570例肺癌患者外周血T淋巴細胞亞群和NK細胞的分析研究

邢應如 孟阿娜 阮建華

安徽省淮南市東方醫院集團腫瘤醫院檢驗科，安徽淮南 232035

570例肺癌患者外周血T淋巴細胞亞群和NK細胞的分析研究

邢應如 孟阿娜 阮建華

安徽省淮南市東方醫院集團腫瘤醫院檢驗科，安徽淮南 232035

目的 探討不同年齡段肺癌患者T淋巴細胞亞群和NK細胞變化及臨床意義。方法 回顧分析570例肺癌患者淋巴細胞亞群的流式細胞術檢測結果。結果 肺癌在51～80年齡段內發病率占78.6%；肺癌患者CD4+T細胞相對減低、CD8+T細胞相對增高、CD4+/CD8+比值明顯降低，與正常對照組比較差異有統計學意義（P＜0.05）；隨著肺癌患者年齡降低，NK細胞有明顯降低趨勢（P＜0.01），CD3+T細胞有明顯增加趨勢（P＜0.01）。結論 肺癌患者CD4+T淋巴細胞亞群及NK細胞活性受到抑制，CD4+/CD8+比值顯著降低，細胞免疫功能下降，年齡越年輕其細胞免疫功能越紊亂；流式細胞術檢測外周血T淋巴亞群對評價療效、判斷預后具有重要價值。

肺癌；T淋巴細胞；NK細胞；流式細胞術

肺癌是全世界最常見的惡性腫瘤。肺癌的5年生存率只有10%～20%[1]，預后極差。近50年來，我國肺癌發病率明顯增高，在大中城市肺癌已居男性腫瘤之首。T淋巴細胞在抗腫瘤中具有極其重要的作用；T細胞應答是控制腫瘤生長發育的最重要的宿主應答；參與抗腫瘤免疫的兩類T細胞亞群為CD4+輔助/誘導T細胞、CD8+抑制/細胞毒T細胞；T淋巴細胞及亞群可作為臨床判斷患者狀態的一個敏感指標，對臨床治療具有重要意義。NK細胞在抗腫瘤的天然免疫和特異性免疫中發揮效應作用，能夠直接殺傷各種腫瘤細胞和病毒感染細胞，是機體抗腫瘤的第一道防線。本文旨在探討肺癌患者淋巴亞群變化和不同年齡組細胞免疫狀況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

570例肺癌患者均為2009年1月～2012年10月淮南東方醫院集團腫瘤醫院初次住院的臨床確診患者，其中，男性 481例，女性 89例，男女比例為 5.4∶1；最大年齡92歲，最小27歲，中位年齡66歲。正常對照組20例，其中，男性13例，女性7例，年齡35～57歲，均為體檢未發現腫瘤及免疫性疾患的人員。

1.2 樣本采集

肝素真空采血管采集靜脈血2 mL，室溫放置，樣本24 h內做染色處理。

1.3 試劑儀器

使用BD MultitestTM IMK kit四色熒光抗體試劑盒（Cat No:340503），CaliBRITETM 3 COLOR KIT（Cat No:340 486）和 CaliBRITETM APC（Cat No:340487）定標熒光微球，FACSCalibur流式細胞儀（美國BD公司），調用四色免洗條件MultiSET軟件自動分析淋巴細胞亞群；報告NK細胞（CD16+56+）、T 淋巴細胞（CD3+）、輔助/誘導 T 細胞（CD3+CD4+CD8-）和抑制/細胞毒 T 細胞（CD3+CD4-CD8+）占淋巴細胞的百分比和CD4+/CD8+細胞比值。

1.4 統計學處理

表1 肺癌患者和對照組外周血淋巴細胞亞群檢測結果（±s）

表1 肺癌患者和對照組外周血淋巴細胞亞群檢測結果（±s）

注：與對照組比較，aP＜0.05；與71～80歲組比較，bP＜0.05

年齡（歲）例數（n）百分比（%）NK（%）CD3+（%）CD4+（%）CD8+（%）CD4+/CD8+≤40（1）41～50（2）51～60（3）61～70（4）71～80（5）≥81（6）總計對照組（7）20 59 146 136 164 45 570 20 3.5 10.4 25.6 23.9 28.8 7.9 100.0-16.15±6.08b 15.56±8.93b 16.97±8.93b 17.22±10.13b 20.48±9.75 18.98±11.64 18.02±9.74 18.25±6.11 71.55±8.68b 70.81±11.37b 69.01±10.9b 68.01±12.05 66.31±11.73 68.51±13.32 68.23±11.67 68.80±5.23 35.8±7.74a 38.86±9.45a 37.29±10.43a 36.36±11.01a 36.02±11.29a 35.53±9.24a 36.68±10.56a 44.60±3.72 33.25±9.29a 29.81±8.88a 29.64±10.81a 30.12±11.87a 29.20±10.80a 31.62±13.31a 29.93±11.05a 23.70±3.80 1.20±0.50a 1.45±0.66a 1.49±0.73a 1.48±0.93a 1.51±1.22 1.53±1.45 1.48±0.99a 1.94±0.39

2 結果

2.1 肺癌不同年齡組構成比

本組結果在51～80歲年齡段內發病人數占肺癌總人數的78.3%，是肺癌高發年齡段。肺癌在71～80歲組發病率最高（28.8%），可能是人的衰老，免疫系統功能衰弱，特別是細胞免疫功能下降，導致腫瘤發病率增加。由于80歲以上人群數量明顯減少，其發病率明顯減低并不能說明其發生肺癌的概率會降低。各組比例如圖1。

