阿魏葉的指紋圖譜研究

摘 要：采用高效氣相色譜法，對(duì)不同產(chǎn)地和不同肥料種植的阿魏葉中的成分進(jìn)行指紋圖譜研究。結(jié)果表明，氣相色譜指紋圖譜中多數(shù)組分可以達(dá)到較好的分離，共得到17個(gè)共有峰，不同施肥條件下相似度較好，但不同產(chǎn)地之間相似度差異較大。本方法具有較好的穩(wěn)定性、精密度和重復(fù)性，所建立的指紋圖譜可用于阿魏藥材及阿魏葉的鑒定及質(zhì)量評(píng)價(jià)。

關(guān)鍵詞：阿魏葉；氣相色譜；指紋圖譜

中圖分類號(hào)：R282 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.03.004

阿魏是著名的“西域藥材”之一，別名臭阿魏。《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版收載的阿魏來(lái)源于傘形科（Umbelliferae）阿魏屬（Ferula）植物新疆阿魏Ferula sinkiangensis K.M.Shen或阜康阿魏Ferula fukanensis K.M.Shen分泌的樹脂。阿魏屬植物全世界有150種，在我國(guó)有25種[1]。1987年國(guó)務(wù)院發(fā)布《野生藥材資源保護(hù)管理?xiàng)l列》，國(guó)家醫(yī)藥管理局頒布“國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)野生藥材物種名錄”，新疆阿魏和阜康阿魏被列為三級(jí)保護(hù)植物。《中國(guó)植物紅皮書》新疆阿魏被列為三級(jí)瀕危植物。為此，是否更能夠有效保護(hù)及可持續(xù)利用珍惜藥用植物阿魏，以保根采集葉片和地上部分的方法。通過(guò)高效氣相色譜法建立不同產(chǎn)地的新疆阿魏葉的指紋圖譜，為新疆阿魏葉藥材質(zhì)量控制研究提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

選用在新疆伊犁野生條件下生長(zhǎng)的阿魏與新疆阜康人工種植的阿魏作為試驗(yàn)對(duì)象，設(shè)計(jì)人工種植的阿魏以N、K、P、NK、KP、NP、NPK等單混施肥條件來(lái)處理。根據(jù)同一時(shí)期采集兩個(gè)不同產(chǎn)地阿魏進(jìn)行相似度比較，為建立阿魏藥材及阿魏葉的指紋圖譜和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供技術(shù)支持。

1.2 儀器與條件

美國(guó)惠普公司HP6890氣相色譜儀，毛細(xì)管柱：HP-5柱（30 m × 0.32 μm），氫火焰離子化檢測(cè)器，ER-182A型電子天平，DRT-TW形調(diào)溫電熱套（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司），揮發(fā)油提取器。

色譜條件：進(jìn)樣口溫度260 ℃，分流比5∶1；柱溫：60 ℃以3 ℃·min-1 升至246 ℃；檢測(cè)器溫度280 ℃，H2流速30 mL·min-1；N2為載氣，流速1.02 mL·min-1；進(jìn)樣量1 μL。

1.3 供試品制備

吸收劑的選擇：稱取阿魏葉10 g，粉碎過(guò)0.84 mm篩后置于500 mL圓底燒瓶，用揮發(fā)油提取器進(jìn)行水蒸氣蒸餾4 h，因?yàn)槠鋼]發(fā)性成分較少、樣品量限制、采用無(wú)溶劑方法無(wú)法得到揮發(fā)油成分，分別以石油醚、正己烷和乙酸乙酯（1 mL）作為吸收劑，提取物定容到100 μL，進(jìn)樣1 μL。結(jié)合譜圖分析最終選擇乙酸乙酯為吸收劑。

樣品制備：稱取阿魏葉10 g，粉碎過(guò)0.84 mm篩后置于500 mL圓底燒瓶，用揮發(fā)油提取器進(jìn)行水蒸氣蒸餾4 h，乙酸乙酯1 mL作為吸收劑，提取物定容到100 μL，進(jìn)樣1 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 精密度試驗(yàn)

取同一供試品溶液（以Y8為代表），連續(xù)進(jìn)樣5次。以峰6為對(duì)照，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積百分比。結(jié)果各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD均小于0.1%，大于10%相對(duì)峰面積百分比RSD均小于5%，表明本方法精密度良好。

2.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取新疆阿魏葉揮發(fā)油，按照確定的供試品溶液制備方法操作，分別于2，4，6，8，10 h進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD均小于0.1%，相對(duì)峰面積百分比RSD均小于5%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批阿魏6份，按照確定的供試品溶液制備方法操作并測(cè)定，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積百分比。結(jié)果各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD均小于0.1%，相對(duì)峰面積百分比RSD均小于5%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.4 指紋圖譜與技術(shù)參數(shù)

2.4.1 指紋圖譜共有峰的標(biāo)定 將17批次阿魏制成供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，應(yīng)用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2004A版，國(guó)家藥典委員會(huì)）比較17批次阿魏的色譜圖（圖1，2），確定其中17個(gè)色譜峰是共有的，確定為共有峰。

2.4.2 相似度評(píng)價(jià) 應(yīng)用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（A版，國(guó)家藥典委員會(huì)）對(duì)17批次阿魏的色譜圖進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)。以17批次樣品色譜圖擬合圖譜為對(duì)照?qǐng)D譜，經(jīng)一系列分析得知，峰12對(duì)整體的相似度影響較大，且其峰面積百分比大于10%，因此不能舍去，17批次樣品與對(duì)照?qǐng)D譜的相似度部分偏小。此外，因17批次樣品中前14批為人工種植，后3批為野生，分開(kāi)進(jìn)行評(píng)價(jià)，相似度均在0.8以上，說(shuō)明阿魏人工種植和野生化學(xué)成分有一定的差異性（表1）。

3 結(jié)論與討論

由于峰6的峰面積和保留時(shí)間均居中，且與鄰近色譜峰的分離度較好，故以峰6作為參照峰。本研究采用GC法測(cè)定了17批次不同產(chǎn)地及不同施肥方法栽培的阿魏葉指紋圖譜，結(jié)果表明，不同種植方式阿魏葉的化學(xué)組成有一定的差異，同種種植方式化學(xué)組成的相似度均在0.8以上，可據(jù)此評(píng)價(jià)和控制阿魏藥材的質(zhì)量。但是不同產(chǎn)地的阿魏所含成分的含量差異較大，相對(duì)峰面積百分比RSD差異很大，說(shuō)明不同產(chǎn)地阿魏藥材的化學(xué)成分含量有差異，這可能是受氣候、生態(tài)環(huán)境和栽培種植方法等的影響。

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