注射用生脈對感染性休克的影響

陳 光，丁曉飛，吳英良

生脈散出自《內(nèi)外傷辨惑論·卷之中暑傷胃氣論》，含人參、麥冬、五味子［1］。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，生脈具有改善心臟泵血功能、抗凝血、抗炎和提高免疫力等作用。臨床主要用于治療冠心病心絞痛、感染性休克和心源性休克等疾病［2-3］。注射用生脈是由紅參、麥冬和五味子的有效成分制成的中藥注射用凍干粉，有效成分主要為皂苷類物質(zhì)。本實驗旨在探討注射用生脈對感染性休克大鼠血壓、心肌酶譜和血漿一氧化氮含量的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 RM-6240 B型生理實驗系統(tǒng)(成都儀器廠)，CL-770自動生化分析儀(日本島津公司)。注射用生脈［Shengmai for injection(SM)，批號:20021022，沈陽藥科大學(xué)藥劑教研室］，參附注射液［Shenfu Injection(SF)，批號:030718，雅安三九藥業(yè)有限公司］，戊巴比妥鈉(批號:020919，北京化學(xué)試劑公司)，乳酸(LD)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(南京建成生物工程研究所)。Wistar大鼠，體質(zhì)量200～300 g，雌雄兼用，由沈陽藥科大學(xué)動物中心提供，合格證號:SCXK(遼)2003-0008。

1.2 方法 按盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(Cecal ligationpuncture，CLP)復(fù)制大鼠感染性休克模型［4］:大鼠術(shù)前禁食12 h，自由飲水;乙醚輕度麻醉，常規(guī)消毒腹部，下行腹正中切口，輕輕拉出盲腸，結(jié)扎其根部并保持腸道通暢，用20號針頭在盲腸腸壁上穿刺2次，兩個針孔相距約3 mm，第一針孔距盲端約3 mm，擠出少量內(nèi)容物，然后將盲腸送回腹腔，逐層縫合腹壁。術(shù)畢大鼠經(jīng)背部皮下注射生理鹽水30 mL/kg以補(bǔ)充手術(shù)過程中體液的損失。術(shù)后20 h對模型復(fù)制成功的大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組，每組8只，雌雄各半，分別為假模型組，模型組，注射用生脈高、中、低劑量組(相當(dāng)于紅參生藥量1.10、0.54、0.27 g/kg)和參附注射液組(相當(dāng)于紅參生藥量0.54 g/kg)。大鼠戊巴比妥鈉40 mg/kg麻醉，常規(guī)消毒頸部，分離左側(cè)頸總動脈，插管并連接RM-6240 B型生理信號記錄分析系統(tǒng)記錄大鼠動脈血壓。待血壓穩(wěn)定后，記錄給藥前血壓值。大鼠尾靜脈給予受試物或等容量生理鹽水(給藥容量:0.2 mL/kg，給藥速度:控制在10 min內(nèi)給完)，分別記錄給藥后 10、15、20、30、45、60、90、120 min時的血壓。給藥120 min后從頸動脈抽血2 mL，參照試劑盒說明，測定LD、NO、MDA含量和SOD活力。最后處死大鼠，迅速取出心臟置入10%福爾馬林中固定;石蠟包埋，切片，HE染色，顯微鏡觀察感染性休克大鼠心臟的病理改變。

2 結(jié)果

2.1 注射用生脈對感染性休克大鼠血壓的影響

由表1可見，感染性休克模型大鼠的血壓較假手術(shù)組大鼠血壓有明顯下降，模型組動物平均動脈壓小于 11 kPa;注射用生脈 1.10、0.54、0.27 g/kg可顯著提高感染性休克大鼠的平均動脈壓，與模型組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01);其中注射用生脈 1.10 g/kg給藥30 min，血壓較給藥前升高約21%左右，之后血壓上升幅度有所下降，但與模型組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。且注射用生脈提升感染性休克大鼠血壓的效應(yīng)呈一定的劑量依賴性。

表1 注射用生脈對感染性休克大鼠血壓的影響(±s，n=8，kPa)

表1 注射用生脈對感染性休克大鼠血壓的影響(±s，n=8，kPa)

