作。②HBV免疫血清標志物用ELISA法檢測。采用酶標儀進行結果判斷，檢測方法嚴格按照試劑盒說明書操作。

結 果

用ELISA法分別對285例血清進行HBV兩對半檢測并依據檢測結果進行分組。見表1。

討 論

血清HBV標志物(HBVM)的檢測給臨床診斷乙肝病毒感染提供了較便捷的診斷依據。在臨床應用過程中發現由于病情的發展過程的結局的多樣性，尤其是肝功正常而體內確實有病毒復制者的治療中，定量PCR檢測HBVDNA為HBV感染及其療效的判定提供了一項重要指標。診斷乙型肝炎及了解病毒復制狀態的檢測指標主要包括兩部分：病毒DNA的表達物及其抗體應答系統；ELISA方法一直是臨床診斷HBV感染的傳統手段，它實際就是檢測病毒DNA的表達物及應答系統，直接探測PCR過程中熒光信號的變化，結果特異、準確。

第1組(俗稱大三陽)125例患者血清的HBV-DNA陽性率100%，血清的HBV-DNA平均含量753×108copy/ml，兩者的結果是相互關聯的，兩者具有相似的流行病學意義，同時也反映了HBV-DNA PCR定量檢測結果陽性率更高，更能直接體現HBV的復制過程。

第2組模式中128例血清的HBV-DNA陽性率524%，血清的HBV-DNA平均含量958×107copy/ml，從中可看出隨著HBeAg(陽性)轉變為HBeAg(陰性)，抗-HBe(陽性)的出現HBV-DNA的陽性率大為減低，但HBV-DNA的平均含量與第1組差異有統計學意義(P＜005)，反映出HBV-DNA較ELISA這一模式特異性更強，敏感性更高，更能直接反映HBV-DNA復制水平。

第3組模式中32例血清的HBV-DNA陽性率518%，血清的HBV-DNA平均含量774×107copy/ml，說明HBeAg(陰性)與血清HBV-DNA含量的變化并不一致，因此不能僅為ELISA法測定血清HBeAg(陰性)就確定HBV在體內無復制現象，而要用敏感性較高的PCR檢測HBV-DNA含量水平，才能更確切地判斷HBV復制狀況，更好的服務于臨床。

乙型肝炎病毒(HBV)感染人體是一個連續動態的過程，用ELISA法檢測免疫標志物(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)可在一定程度上反映病毒是否處于復制狀態，但是不可避免地具有一定的局限性，而PCR法檢測HBV-DNA含量水平能直接體現HBV復制過程，敏感性更強，特異性更高。探討血清HBV-DNA與免疫標志物的相關性、符合性和補充性，從而進一步證實HBV-DNA檢測在乙型肝炎早期診斷、傳染性識別、病毒復制水平判斷以及抗病毒藥物的選擇、治療效果以及監測的臨床價值。