哈薩克民藥柯孜木克顆粒的抗炎作用機制研究

摘要 目的：探討新疆哈薩克族民族傳統醫藥柯孜木克顆粒的抗炎作用機制。方法：分別制作角叉菜膠、蛋清致小鼠足趾腫脹炎癥模型，并測定小鼠炎性組織中PGE2、組胺、5-羥色胺含量。結果：柯孜木克顆粒小、中、大劑量(400，800，1600mg/kg)對炎癥遞質PGE2有劑量依賴性的抑制作用(P＜0.05)。對蛋清致小鼠足趾腫脹炎癥模型小鼠炎性組織中組胺和5-羥色胺的釋放有不同程度的抑制作用(P＜0.01)。結論：柯孜木克顆粒可能通過抑制內源性炎性遞質PGE2組胺和5-羥色胺的釋放而發揮抗炎作用。

關鍵詞柯孜木克顆粒抗炎作用機制

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.18.001

Abstract Objective:To study the anti-inflammatory activity and the anti-inflammatory mechanisms of the KeZimu particle，a kind of traditional Kazakh medicine.Method:Edema in feet induced by carrageenan and egg albumen in mice，then determine the amount ofPGE2、Histame、5-HT.Results:Ke Zimuparticle showed inhibitions of inflammatory activities in PGE2 ，especially the large dose compared with saline group of statistically significant differences (P＜0.05).It can also reduce the amount of Histame、5-HT(P＜0.01).Conclusions:The mechanism of anti-inflammatory action of Ke Zimu particle has the obvious related to his reduction of PGE2、Histame、5-HT.

Key Words KeZimu particle;Anti-inflammatory effect;Mechanism

柯孜木克顆粒是新疆哈薩克民族傳統醫藥研究的驗方，組方為黑果越菊、沙生蠟菊、木賊三種藥材。據哈薩克醫學文獻記載及臨床研究結果證實，柯孜木克顆粒可用于尿道感染、膀胱炎、腎盂腎炎和腎病綜合征，前列腺肥大，小便不暢等，本課題對柯孜木克顆粒的抗炎作用作了系統的實驗研究，證實了其具有良好的抗炎作用。從炎性介質方面對其進行藥理作用機制研究，結果報告如下。

資料與方法

試劑與儀器：柯孜木克顆粒，角叉菜膠，新鮮蛋清，地塞米松，0.9%氯化鈉，酸化正丁醇，正庚烷，半胱氨酸5%，OPT鹽酸溶液0.004%，NaIO4溶液0.02%，熒光機，離心機，天平，剪刀，UV2501分光光度計，水浴鍋。

實驗動物：雄性Wistar大鼠，6～8周齡，50只，體重200±20g；BLAB/C小鼠80只，6～8周齡，體重20±2g；由新疆醫科大學實驗動物中心提供。

方法：①測定角叉菜膠致大鼠炎性足組織中PGE2含量：取雄性Wistar大鼠50只，體重分別為200±20g，隨機分為5組。即生理鹽水組、大劑量組(1600mg/kg)、中劑量組(800mg/kg)、小劑量組(400mg/kg)和地塞米松組(20mg/kg)。分組給藥柯孜木克顆粒組，未次給藥0.5小時后，各鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜膠0.1ml/只，從右后足掌心向掌跖關節方向進針，致炎，注射60分鐘、120分鐘、180分鐘、240分鐘后分別測量右后足的周長，記錄數據。各鼠注射致炎劑以后的后足周長減去正常的周長，即為各個時間的右后足腫脹度。末次測量足跖周長后處死大鼠，在踝關節上1cm處剪下炎性腫脹足跖，稱重，剪碎后加5ml生理鹽水研磨成勻漿液，離心，取上清夜0.1ml加0.5mol/L KOH-甲醇溶液2ml，在50℃異構化20分鐘，用KOH-甲醇溶液稀釋至20ml。用KOH-甲醇溶液作調零管，于波長278nm處測定其光密度(A)值。以每克組織相當的吸收光密度值表示PGE2的含量。測定PGE2的含量。②測定蛋清致小鼠炎性足組織中5-羥色胺含量：取BLAB/C小鼠40只，隨機分為5組。同上。給藥8天。末次給藥45分鐘，每只小鼠右后足皮下注射10%新鮮蛋清0.1ml。致炎后40分鐘沿踝關節處剪下致炎足，稱重，劃破皮膚后浸泡于酸化正丁醇２ml中2.5小時，再用超聲處理20分鐘，去掉致炎足，浸液離心。取上清液1.5ml，加入正庚烷3ml和0.1mol/L鹽酸1.2ml，振搖5分鐘，離心(3000r/分，5分鐘)后取水相5ml加入0.2ml5%半胱氨酸，再加0.004%的OPT鹽酸溶液6ml，混勻，并加入0.2ml 0.02%的NaIO4溶液，沸水浴10分鐘，在激發光波長365nm，發射光波長480nm下測定熒光強度，用熒光強度(int)表示炎性足組織中5-羥色胺的相對含量，比較給藥組和空白組5-羥色胺相對含量的差異。③測定蛋清致小鼠炎性足組織中組胺含量：取BLAB/C小鼠40只，隨機分為5組。同上。每天灌胃給藥1次，共8天。末次給藥后45分鐘，每只小鼠右后足皮下注射10%新鮮蛋清0.1ml。致炎后40分鐘沿踝關節處剪下致炎足，稱重，劃破皮膚組后浸泡于酸化正丁醇2ml中2.5小時，再用超聲處理20分鐘，去掉致炎足，浸液離心。取上清液1.5ml，加入正庚烷3mL和0.1mol/L鹽酸1.2ml，振搖5分鐘，離心(3000r/分，5分鐘)離心后取水相5mL，加入3ml三蒸水稀釋，再加0.4mol/L NaOH堿化，混勻，并迅速加入0.1%OPT溶液0.1ml，立即混勻，并在21～22℃反應1分鐘，然后加入0.5mol/L鹽酸1ml酸化以終止縮合反應，在激發光波長360nm，發射光波長440nm下測定熒光強度，用熒光強度(int)表示炎性足組織中組胺的相對含量(熒光法)，比較給藥組和空白組中組胺相對含量的差異。

