貴州苗藥胡氏濕疹清涼噴霧劑的質量標準研究

摘要：目的：建立胡氏濕疹清涼噴霧劑的質量標準。方法：采用薄層色譜法對方中梔子、大血藤、牡丹皮進行鑒別；采用高效液相色譜法測定了胡氏濕疹清涼噴霧劑中梔子苷的含量，采用DiamonsilTM（鉆石） C18柱（5μm，4.6mm×250mm）；流動相：乙腈-水（15∶85）；檢測波長：238nm；流速：1mL/min；柱溫：25℃。結果：薄層色譜中均能檢出梔子、大血藤、牡丹皮；梔子苷在6.4～57.6μg/mL范圍內呈現良好的線性關系（r=0.9999）；平均加樣回收率為99.42%，RSD為1.57%（n=9）。結論：本方法快速、簡便、準確、重復性好，可用于胡氏濕疹清涼噴霧劑的質量控制。

關鍵詞：胡氏濕疹清涼噴霧劑；薄層色譜；高效液相色譜；梔子苷

中圖分類號：G-424.1文獻標識碼：A文章編號：（2013）03-0030-05

Study of Quality Standard for Hushii’s Cool-Eczema Nebula of Guizhouu Miao-Minority Medicinee

ZHENG Shan（GuiYang Nursing Vocational College GuiZhou GuiYang 550081）

Abstractt：Objective：To establish quality standard for Hushi’s Cool-Eczema Nebula. Methods：Fructus Gardeniae，Radix Sargentodoxa cuneata and Cortext Paeonia suffruticosa were identified by TLC，and the content of geniposide was determined by HPLC. DiamonsilTM C18 column（5μm，4.6mm×250mm）was used. The mobile phase was acetonitrile-water（15：85）. The detective wavelength was 238nm. The flow rate was 1ml/min and column temperature was 25℃. Results：Fructus Gardeniae，Radix Sargentodoxa cuneata and Cortext Paeonia suffruticosa could be identified by TLC. Geniposide showed a good linearity in the range of 6.4～ 57.6μg/mL，and r=0.9999.The average recovery was 99.42%，and RSD was 1.57%（n=9）. Conclusion：The method is quick，simple，accurate and reproducible，it can be used for the quality control of Hushi’s Cool-Eczema Nebula.

Key wordss：Hushi’s Cool-Eczema Nebula； TLC； HPLC； Geniposide

胡氏濕疹清涼噴霧劑是由梔子、大血藤、牡丹皮等6味中藥組成的噴霧劑，具有胡氏濕疹清涼噴霧劑具有清熱解毒、敗毒散癰、活血消腫等功效，臨床上主于治療濕疹、神經性皮炎、蕁麻疹、牛皮癬等疾病。胡氏濕疹清涼噴霧劑雖然已經應用于臨床，但缺乏質量標準研究，不利于胡氏濕疹清涼噴霧劑的應用與推廣。為了更好地控制產品質量，保證療效，本文應用薄層層析法對方中梔子、大血藤和牡丹皮進行鑒別研究，并以方中君藥梔子中的梔子苷含量為指標，采用高效液相色譜法測定了胡氏濕疹清涼噴霧劑中梔子苷的含量，建立了本品的質量標準。

1儀器與試藥

1.1儀器

美國安捷倫Agilent1100高效液相色譜儀；DAD檢測器，Agilent1100色譜工作站；XS205型電子天平（瑞士梅特公司）；HS10260D型超聲波清洗器（70KW，40KHz）（天津奧泰公司）。

1.2試藥

氏濕疹清涼噴霧劑（貴州貴定胡三帖藥械有限責任公司提供，批號：20060612、20060716、20060811）；梔子苷對照品、梔子對照藥材、大血藤對照藥材、丹皮酚對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110756-200410供含量測定用、0986-200002、121353-200401、0708-9704供含量測定用）；.硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）；水為超純水，甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1鑒別實驗

2.1.1梔子的薄層色譜鑒別〔1〕取本品10片，擠出藥液吸取本品10mL，揮干溶劑，加50%甲醇20mL，超聲40min，濾過，濾液濃縮至約1mL，作為供試品溶液。取梔子苷對照品，加甲醇制成每1mL含4mg的溶液作為對照品溶液。取梔子對照藥材粉末1g，同法法制成對照藥材溶液。按處方比例去除梔子藥材，按本品的制備工藝和供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法實驗，吸取上述4種溶液各2μL，分別點于同一硅膠G板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶5∶1∶1）為展開劑，展開，展距14.7cm。取出，晾干，噴以50%的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上顯相同的紫色斑點，陰性對照無干擾。

2.1.2大血藤的薄層色譜鑒別〔2〕取本品10片，擠出藥液吸取本品20mL，揮干溶劑，加甲醇50mL，超聲30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加2%氫氧化鈉溶液10mL使溶解，用鹽酸調節pH值至2，用乙醚振蕩提取3次，每次10mL，合并乙醚液，揮干，殘渣加甲醇2mL使溶解，作為供試品溶液。取大血藤對照藥材粉末5g，同法制成對照藥材溶液。按處方比例去除大血藤藥材，按胡氏濕疹清涼噴霧劑的制備工藝和供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法實驗，吸取上述3種溶液各2μL，分別點于同一硅膠G板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸（8∶1∶0.8）為展開劑，展開，展距13.9cm。取出，晾干，噴以2%的三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同的紫紅色斑點，陰性對照無干擾。

