樹突狀細胞和記憶T淋巴細胞浸潤在進展期胃癌組織中的分布特征及與預后的關系

摘要目的：分析進展期胃癌患者局部樹突狀細胞（DC）和記憶T淋巴細胞的分布、數量、狀態等與預后的關系。方法：采用免疫組化方法檢測194例進展期胃癌組織中DC、記憶T淋巴細胞的浸潤數量及分布，分析其與患者預后的關系。結果：進展期胃癌組織內浸潤DC的數量、浸潤CD45RO+T淋巴細胞數量與臨床病理因素間存在顯著相關性。胃癌組織中DC浸潤數量與記憶T淋巴細胞浸潤數量顯著相關（P<005）。DC與記憶T淋巴細胞兩者浸潤多的患者術后生存率相對較高（P<005）。多因素生存分析顯示，DC浸潤數量（P=0000；OR0916；95%CI0886～0946）可作為影響預后的獨立因素。結論：進展期胃癌中DC和記憶T淋巴細胞的分布、數量與患者臨床病理特征及預后具有相關性，對臨床具有一定的指導意義。

關鍵詞進展期胃癌樹突狀細胞免疫組織化學

doi：10.3969/j.issn.1007—614x.2012.27.093

腫瘤發展的免疫因素在于人體正常狀態下存在的強大的免疫監視功能發生缺陷或缺失，導致腫瘤持續發展，人們嘗試用樹突狀細胞（DC）疫苗或用細胞因子治療，刺激或改變DC的生成、遷移和功能來治療腫瘤_[1]。本研究通過檢測進展期胃癌患者局部DC和記憶T淋巴細胞的分布、數量、狀態等，分析其與預后的關系，為深入評價胃癌局部免疫微環境與預后的關系提供理論依據，從而為研究DC介導的腫瘤免疫治療開拓新思路。

資料與方法

2010年1月～2012年5月收治進展期胃腺癌患者194例，均為首次發現胃癌，術前均未接受過放、化療等抗腫瘤治療，末次隨訪期為2012年6月。其中男126例，女68例，年齡17～74歲，平均505歲。術后1、3、5年生存率分別為832%、541%、398%。腫瘤的分期和分級依據2010年AJCC胃癌TNM分期（第7版）標準，病理分期均為進展期。所有標本均經HE染色證實。

試劑與方法：采用免疫組織化學S—P法，胃癌石蠟包埋標本制成4um厚的切片，經常規脫蠟后，30ml/LH，2O.2置微波爐低火3分鐘，阻斷低火3分鐘，阻斷內源性過氧化物酶活性，蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘，浸于001mol/L枸櫞酸溶液（pH60），微波爐中火15分鐘進行抗原修復。滴加一抗，37℃孵育1小時，PBS沖洗3次，滴加辣根過氧化物酶標記的二抗，37℃孵育30分鐘，PBS沖洗3次，DAB顯色，自來水充分沖洗，復染，封片。顯微鏡采用BH2Olympus顯微鏡。

指標觀察：S—100+DC通過比較HE染色切片，低倍鏡下選取DC密集區，在高倍鏡（×400）下計數lO個視野中S—100+DC總數，取均值。CD45RO陽性細胞胞膜或胞漿呈棕褐色，體積較小，通過比較HE染色組織片，低倍鏡下選取淋巴細胞密集區，取5個高倍（×400）視野用LEIVAQwinLive型圖像分析儀測定CD45RO+T淋巴細胞的平均面積，求總和。

統計學處理：采用SPSS140統計軟件包統計分析，局部免疫活性細胞的浸潤數量以平均數表示，運用單因素Kaplan—Meier生存分析、多因素Cox生存分析模型、秩和檢驗分析局部免疫活性細胞與預后的相關因素。檢驗水準α=005。

結果

局部免疫細胞的形態、分布和數量：S—100+DC的形態、分布和數量：免疫組化檢測結果分析顯示，胃癌組織內浸潤DC的數量與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、腫瘤分化程度等因素無關；在不同患者年齡、性別間未見顯著性差異。在不同腫瘤腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移、TNM臨床分期間差異有顯著性，相關分析顯示浸潤DC的數量與淋巴結轉移、浸潤深度、TNM分期呈顯著負相關。

CD45RO+T淋巴細胞的形態、分布和數量：免疫組化檢測結果分析顯示，胃癌組織內浸潤CD45RO+T淋巴細胞數量在不同患者年齡、性別、分化程度、不同腫瘤大小間未見顯著性差異。在淋巴結轉移、浸潤深度、TNM分期間差異有顯著性，見表1。

胃癌組織中S—100+DC浸潤與CD45RO+T淋巴細胞的相關性免疫組化染色發現，DC分布多與淋巴細胞伴行，在淋巴細胞成簇區DC浸潤也多而密集。經Spearman相關分析，顯示胃癌組織中S—100+DC浸潤數量與CD45RO+T淋巴細胞浸潤數量顯著正相關（P<0.05）。

免疫活性細胞與預后的關系：影響進展期胃癌患者術后生存率的單因素分析運用單因素生存分析，將可能影響患者預后的臨床病理資料逐一分析，發現淋巴結轉移、浸潤深度、DC及記憶T淋巴細胞浸潤數量將可能影響預后（P<0.05）。

討論

樹突狀細胞（DC）是功能最強大的抗原呈遞細胞（APC），在腫瘤特異性應答的啟動、程序和調控中均發揮中心性的關鍵作用，目前尚未全面理解DC亞群在抗腫瘤免疫中的功能和意義。在腫瘤微環境中，腫瘤細胞分泌的多種抑制性細胞因子通常不利于DC的成熟與活化，則DC不能充分活化腫瘤特異性CD4+和CD8+T細胞_[2]。

有研究表明DC可以誘導出特異性抗腫瘤保護效應。Tsukayama等研究顯示_[3]，腫瘤組織內DC浸潤程度與預后有關，浸潤DC數量越多，預后越好。CD45RO是記憶T淋巴細胞的特征性標志，CD45RO+T淋巴細胞數量減少，也就是記憶T淋巴細胞減少。當記憶T淋巴細胞減少后。一方面機體通過記憶T淋巴細胞誘導針對腫瘤的免疫應答作用減弱，即對腫瘤的殺傷作用減弱；另一方面，腫瘤細胞通過抑制記憶T淋巴細胞的表達。有利于腫瘤逃避宿主的監視，使癌細胞易于發生浸潤和轉移。這與該實驗得出的結果一致。

本研究聯合檢測進展期胃癌組織中浸潤的樹突狀細胞和記憶性T細胞，分析其中免疫活性細胞的類型、數量與患者臨床病理特征及預后的關系，進一步了解胃癌局部免疫活性細胞的功能，可以為胃癌，尤其是本地區進展期胃癌臨床治療策略與方案的選擇以及預后提供實驗依據。

參考文獻

1王琪，林蘋.腫瘤浸潤性樹突狀細胞的研究進展[J].中國癌癥雜志，2005，15（2）：185.

2湯釗猷.現代腫瘤學[M].上海：復旦大學出版社，2011：94.

3TsukayamaS，OmuraK，YoshidaK，etal.PrognosticvalueofCD83positivematuredendriticcellsandtheirrelationtovascularendothelialgrowthfactorinadvancedhumangastriccancer[J].OncolRep，2005，14（2）：369—375.