奶牛布魯氏菌病的診斷與綜合防控

吳周良 劉自增

摘要：奶牛布魯氏菌病是由牛布魯氏桿菌引起的一種人畜共患病，主要侵害生殖器官，可引起妊娠母牛流產、公牛睪丸炎和附睪炎等。綜述了該病的病原、流行特點、臨床癥狀、病理變化、診斷方法，并提出了綜合防控措施。

關鍵詞：布魯氏菌病；奶牛；預防；治療

中圖分類號：S852.61+4 文獻標識碼：B 文章編號：1007-273X（2013）06-0045-03

布魯氏菌病簡稱布病，又名奶牛地中海弛張熱、馬耳他熱和波浪熱，奶牛布病是由牛種布氏桿菌引起的一種急性、慢性人畜共患傳染病，在我國被列為二類動物疫病。病菌可侵害奶牛生殖、神經和骨骼系統，以母牛不孕、流產、早產、胎衣不下和產奶量下降，公牛睪丸炎、附睪炎關節炎和身體消瘦等為主要臨床癥狀。人感染后，呈典型的波浪熱癥狀，難以根除。該病世界范圍內流行廣泛，四季發病，以春冬季節發病較多。近年來，布病的發生呈明顯的上升勢頭。

1 病原

布魯氏菌為革蘭氏陰性菌（9個種），細胞內寄生，兼性需氧，最適溫度36～37 ℃，最適pH 6.6～7.4。菌體長0.6～7.5 μm，寬0.5～0.7 μm，初次分離時呈球形、球桿形和卵圓形，傳代培養后呈短小桿狀。菌體無鞭毛，不形成芽孢，毒力菌株有菲薄的莢膜。菌落邊緣完整，分平滑型和粗糙型，直徑0.5～l.0 mm。光滑型菌落發射光下呈黃白色，反射光下呈藍灰色；粗糙型菌落反射光下呈暗白色或者黃色。菌體具有較強的侵襲力和擴散力，對外界環境的抵抗力也較強，在乳品和牛肉制品中可存活2個月，在糞便中可存活120 d，在水中可存活21 d，在土壤中可存活20～120 d。細菌對熱、常用消毒藥和紫外線等都敏感，60 ℃濕熱條件（15～30 min）、70 ℃濕熱條件（5 min）、0.1%升汞液（3 min）、1%來蘇爾（15 min）、5%石灰水（15 min）、2%福爾馬林溶液（15 min）和紫外線照射等，都能很快將其殺死。生鮮乳中的布魯氏菌，經巴氏消毒后也能被很快殺死。

細菌對四環素最敏感，對鏈霉素、土霉素等抗生素敏感，但對青霉素不敏感。在正常光照下，菌體生長迅速，但在藍光下，菌體的生長速度可下降90%多。

2 流行特點

布病世界范圍內分布廣泛，世界上200多個國家和地區中170個有疫情發生。在我國，當前28個省市有該病的發生和流行，約3.5億人受該病的威脅。2011年我國布病發病人數為38 151人，為歷年新高。

布病可四季發病，以春冬季節發病較多，奶牛產仔季節發病也較多。

2.1 易感性

布魯氏菌對牛、馬和人都有很強的致病性。母牛比公牛更具易感性，不同年齡的牛易感性也不同。初產母牛易感性最強，且流產率較高；成年母牛特別是處于妊娠期時易感性較強，老齡母牛和犢牛易感性較弱。犢牛感染后，因其生殖系統尚未完全發育成熟，因此不表現發病。母牛隨著胎次的增加，易感性會逐漸降低。

2.2 傳染源

患病和感染奶牛是布病的主要傳染源，病菌可以廣泛散布于奶牛的排泄物（如糞便等）、分泌物（如流涎等）、流產物（如胎兒等）、乳汁和公牛精液等。布魯氏菌在不同的易感動物之間有轉移的現象，該菌可轉移給羊和豬等，也可以感染人，但一般不發生人與人間的水平傳播。

2.3 傳播途徑

布魯氏菌的侵襲能力很強，可以穿過完整的消化道、呼吸道、生殖道和皮膚黏膜、眼結膜等感染奶牛，也可以經由吸血性昆蟲叮咬傳播。奶牛場獸醫、飼養員、乳品加工人員、牛屠宰加工人員、皮毛加工人員、實驗室操作人員等跟傳染源接觸密切的職業人員易患此病，飲用未消毒的生奶也可感染。

3 臨床癥狀

布病的潛伏期較長，14～180 d不等，多為隱性感染?；疾∧膛Ｖ饕R床表現為：母牛流產、不孕、乳房炎、關節炎、產奶量和奶品質下降等，公牛睪丸炎、附睪炎、精子活率和活力降低、身體消瘦、關節炎等。母牛流產多發生于妊娠5～8個月，流產前表現精神萎靡不振、食欲低下、陰唇充血腫脹、陰道黏膜潮紅、陰門有黃紅色或灰褐色黏液流出、乳房腫脹等，流產1～2次后，可正常分娩。流產的胎兒多為死胎，且全身水腫，胎衣不完整，子葉破碎。人患病后，呈典型的波浪熱癥狀，可致不孕不育，難以根除。