注:與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與假手術(shù)組比較，#P＜0.01

組別 劑量g/kg 0 min 20 min 30 min 45 min 60 min 90 min 120 min假手術(shù) － 15.0±1.5 14.5±1.1(－2.62±6.57)14.6±1.2(－2.04±6.61)14.7±1.5(－1.40±7.01)15.1±1.8(0.71±7.68)15.0±1.6(0.28±8.99)14.6±1.2(－1.74±10.60)模型 － 10.8±2.3# 10.5±2.5#(－3.59±9.51)9.6±3.6#(－11.93±9.22)生脈 1.10 11.1±3.2# 12.5±2.9*(19.88±29.68)10.3±2.7#(－5.54±10.25)10.3±2.9#(－5.74±12.90)10.0±2.8#(－8.26±7.60)9.83±3.6#(－9.81±7.22)12.0 ±3.5＊＊(8.31±8.60)0.54 11.8±1.4# 12.6±1.4*(7.43±9.41)12.8 ±3.0＊＊(20.92±21.94)12.2±3.2*(12.68±15.06)11.9±3.2*(9.23±10.82)12.1±3.6*(9.10±10.54)10.9±2.0(－2.02±13.26)參附 0.54 9.6±2.5# 10.9±2.4*(17.50±24.70)13.3 ±1.3＊＊(13.15±10.09)0.27 11.2±1.6# 12.1±1.9*(8.82±12.71)13.1 ±1.5＊＊(11.56±10.89)13.2 ±1.4＊＊(11.93±9.84)13.4 ±1.2＊＊(14.77±15.18)13.3±1.2*(13.33±12.64)12.1±2.2*(8.60±15.87)11.6±2.2(3.66±14.45)11.7±2.0*(4.54±12.78)11.6±2.0(4.22±11.94)11.3 ±2.3＊＊(21.27±22.55)10.7±2.5*(13.97±18.67)10.4 ±2.4＊＊(10.32±14.12)10.2±3.0*(6.65±13.51)10.4±2.7(5.38±40.44)

2.2 生化指標(biāo)的測定 表2結(jié)果表明，感染性休克模型大鼠血中LD、NO、MDA含量與假手術(shù)組比較明顯升高，而SOD活力顯著下降。注射用生脈1.10、0.54和0.27 g/kg均能明顯降低全血LD、血漿NO和MDA含量，同時提高血漿的SOD活力，與模型組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或0.01)。

表2 注射用生脈對感染性休克大鼠血中LD、NO、MD及SOD活力的影響(±s，n=8)

表2 注射用生脈對感染性休克大鼠血中LD、NO、MD及SOD活力的影響(±s，n=8)

注:與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與假手術(shù)組比較，#P＜0.01

組別 劑量(g/kg) cLD(mmol/L) cNO(μmol/L) cMDA(nmol/mL) aSOD(U/mL)假手術(shù)1.11±0.59 10.1±3.8 6.78±1.28 185.81±20.66模型 － 7.81±1.75# 142.2±45.2# 15.55±3.42# 74.81±13.94#生脈 1.10 5.09±1.84＊＊ 78.5±45.1* 11.02±1.94＊＊ 131.62±21.10＊＊0.54 6.02±1.25* 89.3±40.7* 12.01±1.95* 120.27±21.07＊＊0.27 6.18±1.34 90.5±29.0* 12.40±1.48* 117.05±22.98＊＊參附 0.54 5.96±1.10* 82.2±27.8＊＊ 11.88±1.40* 121.68±13.31－＊＊

2.3 病理組織學(xué)檢查 如圖1所示，假手術(shù)對照組大鼠心肌組織無異常改變，心肌橫紋清晰，細(xì)胞核居中，間質(zhì)未見血管擴(kuò)張及炎性細(xì)胞浸潤。感染性休克模型組大鼠心肌組織可見大范圍的炎性細(xì)胞浸潤，也可見毛細(xì)血管擴(kuò)張、出血，有不同程度的細(xì)胞壞死和組織纖維化，心肌結(jié)構(gòu)紊亂。在給予不同劑量的注射用生脈治療后，與模型組比較，治療組大鼠心肌組織損傷有不同程度的減輕，表現(xiàn)為心肌結(jié)構(gòu)趨于正常，水腫及變性、壞死等改變明顯減輕;注射用生脈高劑量組效果最為明顯，但仍有少量的炎性細(xì)胞浸潤等改變。

