普羅布考對高脂血癥性急性胰腺炎金黃地鼠脂質過氧化及細胞因子的影響

[摘要] 目的 探討普羅布考在高脂血癥性急性胰腺炎金黃地鼠模型中的效應。 方法 金黃地鼠60只，高脂飲食飼喂建立高三酰甘油血癥模型后，隨機分成兩組：高脂血癥性急性胰腺炎對照（D）組，普羅布考治療（P）組。D組與P組建立HL-AP模型：予以20% L-精氨酸溶液腹腔注射。P組加入1%普羅布考。檢測血清中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及總抗氧化能力（T-AOC）的水平以反應機體氧化應激水平；檢測細胞因子TNF-α和IL-6來反應機體的炎癥情況。 結果 P組金黃地鼠MDA水平明顯高于D組（P < 0.05），而SOD、T-AOC、TNF-α、IL-6均明顯低于D組（P < 0.05）。 結論 普羅布考對于高脂血癥性急性胰腺炎具有一定的療效。

[關鍵詞] 普羅布考；高甘油三酯血癥；急性胰腺炎；脂質過氧化

[中圖分類號] R965 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2013）04-0012-03

高甘油三酯血癥（hypertriglyceridemia，HTG）已成為繼膽源性和酒精性之后急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）的第三大病因[1]。據報道，高脂血癥性急性胰腺炎（hyperlipedemic acute pancreatitis，HL-AP）約占全部胰腺炎的10%[2]。而且，一項研究揭示大約有56%的妊娠期胰腺炎由HTG引起[3]。盡管HL-AP已相當普遍，其具體機制尚不清楚，脂質代謝的異常被認為與之相關。研究者認為血漿甘油三酯（TG）水平>1 000 mg/dL（11.3 mmol/L）是胰腺炎的觸發點[4]，高TG水平組成的乳糜顆粒將血清變成乳汁狀，此時體內自由基的產生和清除之間失去平衡，增加體內氧化應激水平，特別是增加脂質的過氧化。普羅布考具有降脂、抗氧化的作用，可降低體內氧化應激水平；亦有報道普羅布考可影響體內炎癥因子的水平[5]。本研究通過建立HL-AP金黃地鼠鼠模型，研究普羅布考在HL-AP中所起的作用，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 試劑

普羅布考由北京維信康醫藥有限公司提供；血脂檢測試劑盒均購自中生北控生物技術公司；MDA/SOD和T-AOC 檢測試劑盒購自南京建成生物有限公司；淀粉酶測定試劑盒購買于四川邁克生物科技股份有限公司；脂肪酶檢測試劑盒由上海榮盛生物技術有限公司提供；腫瘤壞死因子（TNF-α）、白細胞介素6（IL-6）、酶聯免疫吸附法（ELISA）試劑盒購自上海康成生物有限公司。

1.2 動物和飼料

6～8周齡雄性金黃地鼠（golden hamster）60只，體重90～110 g，購自南華大學醫學部動物實驗部，于南華大學醫學部動物試驗部飼養，溫度（23±1）℃，自然光照，自由飲水，給予專用飼料，動物在實驗前適應性飼養1周。普通飼料和高脂飼料（10%豬油，2%膽固醇，88%普通飼料）均購自南華大學醫學部動物試驗部。

1.3 方法

1.3.1 HTG模型的建立 60只金黃地鼠飼喂高脂飲食3周，喂養前后均行尾靜脈取血檢測甘油三酯及總膽固醇（total cholesterol，TC）的含量濃度，前后比較升高10倍以上，HTG成模。

1.3.2 HL-AP模型的建立 將上述HTG模型隨機（抽簽法）分為2組：對照組（D），n = 30，繼續高脂飲食飼喂1W；普羅布考治療組（P），n = 30，高脂飲食的基礎上加用1%普羅布考1周，胰腺炎模型誘導前禁食水12 h，20%L-精氨酸溶液腹腔注射3次，2.0 g/kg 體重，間隔1 h。模型誘導后予動物進食水。

