穴位貼敷加針刺四縫穴對反復呼吸道感染兒童免疫功能的影響

[摘要] 目的 觀察穴位貼敷加針刺四縫穴療法對反復呼吸道感染（recurrent respiratory tract infection，RRTI）兒童免疫功能的影響。 方法 流式細胞術檢測108例經穴位貼敷加針刺四縫穴治療的RRTI患兒的T淋巴細胞亞群。ELISA檢測免疫球蛋白IgG、IgA、IgM和IGF-1水平。 結果 RRTI患兒T淋巴細胞亞群計數、免疫球蛋白和IGF-1水平均低于正常健康對照兒童。穴位貼敷加針刺四縫穴治療后，RRTI患兒總T淋巴細胞、CD4+T細胞和CD4/CD8比值明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。治療后IgG、IgA水平和IGF-1水平均顯著增高，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。 結論 RRTI患兒免疫功能低下，穴位貼敷加針刺四縫穴可提高患兒細胞和體液免疫功能。

[關鍵詞] 穴位貼敷；四縫穴；反復呼吸道感染；免疫功能

[中圖分類號] R725.6 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）02-0073-03

兒童反復呼吸道感染（recurrent respiratory tract infection，RRTI）是一種兒科臨床常見病，多發(fā)病。RRTI是指在一年內上、下呼吸道感染反復發(fā)作而超過規(guī)定次數的一種臨床綜合征[1]，常反復發(fā)作，每次發(fā)作癥狀較重，病程較長，防治不當易引起多種并發(fā)癥，嚴重影響患兒的身心健康。RRTI的病因較多，大量的臨床研究證實反復呼吸道感染兒童存在體液和細胞免疫功能的異常[2，3]。目前臨床多采用抗感染、對癥支持治療，但仍有許多病例無法取得理想效果。中醫(yī)藥對兒童反復呼吸道感染具有一定的療效[4]。本研究采用中藥穴位貼敷結合針刺四縫穴治療RRTI患兒，觀察其臨床療效并測定患兒免疫球蛋白及淋巴細胞亞群等體液和細胞免疫功能狀態(tài)，為RRTI患兒尋找更佳的治療方案，為其提供理論依據并積累實際應用經驗。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2009年10月～2012年2月在我院門診或住院并配合完成整個診療計劃的反復呼吸道感染患兒共108例。診斷標準和排除標準參照中華醫(yī)學會兒科學分會呼吸學組與《中華兒科雜志》編輯委員會2008年制定的《反復呼吸道感染的臨床概念和處理原則》的標準[1]。其中男58例，女50例；年齡3～14歲，平均（6.3±2.6）歲。反復上呼吸道感染62例，反復下呼吸道感染46例。所有患兒入選前3個月未使用過血制品、激素和免疫調節(jié)劑，并除外原發(fā)免疫缺陷病、肝腎疾病、小兒肺結核、先天性心臟病等合并癥。隨機選取同期健康體檢的正常健康兒童48例作為對照組，男26例，女22例，年齡4～13歲，平均（6.1±3.1）歲。

1.2 實驗方法

1.2.1 治療方法 穴位貼敷是將白芥子（微炒）、延胡索、甘遂、細辛、黃芪、白術、肉桂、丁香按3∶5∶2∶2∶5∶3∶1∶1 比例混合，研為細末后加鮮姜汁調成膏狀，制成大小1 cm×1 cm、厚度為3 mm左右的方形藥塊，取風門（雙）、肺俞（雙）、脾俞（雙）、關元，將藥塊貼于穴位上，外用6 cm×6 cm大小的膠布固定。6 歲以下貼敷1～2 h，6 歲以上貼敷2～6 h，以貼藥處皮膚潮紅為度，每周1 次，4 次為1個療程，休息10 d后再治療1個療程。針刺四縫穴治療方法：患兒四縫穴處皮膚常規(guī)消毒后，醫(yī)者右手拇、食兩指持住針柄，中指扶住針尖部，露出針尖1～2分許，以控制針刺深淺度，針刺時左手捏住患兒待刺的手指，右手持針對準穴位迅速刺入1～2分，立即出針，輕輕擠壓針孔周圍，擠出黃白色液體或少許血液，然后用消毒干棉球按壓針孔。同時囑家長注意患兒針孔周圍勿受感染。療程：每周1次，共治療4次。

