HPLC測定清心安眠顆粒中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量

閆 冬田 原陳 雪翟延君

1.遼寧中醫藥大學，遼寧 大連 116600；2.遼寧中醫藥大學附屬醫院，遼寧 沈陽 110032

HPLC測定清心安眠顆粒中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量

閆 冬1田 原2陳 雪1翟延君1

1.遼寧中醫藥大學，遼寧 大連 116600；2.遼寧中醫藥大學附屬醫院，遼寧 沈陽 110032

目的：建立HPLC法測定清心安眠顆粒中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量。方法：采用Agilent TC－C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇－水（65∶35）；檢測波長：254 nm；流速：1 mL/min；柱溫：30℃。結果：五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素分別在0.62～3.1μg（r＝1）、3.8～19μg（r＝1）、1.98～9.9μg（r＝0.9997）范圍內線性關系良好。平均加樣回收率：五味子醇甲為99.88%，RSD為1.45%（n＝6）；五味子甲素為102.08%，RSD為2.25%（n＝6）；五味子乙素為101.53%，RSD為0.76% （n＝6）。結論：本法操作簡單、快速、重現性好，可用于清心安眠顆粒的質量控制。

高效液相色譜法；清心安眠顆粒；五味子醇甲；五味子甲素；五味子乙素

清心安眠顆粒是在遼寧中醫藥大學附屬醫院著名老中醫彭靜山教授的臨床經驗方的基礎上經田維柱教授加減化裁改進而成的有效方劑。由五味子，枸杞，酸棗仁和百合組成，具有清心除煩，安神定志的功效。為了有效地控制該顆粒的質量，保證臨床用藥的療效穩定、安全可靠，采用高效液相色譜測定清心安眠顆粒中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量。該方法靈敏度高，操作簡便、快速，結果準確可靠，專屬性強，重現性好，可用于清心安眠顆粒的質量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1100高效液相色譜儀（G1379A真空脫氣機，G1313A自動進樣器，G1315A柱恒溫箱，G1311A四元梯度泵，G1315B二極管陣列檢測器，Agilent B.04.03化學工作站）；HN101－3A型電熱鼓風干燥箱；AE－240電子分析天平；DK－98－1型電熱恒溫水浴箱。

1.2 試藥 五味子、酸棗仁藥材 （均購自河北安國，由遼寧中醫藥大學翟延君教授鑒定）五味子醇甲對照品 （批號：110857－200507）、五味子甲素（批號：0764－200107）、五味子乙素（批號：110765200306）均由中國藥品生物制品檢定所提供；水為娃哈哈純凈水，甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Agilent TC－C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇－水（65：35）；檢測波長：254 nm；流速：1 mL/min；柱溫：30℃。在此條件下，供試品中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素與其他組分峰均能達到基線分離，保留時間分別為五味子醇甲約為7.7min；五味子甲素約為29.1min；五味子乙素約為47.8min，理論板數按中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素峰計均不低于2000；分離度均大于2。符合中國藥典2010年版一部附錄系統適用性試驗要求。

2.2 樣品制備

2.2.1 陰性對照試驗 取處方量以相同工藝制備的陰性對照 （無五味子），按上述方法測定，結果為：陰性對照色譜圖中在與五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素對照品色譜圖相應的保留時間處無吸收即色譜峰的出現，結果表明陰性對照 （含百合、枸杞子、酸棗仁）用相同制備方法下提取的成分在測定波長處無吸收，故其五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素成分測定無干擾。

2.2.2 對照品溶液的制備 取五味子醇甲對照品、五味子甲素對照品、五味子乙素對照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每1mL含0.31mg的溶液、每1mL含1.9mg的溶

液、每1mL含0.99mg的溶液，混合即得。

2.2.3 供試品溶液的制備［1］取顆粒劑3g，精密稱定，加甲醇50m L，精密稱定，超聲提取30min，再精密稱定，用甲醇補足失重，搖勻，濾過，取續濾液，即得。分別精密吸取對照品溶液5μL與供試品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，測定，即得。對照品、供試品、陰性液色譜見圖1。

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系考察 精密吸取混合對照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL，注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測定五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素色譜峰面積，以進樣量X（μg）與峰面積Y，得回歸方程為：五味子醇甲Y＝1209X＋23.35，r＝1；五味子甲素Y＝380.46X－2.27，r＝1；五味子乙素Y＝173.53X－2.9，r＝0.9997；且五味子醇甲在0.62～3.1μg，五味子甲素在3.8～19μg，五味子乙素在1.98～9.9μg范圍內線性關系良好。2.3.2 精密度試驗 分別取上述對照品溶液，重復進樣6次，測定五味子醇甲RSD為0.112%；五味子甲素為0.94%；五味子乙素為0.64%。

2.3.3 穩定性試驗 取上述供試品溶液，分別在0、2、4、6、8h進樣，測定五味子醇甲RSD為0.48%；五味子甲素1.93%；五味子乙素1.59%，表明樣品在8小時內穩定。

2.3.4 重復性試驗 取供試品6份，每份約3g，按“2.2.3”項下方法制備，進樣測定五味子醇甲平均含量為1.077mg/g、RSD為1.87%（n＝6）、五味子甲素平均含量為0.178mg/g、RSD＝2.27%（n＝6）、五味子乙素平均含量為0.374mg/g、RSD＝2.16%（n＝6）。