1.3.3 血液樣本 在L-精氨酸最后一次注射后0、3、6、12、24 h取血液樣本，然后處死動物。

1.3.4 血清脂質及炎癥因子的測定 取血液樣本，離心（4 000 r/min×15 min，4℃），制備血清，酶比色法檢測試劑盒測定血清中三酰甘油、總膽固醇（total cholesterol，TC）的含量；ELISA法檢測血清中炎癥因子TNF-α、IL-6的水平。

1.3.5 血清生化測定 取血液樣本，離心（2 800 r/min×20 min，4℃）去除乳糜顆粒，按試劑盒說明測定淀粉酶及脂肪酶活性，硫代巴比妥酶法測定血清丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量，比色法測定血清超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）及總抗氧化能力（total antioxideiative）。

1.4 統計學分析

采用SPSS 13.0軟件進行統計學分析，其中計量資料采用t檢驗，以P < 0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 金黃地鼠血脂水平的變化

當金黃地鼠飼喂3周后，血脂水平明顯升高（甘油三酯1336.3±83.2 vs 82.3±5.1，P < 0.05；總膽固醇1562.5±130.3 vs 243.2±28.1，P < 0.05），80%的金黃地鼠血清甘油三酯水平>1 000 mg/dL，較對照組升高10倍以上，而加用普羅布考后，可降低血清中甘油三酯及總膽固醇的水平（P <0.05）。見表1。

2.2 血清淀粉酶和脂肪酶活性

根據血清淀粉酶及脂肪酶的水平可以評估胰腺腺泡細胞的損傷情況，如表2、表3所示，金黃地鼠血清淀粉酶及脂肪酶在L-精氨酸最后一次注射后3、6、9 h即上升，24 h下降。P組各時間點與D組比較，均低于D組水平，差異有統計學意義。

2.3 血清MDA、SOD、T-AOC的水平

高脂飲食后MDA的水平顯著高于高脂飲食前（6.17±1.03 vs 2.54±0.52，P < 0.05），SOD及T-AOC 的水平則低于高脂飲食前（SOD 286.25±55.41 vs 342.52±65.60，P < 0.05；T-AOC 2.37±0.51 vs 4.22±0.91，P < 0.05）。而與D組比較，普羅布考治療組的SOD 及T-AOC水平增高（P < 0.05），而MDA 的水平則有明顯的下降（P < 0.05）（表4）。

2.4 血清細胞因子TNF-α的水平

D組血清細胞因子TNF-α在造模后3 h即升高，24 h達峰，P組血清TNF-α水平較D組同時間點3 h、6 h、9 h、24 h均有顯著降低，差異有統計學意義（P < 0.05）（表5）。

2.5 血清細胞因子IL-6的水平

D組血清細胞因子IL-6在造模后3 h即升高，9 h達峰，P組血清IL-6水平較D組同時間點3 h、6 h、9 h、24 h均有降低，差異有統計學意義（P < 0.05）（表6）。

3 討論

HTG與AP關系密切，據報道HL-AP已占所有胰腺炎的10%；甚至有報道顯示，大約有56%的妊娠期胰腺炎由HTG引起。HL-AP既表現出AP的共性，又有自己獨特的特點，其重癥的發生率明顯高于其他病因引起的胰腺炎，并發癥、合并癥亦明顯增多[6]。鑒于其基本機制尚不明確，我們有必要建立一種動物模型，研究降脂藥物對其的效能。

HTG時，機體存在氧化和抗氧化的失衡，脂質的過度氧化產生氧自由基，自由基在體內蓄積，損害機體，破壞細胞器，激發信號轉導通路導致微細胞結構損傷及纖維化[7]。另外重癥高脂血癥性急性胰腺炎時，胰腺局部和胰外臟器在多種炎性因子作用下，血漿成分大量滲出，血液濃縮；此時高脂血癥時存在的脂質紊亂，致胰腺微循環障礙進一步加劇，從而導致胰缺血、胰梗塞以及嚴重全身性炎癥綜合征或多臟器功能衰竭等嚴重[8，9]。

