人參煎劑對一次力竭游泳小鼠血清IFN－γ、IL－4表達的影響

馬閃閃 馬賢德 孫宏偉 陳文娜 陳殿學

遼寧中醫(yī)藥大學，遼寧 沈陽 110847

競技運動和全民健身是我國體育事業(yè)的發(fā)展戰(zhàn)略，尤其在08年北京奧運會之后，運動和健康成為全民關(guān)注的熱點話題之一。但是，由于人們對運動科學缺乏足夠的認識，很多情況下，運動不但沒有增強人們的體質(zhì)反而對機體的免疫功能造成了不良的影響。例如，運動員在大負荷訓練和比賽期間很容易因免疫抑制患各種感染疾病;“全民健身”熱潮中，人們對運動量和形式缺乏科學合理的安排，損害免疫系統(tǒng);當前社會生活節(jié)奏加快，長時間高強度緊張工作使機體免疫系統(tǒng)處于抑制狀態(tài)，從而對某些疾病易感。研究表明:一次高強度長時間運動引起免疫系統(tǒng)功能的暫時性抑制［1］。因而，預(yù)防運動性免疫抑制和促進運動后免疫功能恢復(fù)是運動免疫學研究的焦點之一。運動免疫增強營養(yǎng)補劑的合理使用在一定程度上解決了這一難題，國內(nèi)外越來越多的學者把運動營養(yǎng)補劑的開發(fā)重點轉(zhuǎn)移到我國傳統(tǒng)中藥。

人參屬于傳統(tǒng)滋補強壯類中藥，具有大補元氣、固脫生津的功用，在提高機體免疫力方面有著獨特的療效［2］。本實驗嘗試用人參煎劑調(diào)節(jié)力竭運動后的免疫抑制癥狀，在運動后不同時間測量血清IFN－γ和IL－4水平，觀察小鼠免疫功能的變化，探討人參煎劑能否改善一次力竭運動導(dǎo)致的免疫抑制，為人參煎劑在競技體育和全民健身中發(fā)揮有效的免疫調(diào)節(jié)作用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 潔凈級健康昆明種小鼠96只，雌雄各半，體重 (20±2)g，購于遼寧中醫(yī)藥大學動物中心，分籠飼養(yǎng)，自然光照，自由飲水進食。

1.1.2 人參煎劑制備 人參選用遼寧桓仁產(chǎn)6年生曬參，切片，浸泡1小時，傳統(tǒng)方法煎煮3次，過濾、合并、濃縮至50%濃度，裝入玻璃瓶中，低溫冷藏備用。

1.2.3 實驗試劑和儀器 電子天枰，型號JY5002，上海精密科學儀器有限公司生產(chǎn);酶標儀，型號Anthos2010，奧地利Anthos Labtec Instruments生產(chǎn);超速離心機，型號DU PONT/SORV－LL，OTD－558，美國生產(chǎn);小鼠 IL－4 ELISA試劑盒，購自上海越研生物科技有限公司，生產(chǎn)批號DRE61041;小鼠IFN－γ ELISA試劑盒，購自上海越研生物科技有限公司，生產(chǎn)批號DRE61042。

1.2 試驗方法

1.2.1 分組方法 96只鼠隨機分為以下幾組:模型組(M)40只，模型+人參組 (MG)40只，按照取材時間不同平均分成5組，即力竭游泳后即刻組 (M1、MG1)、6h組(M2、MG2)、24h組(M3、MG3)、48h組 (M4、MG4)、72h組(M5、MG5)。另設(shè)空白對照組(B)、人參對照組(G)，每組8只。

1.2.2 給藥方法 小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，G和MG組灌服人參煎劑0.3ml/d/只，B和M組灌服等量生理鹽水，連續(xù)14天。

1.2.3 造模方法 最后一次給藥結(jié)束后1h，M和MG小鼠進行一次無負重游泳直至力竭。游泳池水深約30cm，溫度控制在 (32±2)℃。當小鼠浮在水面不動時，輕輕攪拌周圍水面，迫使小鼠持續(xù)運動，游泳完畢后用紗布吸干小鼠身上的水，再用吹風機吹干，避免小鼠感冒。

力竭判斷標準參照Dawson法:游泳動作緩慢，明顯失調(diào)，沉入水中10s不能露出水面，撈出后翻正反射消失［3］。1.3 血清IFN－γ和IL－4含量測定 具體操作方法參照試劑盒說明書。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計 實驗數(shù)據(jù)用SPSS19.0進行統(tǒng)計處理，組內(nèi)比較采用單因素方法分析，組間比較采用獨立樣本T檢驗，統(tǒng)計結(jié)果用“均數(shù)±標準差 (±s)”表示。

2 結(jié)果與分析

表1 各組小鼠血清IFN－γ、IL－4及IFN－γ/IL－4的表達比較

2.1 小鼠血清IFN－γ水平變化 與B比，M1、M2、M3、M4、MG1、MG2、MG3降低 (P＜0.01或P＜0.05)。可見，一次力竭游泳使小鼠血清IFN－γ含量降低，M組小鼠72h恢復(fù)至正常水平，MG組小鼠48h恢復(fù)至正常水平。

在相同時間點:MG小鼠血清IFN－γ含量普遍比M高，MG4小鼠血清IFN－γ含量明顯高于M4，P＜0.05?？梢?，人參煎劑可提力竭高運動后小鼠血清IFN－γ水平。

