近三年某院分離肺炎鏈球菌的耐藥性監測

江鏡全　郭旭光　陳瓊　夏勇

【摘要】目的統計和分析2010年1月至2012年12月本院臨床分離的肺炎鏈球菌的耐藥性，為臨床合理應用抗生素提供依據。方法對臨床分離的81株肺炎鏈球菌菌株，用VITEK-2細菌鑒定藥敏系統進行鑒定及藥敏試驗。結果共收集到肺炎鏈球菌81份，主要為痰液。肺炎鏈球菌對抗菌藥物的敏感率最高的是阿莫西林/克拉維酸、利奈唑胺、莫西沙星、替考拉寧、萬古霉素的敏感率均為100%；左氧氟沙星、氧氟沙星、氨芐西林/舒巴坦、泰利霉素、頭孢曲松、氯霉素、厄他培南替、敏感率均大于90%。結論肺炎鏈球菌主要引起呼吸道感染，阿莫西林/克拉維酸和莫西沙星可作為治療的首選藥物，臨床醫生應根據本院的藥敏結果經驗作為經驗用藥的指導。

【關鍵詞】肺炎鏈球菌；耐藥；肺炎；鏈球菌；感染

肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae）是一種球狀的革蘭氏陽性菌，是鏈球菌屬下的一種細菌。作為一種重要的人類致病菌，肺炎鏈球菌于1880年已被發現能引起肺炎，亦是體液免疫研究的對象。肺炎鏈球菌最初名字是肺炎雙球菌，因它在革蘭氏染色中的特征[1]。1974年，研究發現它在液體媒介中呈鏈狀的生長，而被重新命名為肺炎鏈球菌。因它是肺炎的致病因子，一般都會稱它為肺炎球菌。肺炎鏈球菌亦會導致不同種類的疾病，包括有急性鼻竇炎、中耳炎、腦膜炎、骨髓炎、膿毒性關節炎、心內膜炎、腹膜炎、心囊炎、蜂窩組織炎及腦膿腫。

近年來隨著青霉素耐藥肺炎鏈球菌及多重耐藥菌株的增加[2-4]，給臨床治療帶來一定的困難[5]。為更好的指導臨床用藥，為臨床經驗用藥提供實驗室依據，了解該菌在我院的分布及耐藥情況，對2010年1月——2012年12月臨床送檢標本分離的肺炎鏈球菌藥敏結果進行回顧性分析。

1材料與方法

1.1菌株來源及培養方法81株肺炎鏈球菌均自本院2010年1月——2012年12月住院患者及門急診患者。包括痰液、血液、腦脊液等。標本接種血平板和巧克力平板，放入5%CO2培養箱，35℃，24h培養。對于疑似肺炎鏈球菌的菌株，轉血平板，加奧普脫欣紙片篩選，敏感的菌株進一步做鑒定和藥敏試驗。

1.2儀器與試劑標本送到實驗室后，按《全國臨床檢驗操作規程》（第3版）要求處理，經培養獲得單個菌落后，經初篩后，疑似肺炎鏈球菌的菌落增菌后，用Vitek-2全自動細菌鑒定儀及其配套的鑒定卡和藥敏卡進行鑒定及藥敏試驗，結果判定按照美國臨床實驗室標準化委員會（NCCLS）推薦的方案和標準，以敏感（S）、中介（I）、耐藥（R）報告結果。抗菌藥物包括阿莫西林/克拉維酸、利奈唑胺、莫西沙星、替考拉寧、萬古霉素、左氧氟沙星、氧氟沙星、氨芐西林/舒巴坦、泰利霉素、頭孢曲松氯霉素、厄他培南、頭孢呋辛鈉、亞胺培南、喹努普汀/達福普汀、頭孢噻肟、美羅培南、青霉素G、復方新諾明、紅霉素、四環素。

1.3統計軟件藥敏結果的導出采用東方旗云軟件，藥敏結果分析采用Excel2003軟件。

2結果

2.1肺炎鏈球菌臨床菌株的分布81株肺炎鏈球菌分別來自呼吸道、分泌物、膿液、血液等標本，其中以痰液標本檢出率最高，其次為分泌物，見表1。

2.2藥敏結果本次試驗分離出的81株肺炎鏈球菌對抗菌藥物的敏感率最高的是阿莫西林/克拉維酸、利奈唑胺、莫西沙星、替考拉寧、萬古霉素的敏感率均為100%；左氧氟沙星、氧氟沙星、氨芐西林/舒巴坦、泰利霉素、頭孢曲松、氯霉素、厄他培南替、敏感率均大于90%.頭孢呋辛鈉、亞胺培南、喹努普汀/達福普汀、頭孢噻肟的敏感率在80%-90%之間；美羅培南的敏感率為61.54%；青霉素的敏感率為55.56%；復方新諾明的敏感率為40.00%；紅霉素的敏感率為23.68%；四環素的敏感率為21.74%。具體藥敏檢測結果，見表2。