1.2.2 細胞免疫功能檢測 分別于患兒治療前和治療后1個月清晨空腹采血，乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝管收集靜脈血2 mL，采用三色流式細胞術檢測T淋巴細胞亞群（包括CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞）。取BD淋巴細胞亞群四色組合抗體CD3/CD8/CD45/CD4（貨號340499， 美國BD公司）20 μL，加抗凝全血100 μL，震蕩混勻室溫避光孵育15 min，加1×溶血素1 mL，混勻后室溫避光10 min，離心去上清加PBS 400 μL，用BD FACS Calibur流式細胞儀（美國BD公司）檢測T淋巴細胞亞群。

1.2.3 體液免疫檢測 分別于患兒治療前和治療后1個月清晨空腹采血，離心去血清后，使用全自動酶標檢測儀，用酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測免疫球蛋白IgG、IgA、IgM水平，用胰島素樣生長因子-I（IGF-I）試劑盒（上海森雄公司），ELISA法檢測IGF-I。

1.3 統(tǒng)計學處理

用GraphPad Prism 5.0統(tǒng)計學軟件處理數據。采用描述性統(tǒng)計分析，計量資料以x±s表示，兩組均數比較采用獨立樣本t檢驗，多組間的比較采用單因素方差分析；均數的兩兩比較采用LSD法。兩變量相關性采用等級相關（Spearman）分析。計數資料用相對數，組間比較采用χ2檢驗，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 RRTI患兒細胞免疫和體液免疫功能受損

以往的研究顯示RRTI的患兒多存在不同程度的特異性和非特異性免疫功能的低下。我們首先檢測了納入本研究的RRTI患兒的以T淋巴細胞為代表的細胞免疫狀態(tài)和免疫球蛋白IgG、IgA、IgM以及IGF-1等反映體液免疫功能狀態(tài)的指標情況。兩組兒童年齡和性別比差異無統(tǒng)計學意義。如表1所示，與健康對照兒童相比，RRTI兒童的總T淋巴細胞、CD4+T細胞百分率、CD4+/CD8+比值均不同程度降低，差異均有統(tǒng)計學意義；而CD8+T淋巴細胞百分比與健康對照兒童比較差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。這提示RRTI患兒細胞免疫功能受損。檢測體液免疫功能指標發(fā)現，RRTI患兒IgG、IgA、IgM以及IGF-1的水平均低于正常健康對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），見表1。

2.2 穴位貼敷加針刺四縫穴治療前后細胞免疫變化情況

經穴位貼敷加針刺四縫穴治療后，RRTI患兒總T淋巴細胞數量（65.3±5.9）%顯著升高，差異具有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。此外，CD4+T細胞、CD8+T細胞以及CD4/CD8比值均增高，其中CD4+T細胞數（33.6±5.7）%和CD4/CD8比值（1.5±0.7）增高明顯，差異具有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。見圖1。

2.3 穴位貼敷加針刺四縫穴治療可提高患兒體液免疫功能狀態(tài)

經穴位貼敷加針刺四縫穴治療后，RRTI患兒IgG[（10.3±4.8）g/L]、IgA[（1.3±0.5）g/L]水平均顯著提高，差異具有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。但IgM[（1.1±0.9）g/L]水平較治療前[（0.9±0.5）g/L]有所升高，但差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。此外，治療后IGF-1水平[（27.5±6.2）μg/L]增高明顯，差異具有統(tǒng)計學意義（P < 0.05，圖2。

3討論

RRTI是兒科常見病，其病因復雜，除與呼吸道本身解剖特點有關外，還受免疫功能、營養(yǎng)狀況、空氣污染等多方面影響[2]。該病患兒存在細胞免疫及體液免疫的紊亂已被國內外眾多研究所證實[3，5]。許多資料顯示RRTI患兒存在外周血T淋巴細胞亞群的變化[3，6，7，8， 9]，但CD4+、CD8+ T淋巴細胞比例的變化報道并不一致。我們的研究進一步證實RRTI患兒存在細胞和體液免疫功能低下狀況。對于RRTI的治療目前仍然沒有明確的有效的治療方案，單純的抗感染治療并不能解決所有的患兒情況，因此發(fā)揮中醫(yī)藥學的優(yōu)勢，我們嘗試通過穴位貼敷結合針刺四縫穴的綜合治療方法對108例RRTI患兒進行干預治療，觀察治療前后患兒的細胞和體液免疫狀況發(fā)現，該治療方法可有效提高患兒的細胞和體液免疫功能狀態(tài)，提示該方法可能通過提高患兒的免疫功能狀態(tài)而改善RRTI的治療。該方法安全、避免口服和注射藥物等毒副作用。