結果

角叉菜膠所致大鼠炎性組織中PGE2含量測定結果：柯孜木克顆粒的各劑量對交叉菜膠誘發炎性介質PGE2均有抑制作用，其中高劑量組與生理鹽水組相比差異有統計學差異(P＜0.05)。見表1。

蛋清致小鼠炎性足組織中5-羥色胺含量測定結果：柯孜木克顆粒對蛋清致小鼠右后足炎性中炎性介質5-羥色胺均有抑制作用，其中，高劑量組與生理鹽水組相比差異有統計學差異。見表2。

蛋清致小鼠炎性足組織中組胺含量測定結果：柯孜木克顆粒對蛋清致小鼠右后足炎癥中炎性介質組胺均有抑制作用，其中高劑量組與生理鹽水組相比差異有統計學差異。見表3。

討論

柯孜木克顆粒是新疆哈薩克民族傳統醫藥研究的驗方，組方為黑果越菊、沙生蠟菊、木賊3種藥材。據哈薩克醫學文獻記載及臨床研究結果證實，柯孜木克顆粒可用于尿道感染、膀胱炎、腎盂腎炎和腎病綜合征，前列腺肥大，小便不暢等，也可用作全身強壯劑。而目前對其藥理作用均缺乏深入了解。

炎癥是機體對致炎因子的損傷所發生的一種以防御反應為主的基本病理過程。炎性介質是指在致炎因子作用下，由局部組織或血漿產生和釋放的、參與或引起炎癥反應的化學活性物質。主要的炎性介質有血管活性胺包括組胺和5-HT，花生四烯酸代謝產物包括前列腺素等。

前列腺素E2(PGE2)作為一種炎性因子，存在于炎癥組織中，可與緩激肽、白三烯等炎性介質起協同作用，引起血管擴張，加強組胺和緩激肽升高血管通透性的作用。通過抑制PGE2的合成，可以減輕炎性反應。在大鼠用角叉菜膠造成的炎癥模型中，柯孜木克顆粒對足趾腫脹度及炎性足的PGE2滲出都具有顯著的抑制效果。柯孜木克顆粒降低大鼠足趾角叉菜膠致炎組織中PGE2含量，說明它們的抗炎作用和抑制炎性介質PGE2的產生有關，其抗炎作用機理可能是通過抑制PGE2的合成，阻斷花生四稀酸的酶化作用實現的［1，2］。

血管活性胺類是細胞釋放的炎性介質，主要為組胺和5-羥色胺，它們是參與炎癥早期反應白組要炎性介質。其中5-羥色胺既是一種對各種組織有局部作用的自體活性物質，主要來源于血小板。給藥組和空白組小鼠炎癥組織中帶的5-羥色胺有明顯的差異，柯孜木顆粒對致炎組織中的5-羥色胺有明顯的抑制作用。說明柯孜木克顆粒的抗炎作用跟炎性介質5-羥色胺有關。

組胺主要存在于肥大細胞和嗜堿性粒細胞的顆粒中，由L2組胺酸經組胺酸脫羧酶(HDCO)的作用形成的，形成后的組胺與肝素結合，以顆粒的形式儲存在細胞內，在有免疫性刺激、化學性刺激或物理性刺激時，肥大細胞和嗜堿性粒細胞脫顆粒而釋放出組胺［3，4］。可通過舒張微血管平滑肌和毛細血管前括約肌和升高小動脈的通透性，使血管透性增加，血漿蛋白、紅細胞等從血管滲出，而引起炎癥局部充血或血漿外滲而發生水腫［5～7］。

本文用在體實驗炎癥模型發現柯孜木克顆粒小、中、大劑量(400，800，1600mg/kg)對炎性遞質PGE2有劑量依賴性的抑制作用(P＜0.05)。本研究使用熒光法測量蛋清性足腫脹滲出液中的5-羥色胺和組胺的含量，結果表明，柯孜木克顆粒能夠明顯的抑制足腫脹，減少滲出液中5-羥色胺和組胺的含量，說明柯孜木克顆粒主要是通過抑制內源性炎性介質5-羥色胺和組胺的釋放，而發揮抗炎作用。

綜上所述，柯孜木克顆粒在體內有明顯的抗炎作用，抗炎作用可能是通過抑制前列腺素E2、組胺、5-羥色胺生成而產生的，以期為研究開發柯孜木克顆粒提供實驗依據。

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