HIV初篩實驗室ELISA試驗的注意事項

目前實驗室作為HIV初篩檢測主要是HIV病毒抗體檢測。由于它的靈敏度和特異性高，而且方法相對簡單、成熟，更重要的是HIV抗體在病毒感染后，除早期短暫的窗口期外的整個生命期間長期穩定地存在并可被檢測到。

在HIV初篩實驗室，ELISA是常用的抗體篩查方法。ELISA是一種免疫測定，通常采用雙抗原夾心法。其原理為預包被高純度重組HIV（1+2型）抗原，可與樣品中抗HIV抗體反應，同時加入HRP標記HIV（1+2型）抗原，然后用TMB底物作用顯色。通過酶標儀檢測吸光度（OD值）從而判定樣品中HIV抗體的存在與否。

ELISA試驗的步驟對檢測結果有很大的影響，每個步驟均應認真負責才能充分發揮ELISA靈敏和特異的優點。如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。現將操作中各個環節中要注意的問題及解決辦法總結如下，以期提高試驗質量。

標本的采集和保存

在ELISA中標本可以是血清或血漿及其他體液，主要是血清和血漿，血清標本應及時檢測，應清亮、無溶血、無菌，無過多的脂質，溶血標本會因為紅細胞溶解時釋放出具有過氧化物酶活性的物質。抗凝不完全的標本因含有纖維蛋白原而造成假陽性，最好不用抗凝血尤其是用肝素抗凝劑。以HRP為標記的ELISA測定和細菌污染也會造成假陽性。一般來說1周內測定的標本可置于2～8℃（平均4℃），超過1周測定的需-20℃保存。若在冰箱中保存過久，可使本底加深。待測血清解凍后，應輕輕充分搖勻，且避免產生氣泡，標本應避免反復凍融，其后果會使效價下降，所以待測標本要多次檢測，最好少量分裝凍存。ELISA的靈敏度＞1ng/ml水平上，標本間要避免交叉污染，要注意同一標本先做免疫后做生化。

試劑的準備

主要是第三代ELISA試劑，第四代試劑也已逐步推廣，與第三代HIV-1/2試劑相比，檢出時間提前3～9.1天，其優點在于可以同時檢測抗原抗體，并縮短了窗口期檢測時間。選擇試劑不但要考慮靈敏度、特異性和精密度，還要注意穩定性、簡便性和安全性。可以參考上級部門對試劑的評價結果來選擇試劑，因為這具有權威性和公正性。

試劑從冰箱取出后應在室溫下放置一段時間后使用，良好的ELISA板應該是吸附性能好、空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間性能相近。在ELISA中最好使用試劑盒自帶的濃縮洗液，經1∶20稀釋后使用。