3 討論

感染性休克是以持續(xù)性低血壓、低血氧、代謝性酸中毒、多器官功能障礙及死亡為特征的一種危重疾病，其病死率高達(dá)46% ～82%。本實驗參照Wichman等方法采用CLP復(fù)制了大鼠感染性休克模型。CLP組動物術(shù)后逐漸出現(xiàn)萎靡、躁動、寒戰(zhàn)、豎毛、腹瀉、膿性尿及眼角分泌物增多等現(xiàn)象。術(shù)后20 h監(jiān)測血壓，與假手術(shù)組動物相比，模型組動物血壓明顯降低。實驗結(jié)束后，對處死動物進(jìn)行大體尸解，可見大鼠腹腔內(nèi)有血性滲出液，帶惡臭，盲腸腫脹變黑，發(fā)生壞疽及粘連，空腸腸管脹氣，肝、肺充血水腫，尚有瘀點及瘀斑。同時，血液學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，CLP組動物全血LD含量較假手術(shù)組動物顯著升高。上述癥狀與文獻(xiàn)報道的大鼠感染性休克模型一致［4-5］。

圖1 注射用生脈對感染性休克大鼠心肌損傷的影響

靜脈給予注射用生脈可顯著升高感染性休克大鼠的血壓，減少全血中LD的含量，與假手術(shù)組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。表明注射用生脈可以改善感染性休克大鼠的血流動力學(xué)，提升血壓;改善感染性休克時的細(xì)胞代謝障礙。

另有研究報道，大量釋放NO可能是引起感染性休克血液動力學(xué)改變的原因之一［6］。感染性休克時，在脂多糖或多種細(xì)胞因子的刺激下，巨噬細(xì)胞內(nèi)的iNOS過度表達(dá)，產(chǎn)生大量的NO。NO合成的過量增加一方面可結(jié)合超氧陰離子生成過氧亞硝基陰離子，造成心肌細(xì)胞氧化損傷，降低心肌收縮力;另一方面，NO含量升高可刺激環(huán)鳥苷酸(cGMP)產(chǎn)生，使心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度降低，心肌收縮力顯著下降，心功能降低，最終導(dǎo)致急性心功能衰竭。本實驗中給藥組大鼠血清NO含量明顯低于模型組，SOD活力則有顯著增加，說明注射用生脈可能減輕心肌細(xì)胞的氧化損傷而發(fā)揮心肌細(xì)胞保護(hù)作用。

大鼠心臟的病理組織學(xué)檢查結(jié)果同樣證實了注射用生脈的心肌細(xì)胞保護(hù)作用，模型組大鼠心肌組織有大量炎性細(xì)胞浸潤，心肌纖維排列紊亂，心肌細(xì)胞有不同程度的變性、壞死，給藥組動物心肌細(xì)胞的損傷明顯輕于模型組。

［1］ 徐琰.生脈散對慢性心力衰竭大鼠模型心室重構(gòu)的影響［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2012，28(3):241-244.

［2］ 范秀風(fēng)，姬雪梅.生脈注射液治療急性心肌梗死45例［J］.陜西中醫(yī)，2010，31(10):1299-1300.

［3］ 黃道永，陳矛，林凱旋.生脈注射液治療膿毒性休克的療效觀察與體會［J］.吉林醫(yī)學(xué)，2011，32(17):3436-3438.

［4］ 谷長平，張巖，張成明，等.鹽酸戊乙奎醚對感染性休克大鼠心肌核因子-κB 的影響［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2011，21(5):567-571.

［5］ 張敏，吳玉斌，于姝楊.水通道蛋白2在膿毒癥大鼠腎臟的表達(dá)及意義［J］.中國小兒急救醫(yī)學(xué)，2009，16(4):365-368.

［6］ 孫曉霞，王健春，唐笑迪，等.人參二醇組皂苷對感染性休克大鼠血清一氧化氮合酶及一氧化氮的影響［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2006，16(15):2298-2300.