RP－HPLC法同時測定維C銀翹片中綠原酸和牛蒡苷的含量

黃 婧馬健雄

1.廣西壯族自治區桂林市第二人民醫院藥劑科，廣西 桂林 541001；2.廣西金海堂藥業有限責任公司新藥研發中心，廣西 南寧 530313

RP－HPLC法同時測定維C銀翹片中綠原酸和牛蒡苷的含量

黃 婧1馬健雄2*

1.廣西壯族自治區桂林市第二人民醫院藥劑科，廣西 桂林 541001；2.廣西金海堂藥業有限責任公司新藥研發中心，廣西 南寧 530313

目的：建立同時測定維C銀翹片中綠原酸和牛蒡苷含量的方法，為該制劑質量標準的修訂提供依據。方法：采用RPHPLC法，色譜柱為Diamonsil－ODSC18（250mm×4.6mm，5μ）；流動相為乙腈－0.1%磷酸溶液；流速為0.8ml/min；檢測波長為327nm（0～25min）和280nm（25～50min），柱溫：25℃。結果：綠原酸在0.516～4.128μg范圍內、牛蒡苷在1.980～15.840μg范圍內線性良好；綠原酸平均加樣回收率為99.02%，RSD為0.83%，牛蒡苷平均加樣回收率為99.56%，RSD為0.69%；結論：本方法精密度高，分離度好，可用于同時測定維C銀翹片中綠原酸和牛蒡苷的含量。

維C銀翹片；綠原酸；牛蒡苷；RP－HPLC

維C銀翹片是由金銀花、連翹、薄荷、荊芥、淡豆豉、牛蒡子、桔梗等14種原料制成的中西藥復方制劑，具有辛涼解表、清熱解毒之功效，用于治療風熱感冒、咳嗽、口干、咽喉疼痛等。方中金銀花和牛蒡子清熱解表是本方的重要組成部分，其綠原酸和牛蒡苷為該制劑藥典［1］含測指標成分，但藥典方法分步測定，較為繁瑣且實驗成本高，目前尚未有同時測定該制劑中綠原酸和牛蒡苷含量的文獻報道。本文擬用RP－HPLC法對該制劑中綠原酸和牛蒡苷的含量進行同時測定，為保證藥品質量，提高、修訂藥品標準提供參考依據。

1 實驗材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀（SHIMADZU，SPD－10A VP Plus）；電子天平（SHIMADZU，AUW120D型）；超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，KQ2200型）

1.2 試劑 乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純；綠原酸對照品（批號：110753－200413，中國藥品生物制品檢定所）；牛蒡苷對照品（批號：110819－200505，中國藥品生物制品檢定所）

1.3 試藥 維C銀翹片各批次樣品（廣西金海堂藥業有限責任公司生產）

2 方法與結果

2.1 色譜條件與溶液的制備

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil－ODS C18（250mm ×4.6mm，5μ）；流動相為乙腈（A）－0.1%磷酸溶液（B）按表1進行梯度洗脫；流速為0.8m l/min；檢測波長為327nm（0～25min）用于檢測綠原酸；280nm（25～50min）用于檢測牛蒡苷；柱溫：25℃。

表1 梯度洗脫條件

2.1.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取綠原酸、牛蒡苷對照品適量，置25m l容量瓶中，加甲醇溶解，制成每毫升含綠原酸0.516mg，牛蒡苷1.98mg的對照品混合溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 取本品20片，除去糖衣，精密稱定，研細，混勻，取約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理 （功率250W，頻率40kHz）20分鐘，放至室溫，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜 （0.45μm）濾過，即得。

2.1.4 陰性對照溶液的制備 取維C銀翹片處方中各味藥材 （除去金銀花和牛蒡子），按藥典［1］方法制備空白樣品，再按“2.1.3”項方法制備陰性樣品溶液。

2.2 波長的選擇及色譜行為 分別取上述對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液按 “2.1.1”項條件進樣，兩種成分有較好的分離度 （圖1、圖2）。但兩種成分最大吸收波長相差甚遠，在327nm處綠原酸有最大吸收，牛蒡苷無吸收，而在280nm處牛蒡苷有最大吸收，故選擇綠原酸檢測波長為327nm，牛蒡苷檢測波長為280nm。