4 病理變化

病原進入機體后，寄生于網狀淋巴組織，可對奶牛生殖、神經和骨骼系統造成嚴重損害[1]。病牛主要病變為生殖器官的炎性壞死，淋巴結、肝、脾等實質器官水腫和肉芽腫，關節炎性腫大。妊娠母?？梢娞ケP絨毛膜炎癥、壞死，絨毛間有灰色或黃色無味膠樣滲出物。胎膜水腫肥厚、膠樣浸潤、表面有纖維素和膿汁。流產胎兒主要為敗血癥病變，漿膜黏膜有出血點和出血斑，皮下結締組織發生漿液出血性炎癥，脾臟和淋巴結腫大，肝臟中出現壞死灶，肺常有支氣管炎。流產病牛多繼發子宮炎，若子宮炎持續數月以上，將出現子宮體增大，內膜增厚，呈污紅色，其中可見彌漫性紅色斑紋。肥厚的黏膜構成波紋狀皺褶，有時可見局灶性壞死和潰瘍。輸卵管腫大，卵巢發炎，組織硬化，有時形成卵巢囊腫。乳腺病變常表現為間質性乳腺炎，嚴重的可續發乳腺萎縮和硬化。公牛布病可發生化膿壞死性睪丸炎、附睪炎、精囊出血或壞死。睪丸明顯腫大，被膜與外層漿膜粘連，切面見壞死病灶與化膿灶。

5 診斷

布魯氏菌病是一種重要的人畜共患傳染病，可對畜牧業生產和人體健康產生嚴重危害，已被世界衛生組織（OIE）列為B類傳染病，在我國被列為二類動物疫病，國際上也是P3條件下的人畜共患病原。該病臨床癥狀不明顯時不易診斷。臨床癥狀明顯時，可根據流行病學做出初步診斷，但最終的確診還需要做病原診斷和血清學實驗。

5.1 病原診斷

病料可取自于母牛的陰道分泌物、流產胎盤子葉、流產胎兒組織、胃內容物和公牛精液等。細菌培養后，可根據菌落的大小、形態和色澤等，篩選出疑似布魯氏菌菌落。隨后用革蘭氏染色法或Stamps 染色法染色[2]，根據布魯氏菌的形態特征，鑒定出布魯氏菌。隨后再用血清學方法檢查，包括特異性抗血清檢測和菌落凝集試驗等。因布病病原診斷需要P3實驗室條件，危險性較高，在實際布病普查中不易推廣。

5.2 血清學檢查

目前，用于布魯氏菌檢測的方法很多，如：虎紅平板凝集試驗（RBPT）、試管凝集試驗（SAT）、補體結合試驗（CFT）、乳環試驗（MRT）、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、熒光偏振分析法（FPA）、巢式PCR（nested-PCR）等，但至今沒有一種方法兼具檢測的敏感性、特異性和操作方法的簡便、快速、廉價等優點。在實際的操作中，建議根據自身條件，兩種方法結合使用?？梢韵扔靡环N便捷的方法初篩，隨后再用另一種靈敏性和特異性都較高的方法進行確診。但，常規血清學檢查不易區分免疫牛和感染牛。

5.2.1 RBPT/SAT/CFT RBPT和SAT 均具有操作簡單、成本低廉的特點，而CFT操作相對復雜，參與成分也較多，結論也具有一定主觀性，但是準確性較高。RBPT是OIE指定的國際貿易中布魯氏菌的初篩試驗，適用于大量樣本的篩查；CFT是OIE指定的國際貿易布魯氏菌診斷的確診試驗。RBPT和SAT單獨使用時都會產生一定的假陽性和假陰性，尤其是SAT，OIE 已于2000年宣布不主張將其用于國際貿易檢測。

5.2.2 ELISA ELISA 包括間接ELISA（I- ELISA）和競爭ELISA（C- ELISA），兩者均具有操作簡單、結果確切等優點，但后者的診斷特異性比前者更高，因此更適用于布病的確診；前者更適于對布病的普查。國內有實驗證明I-ELISA的敏感性和特異性為95.92%和98.65%[3]。國際上，ELISA已被OIE列為奶牛布病診斷的指定方法，在很多國家得到了廣泛應用， 并取得了良好效果。

5.2.3 FPA FPA是常規血清學檢測方法的重要替代方法，原理是通過溶液中受檢粒子旋轉速率的變化來判定熒光標記抗原分子是否與相應抗體發生特異性結合反應，適用的抗原分子大小最好在20kD。實驗證明，FPA用于牛布病檢測的特異性為99.6%，敏感性為98.0%[4]，檢測結果是可靠的。國際上，FPA已被OIE列為奶牛布病診斷的指定方法，在很多國家得到了廣泛應用，并取得了良好效果。

5.2.4 MRT MRT該方法具有操作簡單、省時省力的特點，易于布病田間泌乳奶牛布病的篩選試驗。但大量樣本檢測時，該方法的敏感性較低，檢測結果不夠可靠。疫苗免疫4個月以內的牛和有異常乳的牛（患有乳房炎或其他疾病），檢測結果可出現假陽性。對奶牛初乳檢測，也產生假陽性。

