彈力纖維染色方法的改良與體會(huì)

王志東 張子軍

彈力纖維染色方法的改良與體會(huì)

王志東 張子軍

彈力纖維廣泛分布于人體的血管、肺、心臟等組織中。在研究肺腺癌彈力纖維的過(guò)程中, 摸索出比較好的彈力纖維染色方法, 現(xiàn)介紹如下。

1 染色程序

①切片脫蠟至水。②Lugol碘液處理5 min。③稍水洗。④5%硫代硫酸鈉處理5 min。⑤流水沖洗5min。⑥75%乙醇稍冼。⑦醛品紅染液處理10min；⑧75%乙醇浸洗2次,每次約10秒；⑨稍水洗；⑩Harris蘇木素復(fù)染, 酒精脫水,二甲苯透明, 中性樹膠封片。

2 染液配制

①Lugol碘液配制碘片:碘化鉀:蒸餾水=1g:2g:100 ml,至碘片全部溶解。②醛品紅染液配制堿性品紅:70%乙醇:濃鹽酸:三聚乙醛=0.5 g:100 ml:1ml:1ml。③Harris蘇木素復(fù)染液配制蘇木素精:無(wú)水乙醇:甘油:硫酸鉀鋁:蒸餾水:冰乙酸=2 g:100 ml:100 ml:3 g:100 ml:10 ml(配制完畢, 陽(yáng)光下曝曬6周后方可使用, 并且每日搖動(dòng)一次)。

3 染色結(jié)果

彈力纖維染成紫紅色, 呈波浪狀分布；細(xì)胞核染成藍(lán)色；二者對(duì)比明顯, 可以在充分了解組織全貌的情況下對(duì)彈力纖維的分布、堆積的量進(jìn)行細(xì)致的觀察, 也可以對(duì)細(xì)胞與彈力纖維的關(guān)系進(jìn)行比較觀察, 并且在觀察彈力纖維的過(guò)程中,可同時(shí)看到肺腺癌腫瘤細(xì)胞的分化狀況, 使切片更直觀和醒目。此方法用時(shí)短, 染液易配制, 要求條件不高, 切片可長(zhǎng)時(shí)間保存。

4 注意事項(xiàng)

在75%乙醇浸洗時(shí), 時(shí)間要嚴(yán)格掌握, 并要隨時(shí)在顯微鏡下控制染色的情況, 以便隨時(shí)終止乙醇浸洗, 防止切片被75%乙醇脫色。Harris蘇木素復(fù)染時(shí), 根據(jù)染色室室溫的條件將時(shí)間掌握在3~5 min。然后進(jìn)行自來(lái)水沖洗返藍(lán), 自來(lái)水沖洗時(shí)間要充分, 返藍(lán)要徹底, 同時(shí)也要在顯微鏡下進(jìn)行染色控制。染色完成后切片直接進(jìn)入無(wú)水乙醇脫水, 脫三次,每次2 min。

5 討論

彈力纖維在新鮮標(biāo)本上呈黃色發(fā)亮的細(xì)線條狀［1］。在HE染色狀態(tài)下, 呈現(xiàn)鮮艷的粉紅色, 但是, HE染色的組織學(xué)切片, 除細(xì)胞核呈藍(lán)色外, 細(xì)胞漿、細(xì)胞膜及細(xì)胞間質(zhì)多呈現(xiàn)為深淺不一的紅粉色, 再加上組織發(fā)生病理改變而導(dǎo)致彈力纖維斷裂、增生, 進(jìn)而導(dǎo)致其排列散亂, 更難以判斷彈力纖維發(fā)生了怎樣的病理改變。所以找到一種簡(jiǎn)便、有效的彈力纖維染色方法就尤為重要。如, 發(fā)生慢性支氣管炎、肺腺癌、彈力纖維瘤、動(dòng)脈粥樣硬化、不明原因動(dòng)脈炎等疾病時(shí),彈力纖維會(huì)發(fā)生病理改變。傳統(tǒng)地衣紅染色時(shí)間以天計(jì), 并且在用鹽酸酒精分化時(shí), 對(duì)時(shí)間的控制要求非常高, 必須在顯微鏡下觀察分化程度, 一旦彈力纖維清晰, 應(yīng)立刻終止分化。否則, 一旦發(fā)生過(guò)分化, 經(jīng)過(guò)多日反應(yīng)而染色的彈力纖維上的地衣紅就會(huì)被鹽酸酒精脫色, 而達(dá)不到染色效果?？墒? 若分化時(shí)間不夠, 組織背景染色就比較重, 彈力纖維與組織背景對(duì)比就不明顯, 影響染色結(jié)果觀察。Weigert間苯二酚—堿性品紅是顯示彈力纖維最常用方法之一［2］, 用此方法染彈力纖維, 可以顯示的比較清晰, 但是, 這種方法會(huì)使膠原纖維著色, 所以這種方法的特異性就受到質(zhì)疑。而維多利亞藍(lán)染色時(shí)間長(zhǎng), 分化難以掌握, 結(jié)構(gòu)顯示不夠清晰, 也給判斷帶來(lái)困難。本方法在醛品紅法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn), 從染色效果上看, 彈力纖維顯色清晰, 與背景對(duì)比明顯, 無(wú)其他非特異性染色。同時(shí), 這種染色方法操作簡(jiǎn)單、染色時(shí)間短、染色液可重復(fù)使用。這些特點(diǎn)為診治、研究富于彈力纖維改變的疾病奠定了組織學(xué)基礎(chǔ)。

［1］ 王玉清. 彈力纖維染色法的改進(jìn). 錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2001,22(2): 26.

［2］ 李冰, 劉同慎, 馬云, 等. 長(zhǎng)效Weigert彈力纖維染色液染色效果分析. 濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2002, 25(2): 157.

116001 大連市第六人民醫(yī)院病理科(王志東);大連市兒童醫(yī)院(張子軍)