2.3 線性關系考察 分別精密稱取“2.1.2”項下對照品溶液1.0m l、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml，置10m l容量瓶中，加甲醇稀釋定容。分別進樣 （各進3針，每針10μl），以平均峰面積積分值為縱坐標 （y），以進樣量（μg）為橫坐標 （x），繪制標準曲線。綠原酸標準曲線：y＝2789.19x－10.0923，r＝0.9999；牛蒡苷標準曲線：y＝503.06x＋5.3217，r＝0.9998。線性范圍：綠原酸為0.516～4.128μg；牛蒡苷為1.980～15.840μg。

2.4 精密度試驗 精密吸取上述“2.1.2”項下對照品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件測定，重復測定5次，每次進樣量為10μl，記錄綠原酸、牛蒡苷的峰面積，RSD（綠原酸）＝1.27%，RSD（牛蒡苷）＝0.77%，表明儀器精密度良好。

2.5 重復性試驗 取同批號（20120901）樣品6份，按“2.1.3”項方法制備供試品，按“2.1.1”項下色譜條件測定，重復測定6次，每次進樣量為10μl，外標兩點法計算含量，RSD（綠原酸）＝0.95%，RSD（牛蒡苷）＝1.15%，說明該方法重復性良好。

2.6 穩定性試驗 取同一樣品（20120901）溶液，分別于0、2、4、6、8、10h各進樣10μl，記錄峰面積，RSD（綠原酸）＝1.56%，RSD（牛蒡苷）＝1.05%，表明該樣品溶液在10h內穩定。

2.7 加樣回收率試驗 取同一批號已知含量的樣品細粉（批號：20120901，綠原酸的含量2.45 mg/片，牛蒡苷含量3.62mg/片）6份，每份約0.1g，精密稱定。分別加入綠原酸和牛蒡苷對照品適量，按照供試品溶液制備方法，制備供試品溶液并測定綠原酸和牛蒡苷的含量。綠原酸平均回收率為99.02%，牛蒡苷平均回收率為99.56%，RSD（綠原酸）＝0.83%，RSD（牛蒡苷）＝0.69%，表明該法回收率良好。

2.8 樣品測定 取維C銀翹片各批次樣品，按“2.1.1”項下色譜條件進行含量測定，結果見表2。

表2 維C銀翹片含量測定結果

3 討論

維C銀翹片藥味較多，制定科學合理且具實用性的質量控制方法較為困難。現有標準［1］操作繁瑣，實驗成本較高，故還存在較大的提升空間。用現代科學儀器同時測定各指標成分的含量可節約時間和檢測成本，縮短企業生產周期，提高生產效率，有較大的推廣空間。本研究將為維C銀翹片質量標準的進一步完善提供科學依據。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010版一部）［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：1139.

Simultaneous Determination of Chlorogenic acid and Arctiin in VitaminC Yinqiao Tablet by RP－HPLC

HUANG Jing1，MA Jian－xiong2
1.The Second People＇s Hospital of Guilin，Guilin，541001；2.New Drug R＆d Center of Guangxi Jinhaitang Pharmaceutical Co.，Ltd.，Nanning，530313

Objective：To establish the method for determining the contents of chlorogenic acid and arctiin in VitaminC Yinqiao tablet；Methods：Diamonsil－ODSC18（5μ250×4.6mm）columu was adopted，the mobile phase consisted of acetonitrile－0.1%phosphoric acid solution eluted at the flow rate of0.8ml/min，the detection wave length were 327nm（0～25min）and 280nm（25～50min）；the column temperature was 25℃；Results：The chlorogenic acid in 0.516～4.128μg and arctiin in 1.980～15.840μg had good linearity.The average recoveries of chlorogenic acid and arctiin were 99.02%（RSD 0.83%）and 99.56%（RSD 0.69%），respectively；Conclusion：This method can be use to determine the contents of chlorogenic acid and arctiin in VitaminC Yinqiao tablet.

VitaminC Yinqiao tablet；chlorogenic acid；arctiin；RP－HPLC

R286.0

A

1007－8517（2013）14－0017－02

2013.05.21）

黃婧 （1977－），女，主管藥師，從事藥品質量研究。

馬健雄，E－mail：majianxiong66＠163.com