3種隱血試驗(yàn)方法學(xué)的評價(jià)

本論文是將改良的匹拉米洞化學(xué)法、血紅蛋白膠體金法、轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金法3種方法進(jìn)行比較和評估，主要是為臨床醫(yī)生和試驗(yàn)人員在分析隱血試驗(yàn)結(jié)果時(shí)提供參考。

資料與方法

實(shí)驗(yàn)對象：實(shí)驗(yàn)標(biāo)本來自天津市泰達(dá)醫(yī)院體檢中心、天津市第三中心醫(yī)院及天津市腫瘤醫(yī)院的被檢者。正常對照組100例，男53例，女47例，年齡29～56歲，為健康的體檢者；上消化道出血確診人群44例，男24例，女20例，年齡44～78歲；下消化道出血的確診人群56例，男26例，女30例，年齡54～91歲。

實(shí)驗(yàn)方法：各種檢測方法的操作按試劑盒說明書進(jìn)行。每1份標(biāo)本在相同條件下用3種方法檢測，記錄測定結(jié)果，用于對比分析。

結(jié)果

用蒸餾水和抗凝的新鮮全血配制一定濃度的血紅蛋白溶液，用3種方法進(jìn)行靈敏度的檢測。見表1。

血紅蛋白膠體金法和轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金法靈敏度幾乎相同，而化學(xué)法敏感性相對較低。

構(gòu)建量化模型標(biāo)本。見表2。

血紅蛋白濃度0mg/L，結(jié)果均為陰性，說明pH不對其產(chǎn)生影響。血紅蛋白濃度相同時(shí)，pH不同時(shí)發(fā)生了變化，且pH越小（酸度越大）影響越大。

血紅蛋白膠體金法檢測結(jié)果。見表3。

血紅蛋白濃度14000和7000由于濃度太高產(chǎn)生后代現(xiàn)象，但酸度越大影響越小，說明鹽酸破壞部分血紅蛋白。

轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金法檢測結(jié)果。見表4。

轉(zhuǎn)鐵蛋白在pH 1～5時(shí)與空白對照（蒸餾水）相比均受到影響，但與血紅蛋白膠體金法，影響有所減小。

健康體檢者和內(nèi)鏡確診的消化道出血患者糞便標(biāo)本結(jié)果。見表5。

試驗(yàn)結(jié)果與臨床診斷對比分析。見表6和表7。

討論

從以上結(jié)果可以看出，化學(xué)法對血紅蛋白的檢出最低濃度10mg/L，而血紅蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金法靈敏度比化學(xué)法高得多，其檢出最低濃度為0.2mg/L，最高檢出濃度可達(dá)2000mg/L，當(dāng)人血紅蛋白濃度>2000mg/L時(shí)，測試結(jié)果出現(xiàn)假陰性，與楊新原等¹報(bào)道的膠體金法檢測便隱血的后帶現(xiàn)象相符。這種現(xiàn)象主要是由免疫學(xué)中抗原抗體反應(yīng)的原理引起的。其原理基于免疫學(xué)抗原抗體反應(yīng)，亦遵循pH抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)，抗原抗體比例合適反應(yīng)最充分。若抗原極度過剩則無反應(yīng)物形成，稱為后帶現(xiàn)象。過量大出血糞便中血紅蛋白濃度過高，致使反應(yīng)體系抗原過剩，便隱血試驗(yàn)出現(xiàn)假陰性

結(jié)果。化學(xué)法試劑屬匹拉米洞法，利用匹拉米洞當(dāng)作呈色指示劑，在酸及過氧化氫（H2O2）的作用下，與血紅蛋白反應(yīng)，產(chǎn)生經(jīng)鹽酸作用過的血紅蛋白對改良的匹拉米洞化學(xué)法、血紅蛋白膠體金法、轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金法與蒸餾水相比均受到影響。產(chǎn)生這種結(jié)果的原因有兩個(gè)：pH紫藍(lán)→紫紅的顏色。

的影響或（和）鹽酸本身的影響。鹽酸為酸性物質(zhì)，對于抗原抗體的結(jié)合可能有一定的影響，將表中各管各取出一部分加入適量NaHCO3粉劑，調(diào)整各管至中

性（用pH值試紙測），再用3種方法進(jìn)行檢測，結(jié)果不發(fā)生改變。調(diào)整了pH值后結(jié)果仍與沒有調(diào)整pH值前的結(jié)果相同，說明不是pH過低影響的，而是鹽酸破壞了的抗原結(jié)構(gòu)造成的，這種破壞是不可逆性的。通常所謂的胃酸即指鹽酸，其分泌濃度約150mmol/L，在胃液和食物等其他物質(zhì)混合后有所下降²。正常胃液的pH值0.9～1.8。所以檢測嘔吐物和胃液隱血時(shí)，也應(yīng)考慮到胃液中酸性成分的影響，最好采用化學(xué)法測定。

健康人對照組在正常飲食情況下留取糞便標(biāo)本，血紅蛋白膠體金法、轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金法、Hb、Tf聯(lián)合檢測法陽性均為1例，檢出率1%，而化學(xué)法檢出9例（含與其他3種方法重疊陽性1例）。經(jīng)隨訪得知，該患者留取糞便前一天鼻出血，部分血液吞咽入胃。其他8例陽性者，與正常入食的肉類、蔬菜相關(guān)聯(lián)，屬于假陽性。本組約有半數(shù)消化道出血患者糞便隱血未被檢出。其原因可能有：①糞便中血紅蛋白含量太高，出現(xiàn)“后帶現(xiàn)象”，造成假陰性結(jié)果；②出血后，紅細(xì)胞在腸道停留時(shí)間久，血紅蛋白被消化酶降解或被細(xì)菌充分分解消化，使其免疫原性喪失；③患者血紅蛋白的抗原與單克隆抗體不匹配的原因³。轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金法：44例上消化道出血患者糞便隱血34例陽性，檢出率77.3%；56例下消化道出血患者糞便隱血檢出44例陽性，檢出率78.6%。聯(lián)合檢測上、下消化道出血患者糞便檢出率分別為86.4%、89.3%。研究表明轉(zhuǎn)鐵蛋白與糞便混懸液在37℃孵育4小時(shí)后⁴，其抗原性無明顯改變，而血紅蛋白抗原活性已喪失65%，由此可見轉(zhuǎn)鐵蛋白在腸道內(nèi)抗菌能力強(qiáng)，自身穩(wěn)定性高于血紅蛋白⁵，還可以克服被檢標(biāo)本中的血紅蛋白在胃腸道內(nèi)滯留時(shí)間過長而被分解或破壞，使其失去原有的免疫原性而出現(xiàn)的“假陰性”結(jié)果，因此，轉(zhuǎn)鐵蛋白膠體金法是提高消化道出血檢出率的良好指標(biāo)。

由于糞便混有血液與檢測其他液體中的血紅蛋白有所不同，因此欲獲得高符合率結(jié)果，必須遵照操作規(guī)程和說明書使用，在糞便樣本的多部位或多次取樣。從而提高消化道出血、消化道腫瘤病變及潰瘍出血的檢出率，為臨床提供其準(zhǔn)確可靠出血診斷依據(jù)，但臨床仍需綜合相關(guān)檢查及患者的臨床癥狀對消化道的出血作出準(zhǔn)確判斷。

參考文獻(xiàn)

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2黃彩英，苗春生，車欣.膠體金法檢測便隱血的后帶現(xiàn)象[J]. 標(biāo)記免疫分析與臨床，2008，15（1）：60-61.

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