2.3.5 加樣回收試驗 分別取已知含量供試品（五味子醇甲平均含量為0.538mg/g、五味子甲素平均含量為0.089mg/g、五味子乙素平均含量為0.187mg/g），加入定量的五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素對照品溶液，按 “2.1”項下的方法測定，計算其五味子醇甲回收率為9.88%，RSD為1.45%（n＝6）、五味子甲素回收率為102.08%，RSD＝2.25%（n＝6），五味子乙素為101.53%，RSD＝0.76%（n＝6）結果如表（1）。

表1 五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素加樣回收率

2.4 樣品測定 分別吸取對照品和3批供試品溶液，按 “2.1”項下的方法測定供試品中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量，其結果 （n＝3）如表2。

表2 樣品的含量測定

3 討論

3.1 提取方法的選擇 比較張彥東等［2］用氯仿萃取法和李正國等［3］用甲醇超聲的提取方法，結果證明后者提取較完全，且方法簡單易行，所以選擇甲醇超聲提取法。

3.2 流動相的選擇 比較并參考乙腈－甲醇－水（15∶15∶10）［4］、甲醇－水 （85：15）［5］、甲醇－水（75：25）［10］等方法及摸索試驗，最終確定以甲醇－水 （65：35）為流動相可以使清心安眠顆粒中五味子三種成分實現較好分離。

3.3 檢測波長的選擇 曾試驗220nm［4］、224nm［10］、245nm［5］和254nm［9、11］等檢測波長，結果顯示220nm和224nm處吸收較大，但是容易拖尾，比較245nm和254nm，后者更為穩定且常用，參考文獻［2－12］，故選擇254nm為檢測波長。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版一部［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：344.

［2］張彥東，余少婷，王麗菊.HPLC測定五味子糖漿中五味子甲素的含量［J］，中藥材，2005，28（8）：727－728.

［3］李正國，于立佐，障礙岑.RP－HPLC測定降酶靈膠囊中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量［J］.中成藥，2004，8（26）：618－621.

［4］崔蘭貴，王火，朱鐵粱等.HPLC法測定更年安片中五昧子甲素和五昧子乙素的含量［J］，中草藥，2001，32（5）：409－411.

［5］李瑞珍，廖華衛，陳飛苑.RP－HPLC測定丹參五味子片中丹參酮ⅡA和五味子甲素的含量［J］.中藥材，2007，30（6）：732－733.

［6］倪琳，楊錫.HPLC法同時測定生脈飲中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素正交試驗法優選安神顆粒的醇提工藝 ［J］.中成藥，2012，34（5）：872－875.

［7］楊人澤，鐘美興，嚴金玲.正交試驗法優選安神顆粒的醇提工藝 ［J］.中國實驗方劑學雜志，2011，17（19）：41－44.

［8］呂邵娃，管慶霞，李永吉.HPLC測定利肝隆片中五味子甲素和五味子乙素含量［J］.中成藥，2006，28（5）：662－664.

［9］侯冬巖，回瑞華，李鐵純，等.遼五味子的研究進展 ［J］.鞍山師范學院學報，2007，9（6）：14－17.

［10］禹琦.正交試驗法優選棗仁安神膠囊提取工藝 ［J］.中國醫藥導報，2011，5（8）：47－48.

［11］宋九華，楊孝容，張成志.HPLC測定安神補心丸中的五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹參酮ⅡA［J］.華西藥學雜志，2008，23（1）：110－112.

［12］杜英峰，袁志芳，張蘭桐等.RP－HPLC法測定五味子及維肝福泰片中五味子甲素和五味子乙素的含量［J］.中草藥，2004，35（5）：519－521.

Determination of Schisandrin、Deoxyschisandrin andγ－Schisandrin Qingxinanmian granules by RP－HPLC

YAN Dong1，TIAN Yuan2，Chen Xue1，ZHAI Yan－jun1
1.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian116600，China；2.Affiliated Hospital of Liaoning University o f Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，China

Objective：To setup a determination of Schisandrin，Deoxyschisandrin andγ－Schisandrin in qingxinanmian granules by HPLC.M ethod：These components were separated through Agilent TC－C18（250 mm×4.6mm，5μm）column with methanol water（65：35）by volume as a mobile phase.The flow rate was 1m l/min，and the detection wavelength was 254nm，and temprature was 30℃.Results：The linear range of Schisandrin，Deoxyschisandrin andγ－Schisandrin were 0.62～3.1μg，3.8～19μg and 1.98～9.9μg，respectively.The average recovery was 99.88%with RSD 1.45%（n＝6）for Schisandrin，102.08%with RSD 2.25%（n＝6）for Deoxyschisandrin and 101.53%with RSD 0.76%（n＝6）forγ－Schisandrin respectively.Conclusion：The method is simple，quick and rapid with good reproducibility.It can be used for the quality control of qingxinanmian granules.

HPLC；Qingxinanmian granules；Schisandrin；Deoxyschisandrin；γ－Schisandrin

R286

A

1007－8517（2013）12－0022－03

2013.04.17）

閆冬（1987－）、女（漢族）、碩士研究生、研究方向：中藥質量評價研究。Tel：13079235441 E－mail：yandong871111＠163.com

翟延君Tel：13019499386 E－mail：lnzyzyj＠sohu.com