對國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光法孕酮檢測試劑的評價

摘要目的：對國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光法孕酮檢測試劑進(jìn)行評價。方法：選取標(biāo)本40份，檢測國產(chǎn)試劑的靈敏度、標(biāo)準(zhǔn)曲線線線性、特異性、重復(fù)性、稀釋回收率及與進(jìn)口化學(xué)發(fā)光孕酮檢測試劑的進(jìn)行比較并綜合分析。結(jié)果：國產(chǎn)試劑檢測的靈敏度0.09ng/ml，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性0.9990，與孕酮類似物睪酮（20ng/ml）、雌二醇（1000pg/ml）無交叉反應(yīng)性，3次測定標(biāo)本的變異<10%，稀釋高值標(biāo)本的回收率85%～110%，與進(jìn)口化學(xué)發(fā)光試劑的相關(guān)性良好，相關(guān)系數(shù)r2=0.9790，P<0.001。結(jié)論：被評價化學(xué)發(fā)光孕酮檢測試劑結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

關(guān)鍵詞化學(xué)發(fā)光法孕酮試劑

doi：10.3969/j.issn.1007—614x.2012.27.186

孕酮（4—孕烯—3，20—二酮）是一個C21類固醇激素，分子量314.5。孕酮是人體內(nèi)分泌的一種重要的性激素，未孕女性的孕酮主要由黃體分泌，孕婦則主要由胎盤分泌。男女兩性的腎上腺皮質(zhì)及男性的睪丸也分泌少量孕酮_[1]。孕酮的異常分泌與經(jīng)前期緊張、子宮內(nèi)膜的不規(guī)則脫落、痛經(jīng)及黃體功能不全有關(guān)。血清孕酮濃度的測定在臨床上用于判斷有無排卵及未孕女性的黃體功能，對鑒別診斷宮內(nèi)早早孕、先兆流產(chǎn)、難免流產(chǎn)及異位妊娠有重要價值_[2]，對判斷男性生殖功能狀態(tài)也有一定作用。鄭州安圖生物生產(chǎn)的化學(xué)發(fā)光孕酮檢測試劑，采用競爭抑制法，在固相微孔板上包被羊抗鼠IgG的二抗，操作時將特異性抗孕酮抗體溶液、HRP標(biāo)記的孕酮溶液和血清樣本一起加入到微孔板內(nèi)，室溫孵育60分鐘后，經(jīng)過清洗，加入化學(xué)發(fā)光底物，在檢測儀上進(jìn)行讀數(shù)，檢測信號值與血清標(biāo)本中的孕酮含量成反比。本文對該試劑的靈敏度、標(biāo)準(zhǔn)曲線線性、特異性、重復(fù)性、稀釋準(zhǔn)確性進(jìn)行檢測評價并與進(jìn)口貝克曼化學(xué)發(fā)光孕酮檢測試劑進(jìn)行比較并綜合分析_[3]。現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報告如下。

資料與方法

隨機(jī)抽樣送檢血清標(biāo)本40份，—20℃保存。

儀器：LUMO化學(xué)發(fā)光儀、IWO洗板機(jī)，DXI800化學(xué)發(fā)光儀。

試劑：孕酮發(fā)光定量檢測試劑盒，DXI800配套試劑。

方法：靈敏度計算，測定20份0值標(biāo)準(zhǔn)品，計算測定發(fā)光信號值的（x±S），靈敏度=（x±S）回算的濃度值；特異性計算，測定睪酮（20ng/ml）、雌二醇（1000pg/ml），回算濃度值；重復(fù)性，3次測定同3份血清標(biāo)本，計算其3次測定結(jié)果的變異系數(shù)CV%；稀釋回收率，用稀釋液稀釋兩份高值標(biāo)本，回收率=實(shí)測值/理論值×100%。操作嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行，試驗(yàn)標(biāo)本收集后，—20℃保存，室溫復(fù)溶后統(tǒng)一測定。

統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS10.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。

結(jié)果

靈敏度、標(biāo)準(zhǔn)曲線線性：國產(chǎn)孕酮檢測試劑的靈敏度較高，滿足臨床需求，用logit—log的曲線擬合方式對標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行線性擬合R20.995以上。

特異性：特異性即交叉反應(yīng)性，睪酮含量20ng/ml，雌二醇含量1000pg/ml時孕酮測定結(jié)果為0.10ng/ml和0.15ng/ml，相當(dāng)于與20ng/ml的睪酮和1000pg/ml的雌二醇交無交叉反應(yīng)。

重復(fù)性：3份血清標(biāo)本，進(jìn)行3次測定，3份標(biāo)本的變異系數(shù)分別為8.64%、4.57%、5.60%，均<10%。

稀釋回收率：把兩份血清標(biāo)本用稀釋液倍比稀釋后，測定其孕酮含量，各稀釋比的測定稀釋回收率85%～110%。

被評價試劑與對比試劑檢測結(jié)果的比較：對隨機(jī)抽樣的40份標(biāo)本用兩種試劑進(jìn)行同時測定標(biāo)本中孕酮含量，并將兩者測定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，r2=0.9790，直線回歸方程y=1.0067x+0.2636，P<0.001，兩者呈顯著相關(guān)性。

討論

臨床檢測血清孕酮的方法有放射免疫法、酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光法、電化學(xué)發(fā)光法、磁微粒化學(xué)發(fā)光法等。酶聯(lián)免疫法由于其靈敏度較低，已基本不再應(yīng)用。放射免疫法，存在著放射性核素污染，試劑保存期短等缺點(diǎn)，目前也較少有醫(yī)院使用。占主流的是化學(xué)發(fā)光法，相應(yīng)試劑和儀器主要有國產(chǎn)和進(jìn)口貝克曼、雅培、羅氏等，進(jìn)口試劑價格昂貴，本文旨在對國產(chǎn)試劑進(jìn)行評價，即能夠有較好的性能，滿足臨床應(yīng)用，又有較低廉的價格。本次評價的國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光試劑，是一種基于微孔板式化學(xué)發(fā)光方法。結(jié)果顯示，被評價的國產(chǎn)試劑的靈敏度0.09ng/ml，與20ng/ml的睪酮、1000pg/ml的雌二醇無交叉，三份標(biāo)本的重復(fù)測定結(jié)果變異系數(shù)分別為8.64%、4.57%、5.60%，均<10%，稀釋回收率85%～110%，與進(jìn)口對比試劑的相關(guān)系數(shù)r2=0.9790，P<0.001，表明該國產(chǎn)試劑在靈敏度、特異性、重復(fù)性、稀釋回收率等指標(biāo)上能滿足臨床測定的要求，與進(jìn)口對比試劑具有顯著的相關(guān)性和符合性。國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光孕酮檢測試劑既能滿足臨床需要又能符合國情降低患者負(fù)擔(dān)，在本院使用過程中，比較穩(wěn)定，值得進(jìn)一步推廣使用。

參考文獻(xiàn)

1楊鋼，主編.內(nèi)分泌生理與病理生理學(xué).天津：天津科學(xué)技術(shù)出版社，2000：465—572.

2來婷，蔣慶春.血清孕酮在鑒別宮內(nèi)早早孕、先兆流產(chǎn)、難免流產(chǎn)及異位妊娠的價值[J].中國臨床實(shí)用醫(yī)學(xué)，2007，1（3）：34—36.

3吳端宗，林國誠.ELISA測定血清LH、FSH的方法學(xué)評價[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2002，17（2）：15—16.