正常機體內免疫細胞種類比例或細胞亞群比例偏離正常值，提示體內免疫功能發(fā)生變化。因此，機體的細胞免疫功能與許多疾病（特別是感染性疾病、腫瘤及自身免疫性疾病）的發(fā)生、發(fā)展及預后密切相關。T淋巴細胞是參與機體免疫反應的主要免疫活性細胞，淋巴細胞亞群CD4+和CD8+ T細胞通過直接作用和分泌細胞因子相互誘導、相互抑制形成T細胞網絡，在機體免疫應答調控和維持免疫穩(wěn)定方面具有重要作用。RRTI是兒科門診呼吸道疾病的常見病。本研究結果顯示，RRTI患兒CD3+總淋巴細胞比例下降，與健康兒童相比差異有統(tǒng)計學意義，提示RRTI患兒免疫功能異常和紊亂。免疫能力處于低下狀態(tài)與大多數文獻報道結果基本一致[3，7，9]。研究發(fā)現RRTI患兒同時存在細胞和體液免疫低下。本研究結果也證實RRTI患兒血清IgG、IgA、IgM和IGF-1水平均明顯低于正常。當機體受到抗原刺激后，免疫活性細胞處于疲憊狀態(tài)，免疫反應降低，抗體產生減少，不能清除抗原，導致反復感染，同時反復感染又導致免疫球蛋白消耗增加。呼吸道感染時T細胞被激活，釋放IL-2，同時T細胞分化增殖受阻，自然殺傷細胞活性降低，細胞因子產生減少，導致T細胞誘導B細胞產生減少，影響血清Ig水平，機體免疫受抑制。這可能是RRTI患兒細胞和體液免疫功能均受損的原因。

目前由于抗生素和激素的濫用，加上兒童免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，抵抗和清除病菌能力差，這嚴重干擾和破壞了患兒機體免疫功能的調節(jié)，免疫反應降低導致反復呼吸道感染，因此RRTI 患兒血清IgG、IgA、IgM濃度水平低下。小兒稚陰稚陽，肺虛脾弱，衛(wèi)外不固，易感外邪，治宜益肺健脾、和營固表。我們在《張氏醫(yī)通》治療冷哮的白芥子涂法的基礎上，添加了黃芪、白術、肉桂等進行穴位貼敷，以增強益氣健脾作用。由于皮膚角質層的屏障作用，很多藥物難以穿透皮膚。辛溫走竄開竅的中藥可促進藥物透皮吸收，中藥所含的揮發(fā)油成分具有較強的促滲透效果，可擴張皮膚血管，增加血流量，使吸收的藥物經皮滲透、擴散。藥物貼敷于特定穴位，可使藥物的理化刺激直接作用于多層次、多功能的經絡系統(tǒng)，從整體上調節(jié)機體免疫功能，使機體免疫作用達到新的動態(tài)平衡和內外環(huán)境的協(xié)調穩(wěn)定， 起到內病外治作用。四縫穴為國際標準化穴方案中的經外奇穴，是兒科針灸療法中應用最廣泛的腧穴之一。四縫穴早在明代的《奇效良方》中就有記載：“在手四指內中節(jié)是穴。”此后，在歷代針灸、兒科及中醫(yī)綜合類文獻中還有多處記載[10，11]，如《針灸大成》中記載四縫穴主治小兒疳疾：“三棱針出血。治小兒猢猻勞等證。”，這表明針刺四縫穴在小兒治療中沿用已久，已成為一種普遍認可的療法。我們嘗試將針刺四縫穴配合穴位貼敷用于RRTI患兒的治療。研究顯示穴位貼敷加針刺四縫穴治療后患兒CD3+總淋巴細胞和CD4+ T淋巴細胞以及IgG、IgA等免疫球蛋白濃度水平明顯提高，機體免疫能力得到改善。營養(yǎng)不良與IGF-1關系非常密切。來自臨床的研究顯示，IGF-1的增加與體重的增長呈正相關[12]。血清IGF-1水平反映了目前的營養(yǎng)狀態(tài)和營養(yǎng)不良的嚴重程度。本研究也證實了這一點。在本研究中，RRTI患兒血清IGF-1水平隨著臨床癥狀的減輕而有所提高，治療后患兒血清IGF-1水平的提高較為顯著。這可能是穴位貼敷結合針刺四縫穴可提高IGF-1，改善患兒的營養(yǎng)狀況進而增強機體的免疫力。

綜上所述，RRTI患兒免疫功能低下，中藥穴位貼敷加針刺四縫穴可提高患兒細胞和體液免疫功能狀態(tài)。該中醫(yī)藥治療方法無口服、注射等途徑給藥的毒副作用，安全、簡便，易于家長和孩子接受，依從性好。但因缺乏多中心大規(guī)模的多中心研究，因此其治療方案能否推廣還需進一步增加病例數。

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（收稿日期：2012-10-11）