新甲型H1N1流感輕癥患者血清免疫學特征分析及臨床意義研究

林存智，孫 勇，王 軍，蔣捍東

2009年4月北美地區(qū)出現(xiàn)新甲型H1N1流感患者，短短幾個月播及全球200多個國家和地區(qū)，造成全球大流行。我國疫情形勢由初期的輸入性為主逐漸變?yōu)榫硟?nèi)感染為主，由散發(fā)患者向聚集性疫情發(fā)展，由城市逐漸向農(nóng)村蔓延，流行后期重癥患者急劇增加。我國采取了防、控、治并舉的措施，有效遏制了疫情的進一步蔓延。2010—2011年冬春季不斷出現(xiàn)散發(fā)患者，2012年春季同樣存在散發(fā)的新甲型H1N1患者，中華人民共和國衛(wèi)生部官方網(wǎng)站公布傳染病消息顯示2012年4月份國內(nèi)確診新甲型H1N1流感患者111例，無死亡患者。因此，為正確理解和治療新甲型H1N1流感輕癥患者，現(xiàn)將新甲型H1N1流感輕癥患者的免疫學特征報道如下，并與普通感冒患者進行對照研究。

1　資料與方法

1.1一般資料

1.1.1患者選擇選取新甲型H1N1流感輕癥患者26例，男19例，女7例；年齡19～22歲，平均年齡為(20.6±1.5)歲。選取普通感冒患者32例，男23例，女9例；年齡為17～25歲，平均年齡為(22.5±2.2)歲。兩組患者年齡、性別間具有均衡性，且均無其他基礎疾病。

1.1.2診斷標準新甲型H1N1流感診斷標準為中華人民共和國衛(wèi)生部2009年頒布的第三版診療方案[1]；普通感冒診斷根據(jù)蔡柏薔等[2]主編的《協(xié)和呼吸病學》診斷標準進行診斷。

1.2研究方法

1.2.1血清細胞因子檢測方法取確診的新甲型H1N1流感輕癥患者外周血2 ml，2 000 r/min離心,離心半徑14 cm，10 min，留取血清，冷存-20 ℃冰箱備用；用同樣的方法留取32例普通感冒患者血清2 ml，離心，冷藏備用。

1.2.2實驗試劑單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)試劑盒由欣博盛生物科技有限公司提供，白介素6 (IL-6)，白介素8(IL-8)，白介素10(IL-10)試劑盒由上海西唐生物科技有限公司提供。實驗操作均按照試劑盒提供的實驗操作說明進行。

2　結果

兩組患者外周血清免疫學特征比較，IL-8水平兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其余細胞因子表達差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05，見表1)。

Table 1　The expression of cytokines in the two groups

注：MCP-1=單核細胞趨化蛋白-1，IL-6=白介素6，IL-8=白介素8，IL-10=白介素10

3　討論

新甲型H1N1流感是由變異后的甲型H1N1流感病毒株所引起的急性呼吸道傳染病，有以下流行病學特點及臨床特征：(1)通過飛沫、氣溶膠、直接接觸或間接接觸傳播，患者在發(fā)病前一天就具有傳染性[3]；(2)人群普遍易感；(3)隱性感染：無癥狀感染者，也具有傳染性[1]；(4)臨床表現(xiàn)與普通流感相似[4]。普通感冒是一種輕度、能自限的上呼吸道感染。常見病原菌有鼻病毒、冠狀病毒、流感病毒和副流感病毒，其中以鼻病毒和冠狀病毒最常見。在寒冷季節(jié)多發(fā)，發(fā)病機制為：病毒進入鼻孔，隨后感染上呼吸道的上皮細胞，48 h內(nèi)病毒復制高峰，持續(xù)3周。但這兩種由不同病毒引起的疾病卻存在一定程度的免疫機制相似性。

流感病毒侵入機體后，刺激機體產(chǎn)生一定的免疫反應，從而對機體的細胞因子分泌產(chǎn)生一定影響。IL-6由淋巴樣和某些非淋巴樣細胞產(chǎn)生，其生物學活性刺激細胞生長和促進多種細胞的增殖，促進細胞分化，如B細胞分化和Ig的分泌、細胞毒性T淋巴細胞(CTL)分化，協(xié)同白介素2(IL-2)增強CTL中穿孔素基因的表達，并增加T細胞IL-2的產(chǎn)生和IL-2受體的表達，誘導巨噬細胞、神經(jīng)細胞和NK細胞分化。IL-8是由單核細胞或巨噬細胞產(chǎn)生，是一種具有趨化活性的細胞因子，能夠誘導中性粒細胞定向遷移，增加炎性反應。