2.1.3牡丹皮的薄層色譜鑒別〔3〕取本品10片，擠出藥液吸取本品10mL，揮干溶劑，加乙醚10mL，密塞，振搖10min，濾過，濾液蒸干，殘渣加丙酮2mL使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對照品，加丙酮制成每1mL含5mg的溶液，作為對照品溶液。按處方比例去除牡丹皮藥材，按胡氏濕疹清涼噴霧劑的制備工藝和供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法實驗，吸取上述3種溶液各10μL，分別點于同一硅膠G板上，以環己烷-乙酸乙酯（3∶1）為展開劑，展開，展距14.1cm。取出，晾干，噴以5%的三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同的藍褐色斑點，陰性對照無干擾。

2.2含量測定

2.2.1色譜條件Dikma DiamonsilTM（鉆石）C18柱（5μm，4.6mm×250mm）；流動相：乙腈-水（15∶85）；柱溫：25℃；檢測波長：238nm；流速：1mL/min；進樣量：10μL；理論塔板數以梔子苷峰面積計算應大于3000。

2.2.2對照品溶液的制備精密稱梔子苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含梔子苷0.32mg的溶液，即得。

2.2.3供試品溶液的制備取本品10片，擠出藥液精密吸取10mL，置具塞錐形瓶中，揮干溶劑，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理（功率70W，頻率40KHZ）20分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液10mL，置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。按處方中藥味的比例，自制不含梔子的處方按其工藝制成陰性樣品，同法制備，即得。

2.2.4系統適應性試驗分別吸取梔子苷對照品溶液、供試品溶液及缺梔子的陰性對照液注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）從圖中可見，在本試驗條件下，梔子苷對照品的出峰時間為16.01分鐘，梔子苷峰與相近的其他成分峰分離完全（分離度大于1.5），陰性樣品無干擾。結果見圖1。

2.2.5線性關系考察取對照品溶液分別配制成含梔子苷6.4、19.2、32、44.8、57.6μg/mL的溶液；進樣10μL，，以峰面積（Y）為縱坐標，對照品量（C）為橫坐標繪制標準曲線，計算得線性方繪制標準曲線，得回歸方程Y=43.113C-15.06，r=0.9999。結果表明，梔子苷在0.064～0.576μg范圍內呈現良好的線性關系。

2.2.6精密度試驗取在線性范圍的梔子苷對照品溶液，按“2.2.1測定法”項下方法重復進樣6次。結果梔子苷峰面積RSD為0.68%，說明本法精密度良好。

2.2.7穩定性試驗取同一批號樣品按“2.2.3供試品溶液的制備”項下方法制成供試品溶液，按“2.2.1測定法”項下條件分別在制備后0，2，4，6，8，10h測定一次峰面積。結果梔子苷峰面積RSD為1.37%，說明供試品溶液在10小時內穩定。

2.2.8重復性試驗取同一批號樣品6份，按“2.2.3供試品溶液的制備”項下方法制成供試品溶液，并按“2.2.1測定法”項下條件進行測定，計算梔子苷的含量。結果供試品溶液中梔子苷的平均含量為0.2018mg/mL，RSD為1.53%，說明本法重復性良好。2.2.9加樣回收率試驗取已知含量的同一批號樣品9份，精密量取本品5mL，分別加入適量的梔子苷對照品0.860mg、1.032mg、1.204mg，按“2.2.3供試品溶液的制備”項下方法制成供試品溶液，并按“2.2.1色譜條件”項下的條件進行測定，計算回收率。結果見表1。

2.2.10樣品的含量測定按“2.2.3供試品溶液的制備”項下的制備方法分別處理10批樣品，按“2.2.1測定法”項下條件進行含量測定。結果見表2。

根據10批樣品的含量測定結果；暫定本品每毫升含梔子以梔子苷計不得少于0.18mg。

3討論

3.1本實驗含量測定供試品溶液的制備中比較了回流提取法、超聲提取法、索氏提取法。實驗結果表明，回流提取法提取出的成分復雜，雜質干擾多，索氏提取法操作繁瑣、費時、超聲提取法操作簡便、雜質干擾少，省時且提取率高，所以選擇超聲提取法進行提取〔4〕。

3.2在色譜柱的選擇中，主要考察了依利特Hypersil ODS色譜柱（4.6mm×150mm，5μm），Diamonsil C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）及Shimadzu C18色譜柱（150mm×4.6mm，5μm），在相同色譜條件下測試，結果顯示，Diamonsil C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）的分離最好。

3.3本實驗以乙腈-水（15∶85），甲醇-1.15﹪冰醋酸（11∶89），甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（15∶85∶1∶0.3）為流動相，分別考察了色譜的分離情況，結果表明以乙腈-水（15∶85）為流動相時，梔子苷色譜峰出峰時間短，分離效果最佳。

3.4實驗結果表明，采用TLC法可檢出胡氏濕疹清涼噴霧劑中梔子、大血藤、牡丹皮，方法簡便、陰性樣品無干擾，專屬性強，可作為本品的定性鑒別方法。采用HPLC法測定胡氏濕疹清涼噴霧劑中梔子苷的含量，方法簡便，重復性、穩定性好，結果準確可靠，可作為本品的含量控制方法。

參考文獻

〔1〕中華人民共和國衛生部藥典委員會.中國人民共和國藥典2005年版（一部）〔S〕.北京：化學工業出版社，2005：173.

〔2〕中華人民共和國衛生部藥典委員會.中國人民共和國藥典2005年版（一部）〔S〕.北京：化學工業出版社，2005：15.

〔3〕中華人民共和國衛生部藥典委員會.中國人民共和國藥典2005年版（一部）〔S〕.北京：化學工業出版社，2005：119.

〔4〕黃雪梅，蒙大平.RP-HPLC測定龍膽瀉肝口服液中梔子苷的含量〔J〕.中成藥，2001，23（7）：489-491.