普羅布考是降脂、抗氧化劑，同時具有抗炎癥反應的作用[10]。有研究表明，普羅布考分子內所含的酚羥基易被氧化而發生斷鏈，結合氧離子形成穩定的酚氧基，從而有效降低血漿氧自由基濃度，減輕氧化損傷[11]。

本實驗通過建立HL-AP金黃地鼠動物模型，檢測MAD、SOD和T-AOC等反應機體氧化應激的指標。MDA的量常常可以反映機體內脂質過氧化的程度，SOD可以反應機體清除氧自由基的能力，而T-AOC則可反應對機體總抗氧化能力大小[12]。結果顯示，普羅布考可以減少MDA的含量，升高T-AOC及SOD 的水平，提示在模型中普羅布考起著抗脂質過氧化的作用。

細胞因子的過度釋放學說是目前AP的機制的熱點學說。本實驗研究結果顯示，與D組相比，P組細胞因子TNF-α、IL-6在同時間點低于D組，在3 h、6 h、9 h、24 h差異有統計學意義（P < 0.05），提示加入普羅布考后血清炎癥介質TNF-α、IL-6水平降低，說明普羅布考有效減輕了胰腺的炎癥。

[參考文獻]

[1] Tsuang W，Navaneethan U，Ruiz L，et al. Hypertriglyceridemic pancreatitis：presentation and management[J]. Am J Gastroenterol，2009， 104：984-991.

[2] Anderson F，Thomson SR，Clarke DL，et al. Dyslipidaemic pancreatitis：clinical assessment and analysis of disease severity and outcomes[J].Pancreatology，2009，9：252-257.

[3] Chang CC，Hsieh YY，Tsai HD，et al. Acute pancreatitis in pregnancy[J].Zhonghua Yi Xue Za Zhi（Taipei），1998，61：85Y92.

[4] Wayne Tsuang，Udayakumar Navaneethan，Luis Ruiz，et al. Hypertriglyceridemic pancreatitis：presentation and management[J]. Am J Gastroenterol 2009；104：984-991.

[5] 崔立寶，尹凱，莫中成，等. 普羅布考對早期高脂血癥兔膽固醇相關轉運體以及炎癥因子的影響[D]. 中國動脈硬化雜志，2011，19（3）：0263.

[6] 周亞魁，揚體雄，何躍明. 高脂血癥性胰腺炎[J]. 臨床外科雜志，2002，10（1）：52-53.

[7] SHANG J，CHEN LL，SUN H，et al. Effect of exercise on expression of visfatin of visceral fat in high-fat-diet-fed rats[J]. China Journal of Modern Medicine，2008，3（18）：551-554.

[8] 吳建新，袁耀宗，徐家裕，等. 急性壞死性胰腺炎大鼠以生長抑素受體的變化與奧曲肽的治療作用和機制[J]. 中華醫學雜志，2001，81：740-743.

[9] Sakorafas GH，Tsiotou AG. Etiology and pathogenes of acute pancreatitis[J]. J Clin Gast roent erol，2000，30：343-356.

[10] 龍峰，段純，何衛恒，等. 普羅布考對高脂血癥大鼠肝脂質過氧化的影響及機制[J]. 中國現代醫學雜志，2008，18（21）：3130-3133.

[11] Umeji K，Umemoto S，Itoh S，et al. Comparative effects of pitavastatin and probucol on oxidative stress，Cu/Zn super oxidedismutase，PPAR（gamma）， and aortic stiffness in hypercholesterolemia[J]. Am J Physi ol Heart Circ Physiol，2006，291：2522-2532.

[12] Gardinor，Gavaresi G，Finim，et al. The role of different chemical modifications of superoxide dismutase in preventing a prolonged muscular ischemia/reperfusion injury[J]. Artif Cells Blood Substit Immobil Biotechnol，2002，30（3）：189-191.

（收稿日期：2012-12-20）