5.2.5 Nested-PCR 通過對布魯氏菌保守基因片段2對引物的設計和實驗條件的控制，Nested-PCR檢測方法消除了病料污染或奶牛感染其他疾病而引起的檢測結果呈假陽性的情況[5]。該方法適用于布魯氏菌的實驗室分子檢側診斷。

6 防控措施

6.1 接種疫苗免疫

免疫前要徹底清群，將感染牛和布魯氏菌攜帶牛全部清除出牛群，免疫密度100%，并且要保持免疫的連續性，不能間斷。目前，國內普遍使用的畜用布病疫苗都是傳統的光滑型菌株的減毒苗，如S19苗、Rev.1苗、S2苗等，其免疫保護效果已獲得臨床驗證，具有造價低廉、免疫保護時間長、免疫保護效率高等優點。但是，這些減毒疫苗的殘留毒力會引起妊娠奶牛流產，因此，這些弱毒苗不能免疫妊娠母牛和產奶母牛。弱毒疫苗接種后產生的持續免疫應答還會對以后的布病血清學普查產生干擾，但粗糙型菌株弱毒苗卻不干擾布魯氏菌臨床檢測。20世紀90年代美國研制的RB51活菌苗（粗糙型牛種布魯氏菌2308在含利福平的培養基上培養獲得）卻成功克服了這一缺點，已獲得美國政府批準正式使用[6]，在應用中可替代S19號苗。其他新型疫苗，如基因工程亞單位疫苗、DNA疫苗和活載體疫苗等都沒有達到常規疫苗等保護效果。人用弱毒苗有BA219和104M，均具有毒力返強的特點，只用于高危人群，一般不建議使用。

6.2 綜合防控

奶牛免疫接種具有一定的局限性，實際布病防控中應采取包括疫苗接種在內的“免疫、監測、消毒、撲殺和無害化處理”等綜合防控措施 [7-10]。

6.2.1 檢疫檢測 奶牛養殖場區要做好布病的定期檢測，每年至少1次。各牛舍混裝奶每年要至少隨機抽檢3次。一經發現感染者，應立即捕殺，并按正確的方法做好焚燒、深埋和消毒處理，對可疑奶牛，應立即離場隔離，并做好衛生消毒。

6.2.2 自繁自養 奶牛養殖場區應該做到“自繁自養”，盡量不從外地調牛或購牛。需要購牛時，應選擇非疫區牛源，并且要求有當地動物衛生監督部門出具的動物檢疫合格證明。奶牛買進后要先隔離30天，隨后“兩檢一免”，即做2次布病檢疫（間隔30 d），隨后再疫苗免疫，15 d月以后方可入群。

6.2.3 犢牛培養 實施人工授精，選用精液要檢疫合格，所用器械要嚴格消毒。犢牛出生后用3%～5%來蘇兒溶液全身消毒，并立即隔離。犢牛喂初乳5～10天，隨后用健康牛乳飼喂（可巴氏消毒）。犢牛舍環境應經常消毒，并做好人員、工具器械進出場的消毒工作。犢牛20日齡、5月齡和9月齡時要各進行一次布病檢測，3次結果全是陰性者方可進入犢牛群。

6.2.4 環境消毒 嚴格執行獸醫防疫制度，每季度進行一次全場消毒。場區、牛舍入口設消毒池（可內置3～5%來蘇爾溶液或20%石灰乳等，10 d更換一次），牛舍、運動場每月消毒一次，飼養、擠奶等設備也要定期消毒。對布病流產奶牛的胎兒、流產物等要做焚燒或深埋等處理，還要做好場區鼠、蚊、蠅等的撲殺工作。

疫情檢出后，對病牛、可疑牛的牛床、食槽等每天要進行一次消毒，糞便等排泄物要單獨收集并做無害化處理。牛舍、飼養工具每天都要進行消毒，直至病牛、可疑牛無害化處理完畢。運動場地要徹底清污，并連續消毒3～5 d。牛場金屬設備用火燒、熏蒸等方式消毒；飼槽、牛欄、地面、糞尿溝、車輛、分娩室等用2%燒堿、5%來蘇兒或氯制劑等消毒；運動場徹底清掃，隨后用20%石灰乳消毒；牛舍的飼料、墊料采取深埋發酵或焚燒處理；糞便采取堆積后密封發酵或深埋處理。

6.2.5 飼養管理 對奶牛群要加強飼養管理，保證飼草飼料安全，適時調整飼料配方，以增強奶牛體質，提高奶牛自身的抗病能力。可飼喂微生物制劑，以抑制奶牛體內的病原微生物，有效提高奶牛機體的免疫力。

6.2.6 人員防護 布病是嚴重的人畜共患傳染病。場區的獸醫、飼養員、配種員和修蹄員等工作人員，必須嚴格遵守防護制度，尤其在產犢季節。與感染牛接觸的人員，應穿好防護服裝，并做好消毒工作。以上人員每年都要進行1次布病檢查，對檢出的感染人員，要堅決調離原工作崗位，消除布病傳染源。

參考文獻：

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