ELISA法檢測乙肝表面抗原產生假陽性的臨床應用

姜志康

（上海市崇明縣精神衛生中心，上海 202150）

ELISA法檢測乙肝表面抗原產生假陽性的臨床應用

姜志康

（上海市崇明縣精神衛生中心，上海 202150）

用ELISA法來檢測乙肝表面抗原產生假陽性在臨床上，已經有著廣泛的應用。本文的目的是在臨床應用中，乙肝表面抗原有“假陽性”的產生時，運用ELISA法來檢測，對其進行細致地分析，然后找對解決問題的方法，提高臨床應用效果。本文采用的方法是用轉速和時間的不同，對同一批的標本采取離心，然后運用ELISA法來檢測乙肝表面抗原。通過嚴密地論證之后，同一批標本通過增加標本的離心時間和提高離心速度使假陽性結果減少。ELISA法檢測能夠檢測出離心是乙肝表面抗原產生“假陽性”的重要影響因素，檢測乙肝表面抗原的假陽性在臨床上有著廣泛的應用。

ELISA法；檢測；乙肝表面；抗原；假陽性；臨床應用

在我國，乙型肝炎有著很高的發病率，而且有著嚴重的傳染性，嚴重地危害著人們的身體健康和生活質量。乙型肝炎的表面抗原（HBsAg）作為乙肝感染的指標之一，所以，對HBsAg進行檢查通常是進行體檢的內容之一，同時，對于防治和治療乙肝有著非常重要的意義。對乙肝表面抗原進行檢測，通常用的ELISA法即酶聯免疫吸附試驗夾心法，ELISA有很多的優點，如簡單的操作、可靠的技術、方便的試劑、檢測地點隨意等優點，進入到新世紀以來，隨著科技的發展，ELISA技術也在不斷地成熟，其特異性和靈敏度得到了非常明顯地提高，因此雖然HBsAg檢測新技術，不斷地建立應用P化學發光法、CR、電化學發光法、時間分辨免疫熒光法，ELISA在眾多的技術中仍是一項成熟的、具有較大應用價值的檢測技。在臨床上，用ELISA法作為主要檢測技術，對HBsAg進行檢測。ELISA法對HBsAg試劑檢測血標本時，會經常地發現數孔有弱陽性的出現，某市臨床檢驗質控中心所規定的0.0735≤OD值≤0.210，一定要重新進行檢測，翌日是，重新檢測，降低了陽性率。經細致分析，不斷地研究，經過臨床應用的論證，找到了產生假陽性之原因所在，提高了臨床應用效果。

1 ELISA法的優點

較高的靈敏性。測定法最高的靈敏度其實是報告集團中的酶所起的作用。酶是一種常用的有機催化劑，即使很少量的酶也能誘導很多的催化反應，就會有一些明顯的可以觀察的現象產生，主要是顯色反應。所以，在該體系很多時候被叫做酶的放大體系。所以，ELISA檢測法在亞細胞或細胞水平上，實現了示蹤抗原以及抗體所在的部位，可以對其進行定量，如微克、納克。

較強的特異性。特異性其實是抗體以及抗原的選擇上。抗原與抗體進行結合，實際上，只是在抗原中的抗原決定簇和抗體中的抗原結合位點間進行結合。因為二者化學結構以及空間構型是屬于互補關系，致使抗原抗體的反應有較強的特異性。

2 ELISA法的檢測

2.1 材料和方法

2.1.1 材料：某醫院臨床患者標本200份。

2.1.2 試劑與儀器：試劑采用的是上海實業科華公司生產的HBsAgELISA試劑盒。儀器是美國寶特ELX-50型生產的全自動洗板機，美國生產的寶特ELX-800型全自動酶標測定儀，北京生產的LDZ5-2離心機。

3 方 法

對200例患者進行靜脈血的抽取，抽取血清標本進行離心。離心后，嚴格按HBsAg的SOP進行檢測的要求檢測。在離心的過程中要經歷4個程度，轉速1000rpm，時間5 min；轉速2000rpm，時間5 min；轉速3000rpm，時間15min；轉速3000rpm，時間30min。

4 結 果

200例標本的檢測結果，統計值P＜0.05，具有統計學意義。

5 討 論

ELISA檢測會受到很多的影響因素，比如血細胞[3]、檢測時間、洗板方式[4]、加樣量、血清分離等。通過200份標本的檢測結果進行分析和比較后發現，試劑的空白、陰陽性的對照、室內的質控孔OD值都處于正常范圍，血液的標本孔OD值卻出現了異常情況，仔細分析后發現，原因是出在了標本離心時和放置血液的時間上。

在對標本進行留取檢驗之前，采用金標試劑進行檢測，其檢測結果皆為陰性，運用ELISA法對HBsAg進行檢測的過程中，所有標本陽性率理論上不應很高[3]。在臨床應用中，通過對標本的離心時間進行增加，對離心速度進行改進，就解決了很多影響臨床應用的關鍵問題。

在對標本進行徹底離心后，分離不會溶血，這樣就能得到較為準確的結果。這樣也說明，對標本進行離心處理，好或者壞都直接影響著臨床的準確性。

同時，運用ELISA法對血標本進行檢測，影響結果的最主要原因如下[4]：①血清里所有的補體都能和IgG中的Fc段相結合，這是假陽性產生的原因之一。②血漿里的纖維蛋白原與酶的結合物，混在一起后最容易粘附在ELISA的檢測板上，并且難于洗掉，這是假陽性產生的原因之二。③血清里如果有類似的風濕因子（RF），其能夠和抗體相結合，這是假陽性產生的原因之三。④免疫球蛋白聚合物、免疫復合物易吸附于塑料表面，可造成非特異性吸附，導致假陽性。為了避免ELISA試劑“檢測時假陽性的出現”，為了降低檢測的假陽性率，取得準確的結果，

6 ELISA法的臨床應用

①試劑盒使用前，要平衡與室溫相同。②檢測時盡量用抗凝血的標本。③溶血的標本要重新抽血[1,2]。④冬天抽血后，放置于溫水中2h，待凝塊收縮后再檢測。⑤檢測離心標本之前，離心速度加大至（3000 rpm），離心時間增加15 min，讓紅細胞與纖維蛋白能夠完全地沉淀、以至離心完全。⑥放置標本10 h后檢測好，血凝塊可很好地收縮，標本里的非特異性活性物質能夠部分或全部地失活，降低了非特異性反應，這樣會需時間長。但這樣能降低ELISA法檢測的假陽性率，增強臨床效果。

[1] 黃秋芳,王微,李永.ELISA檢測HBsAg復檢結果的分析[J].檢驗醫學,2004,19(4):603.

[2] 陳傳德,冷霜.ELISA一步法檢測HBsAg影響因素分析[J].中國衛生檢驗雜志,2003,13(3):853.

[3] 施紀文,徐簡華,溫惠萍. ELISA法和膠體金免疫層析法檢測乙肝表面抗原的比較[J].現代檢驗醫學雜志,2005,20(5):48-49.

[4] 邢培清,劉玉振.實用輸血檢驗[M].鄭州:鄭州大學出版社,2001:95-145.

R512.6+2

A

1671-8194（2013）16-0394-02