血型抗體濃縮技術在溶血性輸血反應檢測中應用

陳肇杰，孫愛農，馮廣滿，曾桂勝，梁勇明（.中山市黃圃人民醫院檢驗科，廣東中山 5849；.中山市紅十字中心血站，廣東中山 58403）

血型血清學試驗是目前診斷溶血性輸血反應（HTR）的主要方法，其中最為重要的是ABO血型抗體及不規則抗體檢測，但多數已有HTR臨床癥狀患者多次檢測仍為陰性結果，可能與標本中血型抗體濃度低，不能促使紅細胞出現凝集反應，無法檢出血型抗體有關。若能在輸血前檢出低濃度的血型抗體可有效預防HTR。本研究評價了低濃度血型抗體濃縮技術在ABO血型抗體及不規則抗體檢測中的應用價值，結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 血清標本1 500份采集自有輸血、流產或妊娠史患者，輸血反應患者，輕度HTR患者及輸血前患者。

1.2 儀器與試劑 LDZ4－018自動平衡微型離心機（北京醫用離心機廠）。不則抗體篩查紅細胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型）、抗IgG、抗IgM和抗C3單價血清（上海血液生物醫藥有限責任公司），凝聚胺試劑（中山生科公司）。A、B、O細胞、含抗IgM（抗－M、N、S）、抗IgG（抗－D、E）血清由中山市中心血站提供。正反定型為A、B、AB型的血清采集自無輸血、流產、妊娠史的體檢健康者。

1.3 方法 （1）海藻糖－聚乙二醇（PEG）法濃縮血型抗體：配制海藻糖濃度為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mol／L、PEG 400濃度為0.075mol／L的海藻糖－PEG濃縮液。將1mL血清與1mL海藻糖－PEG濃縮液混合，室溫孵育30min的同時混勻，3 000 r／min離心20min，棄上清液，加pH7.2磷酸鹽緩沖液至0.1 mL即為濃縮后血清。經前期試驗，最終選擇海藻糖濃度為0.2mol／L、PEG 400濃度為0.075mol／L的海藻糖－PEG濃縮液。（2）血清濃縮前后效價測定：將IgG抗－D加入AB型血清，按1∶1、1∶2、1∶4、1∶8配制不同效價IgG抗－D型血清。用海藻糖－PEG法濃縮不同效價IgG抗－D型血清各3份，抗A、抗B血清各20份，以AB型血清與O型紅細胞作陰性對照。用生理鹽水稀釋原血清和濃縮后的抗A、抗B血清，用PBS稀釋濃縮IgG抗－D型血型抗體血清，用鹽水法、凝聚胺法檢測血清與相應紅細胞的凝集反應，以紅細胞出現1＋凝集為最終效價。（3）效價為1∶1各類型稀釋后血清的海藻糖－PEG法濃縮效果：用AB型血清配制各種效價為1∶1血清，其中人源IgG抗－D 5份、IgG抗－E 3份，IgM 抗－M、N、S各3份，IgM抗A、抗B血清各5份。各種效價為1∶1血清與AB型血清稀釋1～5倍，配制不同稀釋度血清，每份稀釋血清與相應細胞用凝聚胺法重復測定3次凝集效果。用海藻糖－PEG法濃縮各稀釋血清后，用鹽水法、凝聚胺法測定凝集效果，每份稀釋血清重復測定3次。（4）分別用凝聚胺法檢測有輸血、流產、妊娠或輸血反應史患者、輕度HTR患者及輸血前患者1 500份原血清和海藻糖－PEG法濃縮血清的不規則抗體，記錄檢測結果。

1.4 統計學處理 采用SPSS10.0軟件進行數據分析；計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗；顯著性檢驗水準為α＝0.05，P＜0.05為比較差異有統計學意義。

2 結 果

IgM（抗A、抗B）效價升高（4.63±2.19）倍，IgG（IgG抗－D各稀釋液）效價升高（2.92±1.26）倍，差異有統計學意義（t′＝3.74，P＜0.05）。效價1∶1各類型稀釋后血清用常規方法未檢出血型抗體，用海藻糖－PEG法濃縮后檢測結果見表1。1 500份未處理的患者血清未檢出不則抗體，海藻糖－PEG法處理后檢出3例IgG抗－D（孕婦）和3例IgG抗－E（曾多次輸血，輕度HTR患者）。

表1 效價1∶1各類型稀釋后血清海藻糖－PEG法處理后檢測結果

3 討 論

PEG為一種多聚體，可增強紅細胞抗原與抗體反應的敏感性，低濃度PEG則可用于紅細胞抗體提純［1－2］。文獻［3］研究表明：海藻糖可維持包括單克隆抗體在內的多種生物活性物質的活性。筆者經以前期研究為基礎，構建了海藻糖－PEG血型抗體濃縮技術，其中海藻糖的應用是為了延長濃縮后紅細胞抗體的保存時間。本研究結果表明，海藻糖－PEG血型抗體濃縮技術可使IgG型血型抗體效價升高2～4倍、IgM型血型抗體效價升高2～6倍，二者升高倍數比較差異有統計學意義（P＜0.05），可能是由于IgM型血型抗體相對分子質量較大，與譜細胞結合力強，而IgG型血型抗體相對分子質量小，需在介質作用下才可結合譜細胞。

HTR通常由輸注ABO血型不符紅細胞和不規則抗體引起的同種免疫反應所致。隨著檢測技術的發展，由血型不合引起的輸血反應已極為罕見，而不規則抗體引起的HTR國內時有報道［3］。最常見的不規則抗體有 Rh系統抗－D、抗－E和MNS系統［3－5］。本研究結果表明，規則抗體（抗－A、抗B）和不規則抗（IgG抗－D、E，IgM抗－M、N、S及抗C3）經1～3倍稀釋后，常規方法檢測不與紅細胞出現凝集反應，而經海藻糖－PEG法處理后，可與相應的紅細胞出現不同程度的凝集反應。此外，海藻糖－PEG法血型抗體濃縮技術有助于檢出低濃度規則抗體和常見不規則抗體，且重復性良好，可有效避免HTR的發生。

本研究中，1 500份不同類型血清常規方法均未檢出不規則抗體，而用海藻糖－PEG法濃縮血清后檢出3例IgG抗－D和3例IgG抗－E不規則抗體。有研究報道5 982例輸血患者不規則抗體檢測陽性率為0.27%［6－7］。不規則抗體多為IgG類抗體，該類抗體初次產生時效價較低，但隨著免疫次數增多，抗體效價逐漸增強，可導致嚴重的HTR。本研究結果表明，海藻糖－PEG法血型抗體濃縮技術可檢出血清標本中低濃度的不規則抗體，具有重要臨床應用價值。

綜上所述，海藻糖－PEG法血型抗體濃縮技術操作簡便，有助于提高血型抗體檢測靈敏度，能為HTR提供診斷依據及有效減少和避免HTR的發生。

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