2.2 肺癌患者不同年齡組與對照組淋巴細胞亞群結果

肺癌患者CD4+T細胞相對減低、CD8+T細胞相對增高、CD4+/CD8+比值明顯降低，與正常對照組比較差異有統計學意義（P＜0.05）；NK和CD3+T細胞與對照組比較，差異無統計學意義。肺癌患者不同年齡組與對照組淋巴細胞亞群結果見表1。

2.3 肺癌患者淋巴亞群結果的年齡趨勢分析

以年齡組（1）～（5）組為自變量，以淋巴亞群結果為因變量作線性回歸分析，SPSS 17.0軟件統計結果見表2。

表2 肺癌患者淋巴亞群結果的年齡趨勢分析

隨著肺癌患者年齡降低NK細胞有明顯降低趨勢（P＜0.01），CD3+T 細胞有明顯增加趨勢（P ＜0.01），如圖2。

3 討論

CD4+T細胞可直接殺傷腫瘤細胞，可識別腫瘤細胞分泌的可溶性抗原，參與B細胞、巨噬細胞、自然殺傷細胞和細胞毒T細胞的激活，進而發揮抗瘤作用；CD4+T細胞的減少可以解釋腫瘤的免疫逃避機制。腫瘤細胞具有分泌多種免疫抑制因子功能，可抑制T細胞和NK細胞[2]，使T細胞和NK細胞數量減少，T細胞和NK細胞減少可削弱機體的免疫監視作用。本組結果顯示T細胞和NK細胞明顯降低，說明腫瘤患者存在免疫逃避；隨著年齡的增大CD4+T細胞降低明顯，免疫功能隨年齡增加而不斷下降[3]，腫瘤的免疫逃避增加。

NK細胞具有抗腫瘤，抗病毒感染，抗器官移植，參與T淋巴細胞、B淋巴細胞的調節及其免疫調節的功能。NK細胞通過受體作用維持平衡、發揮殺傷效應[6-7]。Cooper MA等[8]研究證明人外周血NK細胞可分為二群，80%～90%的NK細胞低表達CD56高水平表達CD16（CD56dimCD16brigh），此類細胞可有效地發揮細胞毒作用；10%～20%的NK細胞表型為CD56brighCD16dim或CD56brighCD16-，其功能主要是分泌細胞因子，參與機體的免疫調節。陳文寬等[9]研究78例喉咽鱗癌患者發現癌癥組較非腫瘤對照組NK細胞活性低；局部晚期患者及有區域淋巴結轉移患者的NK細胞活性同樣降低。康培良等[10]報道胰腺癌根治手術治療后可明顯提高T細胞亞群和NK細胞的免疫功能。本研究肺癌患者NK細胞降低與文獻一致[9-11]，患者越年輕NK細胞免疫活性越低。

在21～40歲組NK細胞明顯降低，CD3+細胞、CD8+T細胞明顯增高，CD4+/CD8+比值顯著降低（P ＜0.01），在71～80 歲組NK細胞比前四組明顯增高（P＜0.01）、稍高于對照組，說明年輕患者細胞免疫功能活躍，老年患者機體代謝慢、腫瘤生長也相對緩慢，老年機體本身免疫低下，細胞免疫反應降低。不同年齡的肺癌患者細胞免疫功能不同，其治療策略、方法也應不同。肺癌患者越年輕細胞免疫功能紊亂越明顯，提示年輕患者的治療更要注重細胞免疫的調節和平衡。而老年患者機體本身免疫功能低下，細胞免疫對腫瘤的抑制能力有限，應注意機體的整體性治療，防止并發癥。

總之，肺癌患者的CD4+T細胞降低、CD8+T細胞升高、CD4+/CD8+比值顯著降低，NK細胞降低，說明患者免疫功能處于抑制狀態，T細胞亞群及NK細胞活性檢測可作為肺癌免疫功能及預后的監測指標。肺癌年輕患者細胞免疫功能紊亂明顯，提示年輕患者的治療更要注重細胞免疫的調節和平衡。

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Analysis on T cell subset and NK cell of peripheral blood of 570 cases of lung cancer patients

XING Yingru MENG A'naRUAN Jianhua
Clinical Laboratory,Huainan Cancer Hospital of East Hospital Group,Anhui Province,Huainan 232035,China

ObjectiveTo explore the different age patients with T lymphocyte subsets and NK cell changes and its clinical significance.MethodsA retrospective analysis of 570 cases of patients with lung cancer detection results of lymphocyte subsets by flow cytometry.ResultsThe incidence rate of lung cancer was 78.6%in 51 to 80 age group;CD4+T cells were relatively lower,CD8+T cells were relatively increased,CD4+/CD8+ratio was significantly lower in lung cancer patients,compared with the normal control group,there were obvious meaningful differences(P<0.05);With lowering the age of patients with lung cancer,NK cells tended to decrease significantly(P<0.01),CD3+T cells tended to increase significantly(P<0.01).ConclusionCD4+T cells subsets and NK activity are inhibited,CD4+/CD8+ratio is significantly lower,and cell immune function is decreased in the patients with lung cancer,the younger the age,the more disordered cellular immune function;Detection of peripheral blood T-cell subsets by flow cytometry has important value to evaluate the therapeutic effect and prognosis.

Lung cancer;T lymphocyte;Natural killer cell;Flow cytometry

R734

A

1674-4721（2013）04（b）-0093-03

2013-01-29 本文編輯：郭靜娟）