KIN17在28例肺癌標本中的表達分析＊

曾 濤，陸光明（.廣東醫學院醫學檢驗學院，廣東東莞 53808；.廣州醫學院第二附屬醫院，廣東廣州 5060）

明確腫瘤發病機制與分子機制，發現理想的早期篩查指標與治療靶標對腫瘤診斷及治療極為重要。肺癌細胞具有持續的DNA復制潛能和蓄積的DNA損傷，而KIN17蛋白與DNA復制及修復有關［1－2］，因此考慮KIN17可能與肺癌細胞功能有關。本文通過免疫組化技術分析KIN17在肺癌組織中的表達情況，以期為深入探討KIN17在肺癌發病機制與治療中的作用奠定基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料 廣州醫學院第二附屬醫院病理科于2010年1月至2012年7月經手術切除并病理確診的肺癌標本28例，每例標本同時包括腫瘤組織與癌旁組織，石蠟包埋封存；腺癌7例，鱗癌9例，大細胞癌5例，小細胞癌7例。

1.2 試劑 鼠抗人KIN17單抗（美國Santa Cruz），ChemMateTMEnVision鼠兔通用型免疫組化檢測試劑盒（日本Dako），其他試劑均為國產或進口分析純。

1.3 方法 所有石蠟切片均行免疫組化染色，陰性對照以磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗。石蠟切片脫蠟至水后，3%H2O2孵育10min，0.01mol／L檸檬酸緩沖液修復抗原；加入KIN17一抗（1∶100稀釋），4℃過夜；加ChemMateTMEnVision二抗室溫孵育1h，PBS洗凈；DAB工作液顯色，蘇木素復染，脫水透明，中性樹脂封存。全部切片由兩位病理醫生采用雙盲法根據染色強度與陽性細胞百分率進行評分，≤100分判為低表達，＞100分判為高表達［3］。

1.4 統計學處理 計數資料以百分率表示，組間比較采用SPSS13.0軟件進行χ2檢驗，顯著性檢驗水準為α＝0.05，P＜0.05為比較差異有統計學意義。

2 結 果

陰性對照均無特異性染色；肺癌癌組織標本染色較強，92.9%（26／28）肺癌組織為KIN17高表達，且基本為核定位（圖1）；3.6%（1／28）肺癌癌旁組織為KIN17高表達，染色普遍較淺；癌組織與癌旁組織KIN17表達率比較差異有統計學意義（P＜0.05）。

圖1 KIN17在肺癌組織中的陽性表達（標尺為30μm）

3 討 論

KIN17蛋白在物種進化過程中較為保守，說明其很可能在細胞中具有“管家功能”［4］。KIN17蛋白與DNA復制有關，是多種蛋白DNA復制復合物的成分之一。以KIN17抗體作用細胞，可抑制DNA復制［1］。紫外線或離子輻射可誘導KIN17蛋白表達上調及定位改變。KIN17作為DNA維持蛋白，參與晚期DNA修復，可對尚未修復的DNA損傷進行再次修復，使未修復病灶組織細胞DNA得以復制［2］。

有研究顯示KIN17在各種正常組織中普遍低表達［4］。本課題組也曾證實KIN17在乳腺正常上皮細胞Hs－578Bst中表達極低，而在乳腺癌細胞系與腫瘤組織中明顯高表達［5］。沉默KIN17表達能抑制乳腺癌細胞DNA復制，加劇DNA損傷，抑制腫瘤細胞增殖與克隆形成，而KIN17表達上調可維持腫瘤細胞DNA復制及DNA損傷修復功能，促進乳腺癌細胞增殖；沉默KIN17表達也可增強乳腺癌細胞對化療藥物的敏感性。因此，KIN17很可能是潛在的腫瘤治療靶點［5］。本研究顯示，肺癌組織KIN17表達強度明顯高于癌旁組織，為進一步探討該蛋白在肺癌細胞中的功能及分子調控機制奠定了基礎。

［1］ Miccoli L，Frouin I，Novac O，et al.The human stress－activated protein kin17belongs to the multiprotein DNA replication complex and associates in vivo with mammalian replication origins［J］.Mol Cell Biol，2005，25（9）：3814－3830.

［2］ Biard DS，Saintigny Y，Maratrat M，et al.Enhanced expression of the Kin17protein immediately after low doses of ionizing radiation［J］.Radiat Res，1997，147（4）：442－450.

［3］ Merritt WM，Lin YG，Han LY，et al.Dicer，Drosha，and outcomes in patients with ovarian cancer［J］.N Engl J Med，2008，359（25）：2641－2650.

［4］ Kannouche P，Mauffrey P，Pinon－Lataillade G，et al.Molecular cloning and characterization of the human KIN17 cDNA encoding a component of the UVC response that is conserved among metazoans［J］.Carcinogenesis，2000，21（9）：1701－1710.

［5］Zeng T，Gao H，Yu P，et al.Up－regulation of kin17is es－sential for proliferation of breast cancer［J／OL］.PLoS One，2011－09－29［2013－01－12］，http：／／www.ncbi.nlm.nih.gov／pmc／articles／PMC3183049／.