單核細胞趨化蛋白屬趨化因子CC亞家族，分子量多為8～10 kD的蛋白組成。包括MCP-1～3，可由炎性遞質(zhì)刺激的單核/巨噬細胞、成纖維細胞、B細胞、內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞等分泌，對單核/巨噬細胞有趨化和激活作用。MCP-1也可介導嗜堿性粒細胞趨化和激活。MCP-1是β亞家族的代表，可趨化單核細胞。主要功能是招募血液中的單核細胞、中性粒細胞、淋巴細胞等進入感染發(fā)生的部位。

IL-10由活化胸腺細胞、巨噬細胞、角朊細胞和正常B細胞、活化單核細胞、外周血T細胞產(chǎn)生。IL-10是一種重要的抗炎細胞因子。病毒感染早期，IL-10的產(chǎn)生是機體控制和限制病毒感染所致炎性反應的重要機制之一[5]。IL-10主要抑制白介素12(IL-12)和干擾素-γ(IFN-γ)分泌，從而促進Th2型細胞分化，而且它是B細胞終分化因子。在B細胞對抗流感病毒抗原時，IL-10起關鍵作用，有助于在感染中和感染后產(chǎn)生保護性抗體。本研究結果與某些國外研究報道相似，如Nakajima等[6]對2009甲型H1N1流感死亡患者尸檢發(fā)現(xiàn)，與正常人比較其血清肺組織中IL-10、IL-6、MCP-1水平均升高。

新甲型H1N1流感與普通感冒雖然由不同的病原體感染所致，但臨床癥狀具有一定的相似性。本研究表明機體對病毒的免疫反應同樣存在一定的相似，外周血清中IL-10、IL-6和MCP-1表達水平無差異性，而IL-8表達具有一定的差異性，臨床治療的方案基本一致。普通感冒一般應用抗病毒的中成藥和對癥治療即可康復，而新甲型H1N1流感輕癥患者，同樣也可以對癥治療，應用中成藥或中成藥湯劑治療，與抗病毒治療的療效相似[7]。

毛會軍等[8]研究報道，感染新甲型HINl病毒后，外周血清中IL-10、IL-8與正常人比較均升高，而單核/巨噬細胞產(chǎn)生的IL-8卻顯著升高，與本研究的結果相似。但是否與單核/巨噬細胞吞噬病毒有關，值得以后進一步研究。

志謝：感謝青島市疾病預防控制中心實驗室汪照國主任提供新甲型H1N1流感患者血清標本，感謝青島市胸科醫(yī)院檢驗科江國峰主任協(xié)助進行實驗標本檢測。

1中華人民共和國衛(wèi)生部.甲型H1N1流感診療方案(2009年試行版第三版)[J].中華臨床感染病雜志，2009，3(2):257-259.

2蔡柏薔，李龍蕓.協(xié)和呼吸病學[M].北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學出版社，2011：815-816.

3王星，杜鐘珍，李莉，等.甲型H1N1流感的臨床特點研究[J].實用心腦肺血管病雜志，2012，20(4)：603.

4程文，章隆輝，汪克文.新型甲型H1N1流感危重癥臨床分析[J].實用心腦肺血管病雜志，2012，20(11)：1792.

5Graham MB，Dalton DK，Oiitinan D，et al.Response to influenza infection in mice with a targeted disruption of the interferon-γ gene[J].J Exp Med，1993，178(5)：1725 -1732.

6Nakajima N，Ham S，Sato Y，et al.The first autopsy case of pandemic influenza(A/H1N1 rxlm) virus infection in Japan：Detection of a high copy number of the virus in type Ⅱalveolar epithelia cells by pathological and virological examination [J].Jim J Infect Dis，2010，63(1)：67-71.

7林存智，王軍，鄒少木，等.甲型H1N1流感病例臨床特征分析[J].中華傳染病雜志，2010，28(2)：117-118.

8毛會軍，陳良，沈芳.2009流行性感冒患者血清細胞因子的變化特點[J].感染與微生物，2011，6(1)：18-22.