老年HBV感染者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化

機(jī)體感染HBV后，誘發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)間接損傷肝細(xì)胞［1］，免疫反應(yīng)主要由T淋巴細(xì)胞完成。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)老年HBV感染者外周血T淋巴細(xì)胞亞群在不同組間的變化。資料與方法

健康志愿者20例，年齡50～68歲；HBV攜帶25例，年齡52～72歲；慢乙肝28例，年齡51～67歲。均符合2000年西安會(huì)議所修訂的病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除合并其他肝炎的存在。

主要試劑和儀器：流式細(xì)胞儀及試劑，全自動(dòng)血液分析儀。

方法：清晨空腹靜脈血，分別進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類及淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)。樣品測(cè)定管，EDTAK3抗凝，加入10μl TRITESTCD4FITC/CD8PE/CD3PerCP，再加入50μl抗凝血，振蕩混勻，室溫避光20分鐘。加入1ml溶血素，振蕩混勻，室溫避光10分鐘。1500r/分離心5分鐘，棄上清液。加入1ml PBS，1500r/分心5分鐘離鐘，棄上清液，重復(fù)1次，加入450μl PBS，流式細(xì)胞儀分析。將白細(xì)胞計(jì)數(shù)和淋巴細(xì)胞百分比相乘，得出淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。CD3+，CD4+，CD8+細(xì)胞計(jì)數(shù)為淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)與各自百分比的乘積。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件分析，T淋巴細(xì)胞百分率用(X±S)，組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)。

結(jié)果

慢乙肝組CD4+/CD8+百分率比值比另兩組降低(P＜0.05)；慢乙肝組CD8+百分率比另兩組升高(P＜0.05)；而HBV攜帶組CD4+/CD8+百分率比值、CD8+百分率與對(duì)照組有差異，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

各組間CD4+百分率，CD3+百分率無顯著性差異(P＞0.05)。

討論

乙肝病毒的活動(dòng)受到機(jī)體免疫系統(tǒng)的控制，innate和adaptive以及病毒變異的過程是非常復(fù)雜的。免疫系統(tǒng)漠視病毒的存在，保持免疫耐受狀態(tài)時(shí)是一個(gè)免疫平衡；免疫系統(tǒng)強(qiáng)大到控制病毒又是另一個(gè)平衡；而雙方反復(fù)搏斗的過程就會(huì)造成肝臟損傷。

細(xì)胞免疫在HBV清除中起主導(dǎo)作用，執(zhí)行者是T淋巴細(xì)胞，CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞是其主要亞群，CD4+T細(xì)胞水平和功能下降將導(dǎo)致細(xì)胞免疫低下。CD8+T細(xì)胞分為幼稚型和效應(yīng)/記憶型，CTL是其效應(yīng)階段，是細(xì)胞免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞［2］，特別是在抗病毒及胞內(nèi)感染的作用尤為明顯。迄今的研究認(rèn)為急性HBV感染時(shí)，CD8+T細(xì)胞在病毒的清除中起主要作用，這可能是HBV感染后免疫清除期的免疫病理機(jī)制。慢性HBV感染時(shí)，CTL數(shù)量不足及功能缺陷導(dǎo)致機(jī)體不能及時(shí)清除病毒，感染得以持續(xù)，以往一些研究也說明了這一點(diǎn)。

本實(shí)驗(yàn)室無法檢測(cè)HBV特異CD8+CTL，通過檢測(cè)CD8+T細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，慢乙肝組CD4+/CD8+百分率比值比另兩組降低(P＜0.05)；CD8+百分率比另兩組升高(P＜0.05)；與文獻(xiàn)報(bào)道是一致的，提示了老年慢乙肝患者體內(nèi)存在CD8+T細(xì)胞功能障礙，根據(jù)特異性CD8+T細(xì)胞在HBV清除中的重要作用，不難判斷老年慢乙肝患者存在特異性CD8+T細(xì)胞功能障礙；HBV攜帶組CD4+/CD8+百分率比值比對(duì)照組略低、CD8+百分率比對(duì)照組略高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；各組間CD4+百分率，CD3+百分率無顯著性差異(P＞0.05)。李夢(mèng)東等曾報(bào)告［3］，CD4+百分率在各型肝炎均有下降，CD4+/CD8+百分率比明顯下降，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致。這可能與實(shí)驗(yàn)的方法、試劑及病例不同有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)CD4+，CD3+百分率在3組間無顯著性差異，說明老年HBV感染者的成熟T細(xì)胞總量無明顯改變，與李玲報(bào)導(dǎo)慢乙肝患者外周血T淋巴細(xì)胞總數(shù)可無變化相一致［4］。

通過本實(shí)驗(yàn)可發(fā)現(xiàn)老年慢乙肝患者體內(nèi)存在CD8+T細(xì)胞免疫功能障礙，尤其是特異性CD8+T細(xì)胞存在功能缺陷，這也可能是HBV感染慢性化的主要免疫病理機(jī)理，這為對(duì)乙肝患者進(jìn)行特異性的免疫治療提供了理論依據(jù)。如何使其獲得具有正常功能的CD8+T細(xì)胞，是以后在乙肝治療方面的研究方向。

參考文獻(xiàn)

1 駱抗先.乙型肝炎基礎(chǔ)與臨床.北京:人民衛(wèi)生出版社，2001.

2 龔非力.醫(yī)學(xué)免疫學(xué).北京:科學(xué)出版社，2004:151-152.

3 李夢(mèng)東.實(shí)用傳染病學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社，1998.

4 李玲，顧長海.慢性乙型肝炎PBMC凋亡及淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè).中國免疫學(xué)雜志，2001，11.