2.2 小鼠血清IL－4水平變化 與B比，M2明顯增高，P＜0.05?？梢?，一次力竭游泳后6h小鼠血清IL－4含量一過性增高，并很快恢復(fù)。

在相同時間點:M小鼠血清IL－4含量普遍高于MG，其中M2與MG2差異明顯，P＜0.05。可見，人參煎劑可維持小鼠血清IL－4在正常水平表達。

2.3 小鼠血清IFN－γ/IL－4比值變化 與B比:M1、M2、M3、M4、MG1、MG2比值降低 (P＜0.01或 P＜0.05);MG4、MG5比值增大，分別為P＜0.05和P＜0.01。可見，M小鼠一次力竭游泳后72h恢復(fù)正常值;MG小鼠24h恢復(fù)正常值，48h和72h比值大于B組。人參煎劑可促進小鼠IFN－γ/IL－4恢復(fù)正常水平，恢復(fù)速度明顯快于M組小鼠。

在相同時間點比較:M組各時間點IFN－γ/IL－4比值均高于MG組 (P＜0.01或P＜0.05)?？梢?，灌服人參煎劑可使小鼠IFN－γ/IL－4比值增大。

3 討論

免疫功能是人體重要的防御機能，也是人體體質(zhì)的代表性指標之一，運動對免疫功能有十分重要的影響，但并不是所有的運動都能增強人體的免疫功能。國內(nèi)外大量文獻表明［3－5］，急性大強度運動和力竭性運動都會使機體的免疫功能不同程度抑制，從而對某些疾病易感。因此，對運動后免疫抑制調(diào)理的研究是當今運動免疫學研究的焦點之一。目前常用的調(diào)理措施有［6－7］:①營養(yǎng)調(diào)理，包括基本營養(yǎng)素和功能因子兩大類。②自我保護調(diào)理，主要措施有多樣化平衡膳食、生活規(guī)律、睡眠充足、防止過度訓練等。③傳統(tǒng)中醫(yī)藥調(diào)理。中藥對免疫系統(tǒng)具有雙向調(diào)節(jié)作用，并且中藥的“整體調(diào)節(jié)作用”能調(diào)動機體的免疫功能和激發(fā)免疫應(yīng)答，被越來越多應(yīng)用于運動營養(yǎng)補劑的開發(fā)研究。本實驗的目的是探討人參煎劑能否緩解力竭性運動導(dǎo)致的運動性免疫抑制，能否促進免疫功能盡快恢復(fù)正常狀態(tài)，為改善力竭運動導(dǎo)致的免疫功能抑制尋找科學有效的調(diào)理方法，同時為人參在運動營養(yǎng)方面的開發(fā)提供科學依據(jù)。

在免疫系統(tǒng)中，IFN－γ和IL－4是一對相互調(diào)節(jié)的重要細胞因子，IFN－γ是Th1細胞分泌的標志性細胞因子，IL－4是Th2細胞分泌的標志性細胞因子，IFN－γ和IL－4既相互抑制又自身促進，除了維持自身的平衡和穩(wěn)定，對維持Th1/Th2的平衡也起重要作用［5］。本實驗結(jié)果表明，一次力竭游泳可使小鼠血清IFN－γ含量降低，IL－4含量一過性升高，IFN－γ與IL－4比值下降，Th1/Th2向Th2漂移，與Simth［8］報道的“過度運動時，機體免疫功能受到抑制，Th1/Th2比值下降”一致。在免疫功能恢復(fù)過程中，灌服人參煎劑的小鼠在力竭游泳后各項指標恢復(fù)速度更快，從而縮短了由于力竭運動造成的的免疫抑制時間。其中，MG組小鼠IFN－γ/IL－4比值在力竭游泳后48h和72h高于B和G組，這可能與運動后機體的超量恢復(fù)有關(guān)，有待于進一步研究探討。從相同時間點取材結(jié)果來看，G和MG組小鼠免疫功能明顯好于B和M組小鼠，這表明人參煎劑有效地緩解了由大運動量所致的免疫功能低下狀況。

綜上所述，由本實驗可得出以下結(jié)論:人參煎劑可促進小鼠血清IFN－γ和IL－4含量恢復(fù)至正常水平，縮短力竭運動后的免疫抑制時間并預(yù)防力竭運動造成的免疫功能低下，對力竭運動造成的免疫功能低下具有有效的預(yù)防和調(diào)節(jié)作用。

［1］徐勇靈，林建棣.運動影響免疫系統(tǒng)的機制及其研究的展望［J］.解放軍體育學院學報，2003，22(2):77－79.

［2］張均田.人參研究的最新進展［J］.江蘇大學學報 (醫(yī)學版)，2009，19(3).

［3］周晶.枸杞多糖對力竭游泳運動小鼠免疫功能的影響［J］.遼寧中醫(yī)藥大學學報，2009，11(8):234－236.

［4］Knowle SR，KeepingH，Graeber T，et al.Cytokine Control of PMNP hagocytosis:Regulatory Effects of Hypoxemia and Hypoxemia Reoxygena－tion［J］.Am J Physiol，1997，272(4Pt1):1352－1364.

［5］徐唯.運動導(dǎo)致IFN－γ/IL－4失衡與上呼吸道感染 (URTI)［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學，2009，36(16):3097－3098.

［6］王瑞元.運動生理學［M］.北京:人民體育出版社，2007:471－472.

［7］張愛芳.實用運動生物化學［M］.北京:北京體育大學出版社，2007: 396－398.

［8］Lakier Smith L.Overtraining，excessive exercise，and altered immunity:is this a T helper－1 versus T hel－per－2 lymphocyte response?［J］.Sports Med，2003，33(5):347－364.