3討論

肺炎鏈球菌是一種普遍導致成人感染細菌性腦膜炎的病菌，亦是首兩種在中耳炎發現的分離株。由肺炎鏈球菌引致的肺炎是在年幼或年長的人中最經常出現。肺炎鏈球菌與同是γ溶血性的草綠色鏈球菌是有所分別，因肺炎鏈球菌是對奧普托欣較敏感，所以能透過奧普托辛測試驗出它們的分別。肺炎鏈球菌的粒狀體是有莢膜包裹及呈革蘭氏陽性，與草綠色鏈球菌在革蘭氏染色有型態上的不同（肺炎鏈球菌染色型態的是呈針刺狀）。它有著一個多糖莢膜，是一種重要的致病因子[6]。

本次試驗分離出的81株肺炎鏈球菌對抗菌藥物的敏感率最高的是阿莫西林/克拉維酸、利奈唑胺、莫西沙星、替考拉寧、萬古霉素的敏感率均為100%；左氧氟沙星、氧氟沙星、氨芐西林/舒巴坦、泰利霉素、頭孢曲松、氯霉素、厄他培南替敏感率均大于90%.頭孢呋辛鈉、亞胺培南、喹努普汀/達福普汀、頭孢噻肟的敏感率在80%-90%之間；美羅培南G的敏感率為61.54%；青霉素的敏感率為55.56%；復方新諾明的敏感率為40.00%；紅霉素的敏感率為23.68%；四環素的敏感率為21.74%。

根據藥敏結果，對于肺炎鏈球菌的感染首選阿莫西林/克拉維酸和莫西沙星，雖然利奈唑胺、替考拉寧、萬古霉素的敏感率也為100%，但是其價格昂貴，而且為以后其他細菌的感染以及多重耐藥菌的感染用藥留下余地。次選左氧氟沙星、氧氟沙星、氨芐西林/舒巴坦、頭孢曲松、厄他培南替等。

肺炎鏈球菌的常規檢測費時費力，目前快速檢測的方向之一就是分子診斷。肺炎鏈球菌的檢測技術很多，分為基于核酸水平的檢測技術、基因芯片技術以及其他檢測技術。而基因芯片這一類檢測技術尚處研究階段并不成熟[7]。因此，應用最廣的為基于核酸水平的PCR定性檢測技術。當前我國對細菌DNA的檢測，主要是通過提取DNA，再進行PCR+凝膠電泳（初篩），對于陽性結果采用實時熒光PCR、Southern雜交或測序方法進行確證，或對提取的DNA直接采用實時熒光PCR方法檢測。這些常見檢測基因的分子生物學方法目前比較成熟，但不可避免具有消耗昂貴，方法耗時較長等缺點。隨著分子生物學理論和技術的快速發展，以聚合酶鏈式反應（PCR）技術為基礎的新型鑒定技術已日益得到廣泛應用。恒溫基因擴增方法（LAMP，Loop-mediated Isothermal Amplification）是在PCR基礎上創建的一種較理想的手段，其特點是：①只需一恒定溫度就能擴增反應，不需要特殊試劑，不需要預先進行雙鏈DNA的變性；②高特異性：采用六個區段，四條引物，擴增特異性高，可以根據是否擴增來判斷目標基因的存在與否；③快速、高效擴增：擴增在不到1h即可完成，且產率高；④靈敏度高：擴增模板可達10拷貝或更少；⑤鑒定簡便：在核酸大量合成時，從dNTP析出的焦磷酸根離子與反應溶液中的Mg2+結合，產生副產物-焦磷酸鎂沉淀，可用肉眼觀察判斷擴增與否；總體而言，LAMP法是一種簡便、快速、高特異的基因擴增法[8-10]。

而實時熒光LAMP是在在LAMP基礎上引入ESEQuant Tube Scanner及熒光染料，實現LAMP法實時監測擴增的目的，不僅結果易于觀察和判斷，同時避免因開蓋導致假陽性的出現，實現快速、準確檢測的目的[11]。下一步，我們將繼續收集臨床菌株，建立檢測肺炎鏈球菌的Rea-LAMP檢測方法。

參考文獻

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