基質金屬蛋白酶－1基因多態性與動脈粥樣硬化性腦梗死相關性研究＊

張晉霞，張志勇，劉 斌，史富華，李紹彩，張文彥，張 蕊（河北聯合大學附屬醫院：.神經內科，.神經外科，河北唐山 06000；遵化市人民醫院：.神經內科，.心內科，河北遵化 0600）

頸動脈粥樣硬化導致動脈粥樣硬化腦梗死（ACI）的病理機制主要包括血管腔狹窄致使腦組織缺血和斑塊脫落造成栓塞，超過60%的ACI患者由后者所致[1]。因此，斑塊不穩定性研究對預防ACI尤其重要。基質金屬蛋白酶－1（MMP－1）基因轉錄起始點的插入或缺失突變，對MMP－1表達有不同影響，使其對動脈粥樣硬化斑塊的降解作用不同，影響動脈粥樣硬化發展[2]。本研究分析了ACI患者MMP－1基因突變和外周血MMP－1水平的關系，旨在為頸動脈斑塊的破潰、脫落及斑塊內出血等引起ACI提供預防治療參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 河北聯合大學附屬醫院2010年10月至2012年10月收治的ACI患者95例，均符合全國第四屆腦血管病學術會議《各類腦血管疾病診斷要點》中的診斷標準，并經頸動脈超聲檢查證實存在頸動脈硬化；所有患者無外傷、動脈炎癥、血液疾病、囊腫、藥物和腦血管畸形導致的腦梗死；根據頸動脈超聲檢查結果分為不穩定斑塊組51例和穩定斑塊組44例。不穩定斑塊組患者中，男28例、女23例，年齡48～76歲，平均54.6歲；穩定斑塊組患者中，男29例、女15例，年齡47～81歲，平均56.3歲。同期于該院體檢健康者58例納入對照組，男37例、女21例，年齡49～73歲，平均61.45歲，均無主要臟器系統疾病，頸動脈無硬化現象，無腦梗死家族史和病史。性別、年齡各組間比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 MMP－1基因多態性檢測 采集受檢者靜脈血3mL，酚抽提法提取血白細胞DNA；5%瓊脂糖凝膠電泳熒光法估測DNA濃度，稀釋至20μg／L[3]；采用PerKin－Elme公司聚合酶鏈反應擴增儀擴增MMP－1基因特異片段，上游引物：5′－TCG TGA GAA TGT CTT CCC ATT－3′，下游引物：5′－TCT TGG ATT GAT ITG AGA TAA GTG AAA TC－3′，反應條件為：95℃30s，55℃30s，72℃30s，35個循環；取5μL產物與2 μL 10×NE緩沖液、0.2μL牛血清清蛋白、0.3μL XmnI、2.5 μL超純水混勻，靜置3.0h[4]；聚丙烯酞胺凝膠電泳混勻液，EB染色后紫外燈下觀察。

1.2.2 外周血MMP－1水平檢測 體檢健康者于體檢時、患者于發病后第1、3、7天采集肘靜脈血3mL，采用酶聯免疫吸附法試劑盒（武漢博士德）測定MMP－1水平[5]。

1.3 統計學處理 采用Excel2003建立數據庫，以SPSS18.0軟件分析數據；計量資料以x±s表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；顯著性檢驗水準為α＝0.05，P＜0.05為比較差異有統計學意義。

2 結 果

不穩定斑塊組2G／2G基因型頻率和2G等位基因頻率顯著高于穩定斑塊組（P＜0.05）；不穩定斑塊組和穩定斑塊組2G／2G基因型頻率與2G等位基因頻率均顯著高于對照組（P＜0.05），見表1。不穩定斑塊組和穩定斑塊組外周血MMP－l濃度比較差異無統計學意義（P＞0.05）；不穩定斑塊組和穩定斑塊組各時間點外周血MMP－l濃度均高于對照組（P＜0.05），見表2。

表1 MMP－1基因型頻率分布[%（n）]

表2 外周血MMP－l水平比較（μg／L，x±s）

3 討 論

頸動脈粥樣硬化斑塊內覆蓋的纖維帽將斑塊內的成血栓性物質與血液隔開，是決定斑塊是否穩定的關鍵，如果纖維帽受損或破裂，可導致斑塊內物質進入血液，促使血栓形成，引發動脈阻塞誘發ACI[6]。MMP－1是基質金屬蛋白酶家族中表達量最高的腸膠原酶，能夠降解血管內膜和粥樣斑塊纖維帽的主要組成蛋白，即Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白。有研究證實，頸動脈粥樣硬化斑塊邊緣和泡沫細胞積聚處MMP－1濃度較高，說明MMP－1通過降解Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白使纖維帽變薄，促進粥樣斑塊進入不穩定狀態[7]。MMP－1基因位于染色體11q22－q23，有10個外顯子和9個含子，1 607bp位點為轉錄因子結合位點，該位點出現單個G核苷酸插入或缺失，可導致單核苷酸多態性的出現，影響MMP－1基因的表達[8]。

本研究通過檢測ACI患者MMP－1基因多態性和外周血MMP－1水平，并結合超聲檢查，從斑塊形態學上探討了MMP－1基因多態性、外周血MMP－1水平、頸動脈粥樣硬化斑塊穩定性和ACI的關系，結果證實MMP－1基因多態性影響外周血MMP－1水平，而頸動脈斑塊的不穩定能夠預示發生ACI的可能。

總之，MMP－1基因多態性及外周血MMP－1水平均與ACI具有相關性，MMP－1基因型檢測聯合頸動脈斑塊超聲影像學檢查，有利于及早發現不穩定斑塊，盡早采取干預措施，降低ACI發病率。

[1]謝明劍，薛偉新，邱楚雄，等.腦梗死病人梗死面積與MMP1，MMP9，TIMP1的關系探討[J].中西醫結合心腦血管病雜志，2011，9（2）：173－174.

[2]姜紅菊，張梅，李大慶，等.冠心病患者基質金屬蛋白酶－1基因多態性[J].中國動脈硬化雜志，2010，13（5）：589－592.

[3]侯旭敏，劉華，關韶峰，等.基質金屬蛋白酶－1與冠狀動脈斑塊穩定性的相關研究[J].中國心血管病研究，2007，5（12）：889－891.

[4]張志毅，梅軼芳，趙彥萍.益氣活血化痰法中藥對泡沫細胞基質金屬蛋白酶1／2mRNA表達的影響[J].中國中西醫結合急救雜志，2007，12（4）：238－241.

[5]謝明劍，邱楚雄，薛偉新，等.腦梗死患者基質金屬蛋白酶1，9及其組織抑制因子1與血脂關系的研究[J].中西醫結合心腦血管病雜志，2009，7（10）：1168－1169.

[6]楊世杰.基質金屬蛋白酶在心血管疾病中的作用[J].遼寧醫學院學報，2007，28（2）：49－50.

[7]王浩坤，趙洛沙，周帥，等.河南省漢族人群基質金屬蛋白酶－1基因－519A／G多態性及其血漿水平與急性冠狀動脈綜合征的相關性分析[J].臨床心血管病雜志，2010，26（5）：371－374.

[8]方勤，王啟賢.基質金屬蛋白酶－1與冠心病[J].長江大學學報，2011，3（2）：319－321.