肝切除模型小鼠急性肝損傷研究

【摘 要】目的 探討小鼠肝切除急性肝損傷模型建立方法，研究肝切除急性肝損傷后肝功能變化情況。方法 對BALB/c小鼠實施部分肝組織切除手術，縫合后繼續適應性飼養，取血清及肝組織勻漿檢測ALT、AST、NO，并計算肝臟指數。結果 肝切除急性肝損傷小鼠與對照組比較，血清ALT、AST明顯升高，肝組織勻漿ALT、AST明顯降低，NO明顯升高，肝臟指數明顯增加。結論肝切除模型小鼠急性肝損傷肝后，功能明顯下降，炎性作用突出，肝組織增生明顯。

【關鍵詞】肝切除；急性肝損傷；肝功能；一氧化氮

目前，對于肝占位性病變，對肝臟實施部分切除手術是主要的可能治愈方法之一，但手術本身對剩余的肝臟造成急性損傷，患者甚至會因肝衰竭而死亡。本研究通過建立肝切除急性損傷模型，探討損傷后病變情況，為肝臟疾病的術后治療提供實驗數據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

BALB/c純系小鼠，雄性，體重18-22g

1.2 主要試劑

（1）谷丙轉氨酶（ALT）試劑盒、谷草轉氨酶（AST）試劑盒、NO測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

（2）肝組織勻漿裂解液見表1。

（3）肝組織勻漿蛋白定量試劑盒購于

Dojindo Molecilar Technologies，INC.

1.3 方法

將BALB/c小鼠、雄性、體重18-22g，共40只，適應性喂養7天后，隨機分為2組，Ⅰ組（模擬手術組），Ⅱ組（肝切除組），每組各20只。于超凈操作臺內，肝切除組小鼠開腹，切除一個肝小葉1/3后縫合；模擬手術組開腹，暴露部分肝組織后縫合。所有小鼠于術后第5天摘眼球放血處死并留取血液標本，4℃預冷PBS心臟灌流小鼠，收獲肝臟組織。

小鼠血液標本離心后取血清待測。小鼠肝組織加入組織裂解液裂解，于高速分散器將組織打碎，離心后回收上清液待測。

ALT、AST、NO檢測參見試劑盒說明書。

采用SPSS16.0、EXCEL軟件進行數據處理，所得數據用 ±S表示，采用t檢驗進行統計學分析。

3 結果

轉氨酶測定，與對照組比較，模型組小鼠血清轉氨酶水平明顯增高，p<0.01（表2），而模型組小鼠肝組織轉氨酶水平有所降低，p<0.05（表3）。模型組小鼠肝組織NO水平增高（表4），p<0.05。模型組小鼠肝臟指數增高（表5），p<0.05。

4 討論

研究發現，對小鼠實施肝組織部分切除后，小鼠肝組織急性損傷，肝功能嚴重破壞，血清轉氨酶水明顯上升，而肝組織勻漿轉氨酶水平則相應下降，說明破壞的肝細胞將胞漿內ALT和線粒體內AST迅速釋放入血，AST的明顯升高更說明肝細胞線粒體的破壞，急性肝損傷模型建立成功。

通過對肝組織勻漿NO的測定顯示損傷肝組織表達NO增加，已有研究表明，NO對肝細胞既有保護功能，又有殺傷毒性與促炎的雙重作用。但在肝損傷特別是急性肝損傷時，細胞因子INF-γ、TNF-α、IL-lβ等可刺激誘導型NO合酶（iNOS）產生，iNOS一旦表達出活性，即可產生大量的NO，使得NO在肝臟中的濃度遠高于其生理濃度，則損傷正常肝組織，導致肝細胞死亡。

急性肝損傷后，肝臟指數增加，表明肝切除后肝組織再生明顯，在各種急性肝損傷過程中，都需要促進肝再生以利于肝功能的恢復。NO又可進一步促進肝組織炎癥性腫脹，進而影響肝組織修復過程，因此肝臟急性損傷后再生修復的同時伴有嚴重的肝組織增生、肝細胞腫脹以及組織纖維化表現，進而影響肝臟功能恢復。

本研究通過建立肝切除肝損傷小鼠模型，從肝細胞破壞，肝組織炎癥以及增生三方面探討了急性肝損傷的特點，為肝切除術后治療提供實驗依據。

參考文獻

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