人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療糖尿病足的臨床研究＊

陜西省人民醫(yī)院 （西安710068） 郭 劍 李曉燕 李 輝 張 艷 王 一

糖尿病足是糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，病理上主要是下肢動脈內(nèi)膜粥樣斑塊形成，使管腔變窄甚至閉塞，造成遠(yuǎn)端缺血壞死。糖尿病足是導(dǎo)致患者截肢致殘的主要原因［1］。2002年Tateishi等在國際上首次報道了應(yīng)用患者自體骨髓干細(xì)胞移植治療缺血性下肢血管病并取得了成功。此后國內(nèi)也開始了該項技術(shù)的研究和臨床應(yīng)用，并取得了同樣的療效。然而因為取材不便，對供者有損傷，且隨供者年齡增長病毒感染風(fēng)險增加，細(xì)胞數(shù)量和增殖分化能力下降，加之產(chǎn)率低等諸多影響因素，限制了骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的臨床應(yīng)用［2］。近年來，國內(nèi)外學(xué)者對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Human umbilical cord blood mesenchymal stem cells，HUCMSCs）進行研究并取得了一定成果。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞有望取代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成為組織工程更好的研究對象［3］。本研究采用HUCMSCs治療糖尿病足，重新激活或提高機體固有的血管再生能力，促進血管側(cè)支循環(huán)建立，可望成為一種糖尿病足治療的新策略。

資料與方法

1 一般資料 2009年11月至2011年12月在我院住院的T2DM并發(fā)糖尿病足患者5例（8肢），符合1999年WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)。男3例，女2例，平均年齡60±9．8歲，合并高血壓5例，冠心病2例，血脂異常5例。排除急慢性感染、急性并發(fā)癥及惡性腫瘤和自身免疫性疾病。術(shù)前采用胰島素控制血糖，血脂及血壓均在正常水平。糖尿病足8肢，左5肢，右3肢。所有患者均有足部潰瘍，并經(jīng)雙下肢彩超、三維CT血管造影（CTA）檢查明確有不同程度的下肢動脈狹窄。對患者的治療及風(fēng)險進行如實告知，患者對治療均簽署知情同意書，治療方案經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

2 HUCMSCs移植方法 HUCMSCs由天津協(xié)和干細(xì)胞公司提供成品。移植方法：在手術(shù)室硬膜外麻醉后，無菌條件下，將干細(xì)胞懸液按3cm×3cm間距于患肢網(wǎng)狀多點肌內(nèi)注射，病變嚴(yán)重者足部按1cm×1cm間距注射，潰瘍周圍重點注射，注射完畢用碘伏消毒，無菌敷料覆蓋包扎。

3 檢測項目 經(jīng)皮氧分壓測定：移植前后用日本林電器株式會社制造的ES－1000SPM多普勒血流探測儀；下肢末梢血流和踝壓指數(shù)（ABI）：ES－100V3超音波雙方向血流針檢測；下肢皮溫；下肢足底深感覺；檢查足部深感覺。

4 統(tǒng)計學(xué)處理 在SPSS 10．0軟件上進行。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)取自然對數(shù)后進行分析，顯著性檢驗用配對t檢驗，相關(guān)性檢驗用雙變量Pearson相關(guān)分析，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 移植情況及不良反應(yīng)情況 5例糖尿病足患者HUCMSCs移植治療進行順利，術(shù)中2例患者感下肢乏力，注射部位輕微疼痛，術(shù)后1d均明顯改善，移植過程順利，術(shù)后住院7d左右。觀察期間患者均無嚴(yán)重不良反應(yīng)發(fā)生。

2 癥狀、體征改善情況 在有靜息痛的7肢中，3肢足部疼痛消失，2肢明顯改善，1肢改善，1肢無變化，緩解率為85．7%。有肢體麻木8肢，其中5肢麻木消失，3肢減輕；患肢冷感消失者5肢，明顯改善2肢，改善2支，無變化1肢，有效率為80．0%。患者均有不同程度的間歇性跛行，患肢達0級者4肢，明顯改善1肢，改善2肢，無變化1條肢，緩解率為87．5%；所有患肢中潰瘍?nèi)坑险哂?肢；1肢潰瘍面明顯縮小，仍在局部換藥；1肢截小趾。緩解率達87．5%。

3 檢測指標(biāo)改善情況 移植后皮膚溫度、ABI、經(jīng)皮氧分壓均明顯較前升高，足底深感覺改善（P＜0．05）。附見表。

附表 移植前后檢測指標(biāo)比較（±s，n＝8）

附表 移植前后檢測指標(biāo)比較（±s，n＝8）

注：與移植前比較＊P＜0．05

時間段 皮溫（℃） ABI 經(jīng)皮氧分壓（mmHg）足底感覺（mV）治療前 30．18±0．96 0．34±0．13 26．23±3．08 22．5±3．1治療后 32．15±0．78＊0．56±0．27＊ 37．65±4．01＊ 8．9±1．7＊

討 論

隨著干細(xì)胞基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用的進展，為糖尿病下肢缺血患者提供了一個新的治療手段，將自體骨髓或外周血干細(xì)胞移植到糖尿病缺血下肢后，促進血管再生，改善和恢復(fù)糖尿病患肢血流，從而提高糖尿病下肢缺血的皮膚溫度，緩解下肢疼痛及冷、涼感覺，潰瘍面縮小或愈合［4］。但對患者年齡、身體條件、心理接受程度要求較高：糖尿病下肢缺血患者多為年齡偏大的老年患者，考慮其自體干細(xì)胞數(shù)量、分化能力下降，且糖尿病患者外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞不僅數(shù)量減少，而且增殖潛能、黏附和成血管能力均降低［5－6］，使用其自體或骨髓干細(xì)胞移植效果不夠理想。而臍帶中含有豐富的間充質(zhì)干細(xì)胞及造血干細(xì)胞，與骨髓和自體外周血干細(xì)胞相比，臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）更原始，分化擴增能力更強，誘導(dǎo)分化后獲得足量干細(xì)胞且向血管、骨、肌肉、神經(jīng)分化能力更強大，具有更加有效的干細(xì)胞潛能，且細(xì)胞采集簡單，以及容易獲得、免疫原性弱。本研究結(jié)果中，初步觀察到HUCMSCs移植手術(shù)治療后T2DM并糖尿病足患者下肢麻木、疼痛感、冷感、間歇性跛行癥狀明顯好轉(zhuǎn)，療效與自體骨髓干細(xì)胞移植療效相當(dāng)，并無嚴(yán)重不良反應(yīng)發(fā)生。

總之，HUCMSCs移植治療糖尿病足，由于干細(xì)胞來源廣泛，取材方便，在不同的理化環(huán)境下及細(xì)胞因子的誘導(dǎo)下具有多向分化的潛能，是組織工程、細(xì)胞移植及基因治療領(lǐng)域的理想靶細(xì)胞。

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［6］ 付漢東，張愛華，魯 艷，等．自體骨髓干細(xì)胞移植治療糖尿病足患者血管內(nèi)皮生長因子的表達及意義［J］．中國全科醫(yī)學(xué)，2010，13（8）：2554．