連接黏附因子-A在乳腺癌中的表達與意義

高 鵬 黃錦宇 鄢德宏 徐瑩瑩▲

1.中國醫科大學附屬第一醫院乳腺外科，沈陽 110000；2.中國醫科大學附屬第一醫院胃腸腫瘤外科，沈陽 110000；3.遼寧省新民市人民醫院外一科，遼寧新民 110300

連接黏附因子（junctional adhesion molecule，JAM）超家族蛋白是一種跨膜蛋白，廣泛表達于上皮及內皮細胞的緊密連接處，并在血小板和白細胞等血液細胞表達[1-2]。JAM的生理功能包括保持上皮細胞的極性，維持細胞間黏附，調節上皮細胞的形態，調控細胞遷移等[3-4]。近些年逐漸有文獻報道JAM家族中的JAM-A與癌癥的發生發展密切相關，并已成為全世界研究的熱點。但JAM-A與乳腺癌的關系國內尚無研究，因此本研究采用免疫組織化學方法檢測乳腺癌組織中JAM-A的表達并探討其與臨床病理特征和患者預后之間的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2005年1月～2007年12月中國醫科大學附屬第一醫院腫瘤外科乳腺癌切除標本52例，病理結果均證實為浸潤性乳腺癌，所有患者均有完整的臨床資料和隨訪信息。

1.2 主要試劑

JAM-A 抗體（clone 2E3-1C8）購于 Abnova公司（德國）。通用型SABC試劑盒（即用型）、DAB試劑盒均購自武漢博士德有限公司。

1.3 免疫組織化學

組織切片常規脫蠟水化，雙氧水阻斷內源性酶，緩沖液高壓修復，室溫冷卻30 min，加一抗于濕盒中4℃過夜，加入二抗，置濕盒中37℃ 30 min，加入SABC液于濕盒中30 min，最后加入DAB顯色液顯色1～2 min，加入蘇木素復染液中復染4 min，鹽酸乙醇分化，梯度乙醇透明，中性樹膠封片。

1.4 染色結果判定

染色結果基于染色強度和陽性細胞比例進行綜合評分，具體如下。

1.4.1 染色強度 細胞無染色，0分；細胞呈淺黃色，1分；細胞呈深黃色，2分；細胞呈深棕色，3分。

1.4.2 陽性細胞比例 無陽性細胞表達，0分；陽性表達細胞比例＜25%，1分；陽性表達細胞比例介于25%~50%，2分；陽性表達細胞比例介于50%~75%，計3分；陽性表達細胞比例＞75%，4分。

上述兩種判斷標準得分乘積為最終計分結果：＜4分為JAM-A陰性表達，≥4分為陽性表達。

1.5 統計學方法

應用SPSS 19.0軟件進行數據分析，JAM-A表達與臨床資料的關系采用χ2檢驗，JAM-A陰性表達與JAM-A陽性表達患者的生存采用Kaplan-Miere法描繪，差異性采用Log-Rank檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

52例患者中，共有16例（30.8%）為JAM-A陽性表達，且均為細胞膜表達。

JAM-A的表達情況與乳腺癌的淋巴結轉移和腫瘤大小明顯相關，而與雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、人類表皮生長因子受體2（HER2）無明顯相關性，與JAM-A陰性患者相比，JAM-A陽性表達的患者發生淋巴結轉移的概率明顯減小，較大腫瘤的發生概率亦明顯低于JAM-A陰性患者（表1），上述結果表明，JAM-A在乳腺癌的發生、發展中可能起腫瘤抑制因子的作用。

生存分析結果顯示，JAM-A陽性患者的5年生存率為93.8%，JAM-A陰性患者的5年生存率為84.9%，兩組5年生存率差異無統計學意義（P=0.30）（圖1）。

表1 JAM-A表達與臨床資料的關系[n（%）]

圖1 JAM-A陰性表達與JAM-A陽性表達的生存曲線

3 討論

在多數腫瘤中，JAM-A被認為是腫瘤進展的負調控因子。Gutwein等[5]發現，JAM-A在腎透明細胞癌中的表達明顯低于癌旁和正常腎組織，在腎癌細胞系中發現了JAM-A對腫瘤細胞遷徙能力的抑制功能。Fong等[6]利用免疫組織化學技術檢測JAM-A在186例胰腺癌組織中的表達情況時發現，JAM-A的表達降低與腫瘤的淋巴結轉移，遠處轉移和腫瘤分期呈明顯相關，預后分析顯示JAM-A表達有利于腫瘤患者的預后，并且利用多因素證明JAM-A的表達情況是獨立的預后因素。Nava等[7]通過體內及體外實驗證明，JAM-A能通過同源二聚體的形式抑制腸上皮細胞的增殖能力，并且發現JAM-A是通過抑制Akt/b-catenin通路發揮相應的功能。在黑色素細胞瘤中，Ghislin等[8]發現利用siRNA降低內源性JAM-A表達后，腫瘤細胞的遷徙能力明顯增強。

JAM-A在乳腺癌的進展中究竟發揮著怎樣的作用一直存在爭議。Brennan等[9]在乳腺癌的組織芯片中檢測JAM-A的表達情況，發現癌灶中的JAM-A表達明顯高于正常乳腺組織，并且乳腺癌中JAM-A的表達與HER2陽性、ER陰性、腫瘤分期明顯相關。同樣，McSherry等[10]利用乳腺癌組織芯片證明了Brennan的結果，JAM-A的高表達與HER2表達以及TNM分期具有相關性；此外，生存分析顯示JAM-A的表達與乳腺癌患者的不良預后相關。McSherry等[11]在一篇研究中發現，JAM-A能夠通過調控Rap1 GTPase和β1-integrin來發揮促進乳腺癌細胞遷徙的能力。而G觟tte等[12]的研究證明了JAM-A作為miR-145的下游靶基因，可以介導miR-145對乳腺癌細胞的侵襲和遷徙能力的調控，并得出JAM-A能夠增強乳腺癌細胞的遷徙和侵襲能力的結論。與上述研究的結果相反，Naik等[13]在一篇研究JAM-A與乳腺癌關系的研究中指出，JAM-A的表達明顯低于癌旁組織，并且在轉移灶中表達最低；在乳腺癌細胞系后高表達JAM-A后，腫瘤細胞的運動能力以及侵襲能力大幅度減弱，并認為JAM-A高表達后腫瘤細胞間的緊密連接形成增多是其調控腫瘤細胞遷徙和侵襲的機制。

雖然國際上JAM-A對乳腺癌進展的調控已成為研究熱點，但國內尚無此方面研究。為了填補國內這一空白，本研究應用免疫組織化學技術檢測JAM-A在乳腺癌組織中的表達情況并探討它和臨床病理和預后的關系。結果表明，JAM-A的表達與淋巴結轉移和腫瘤大小呈明顯的負相關，JAM-A陽性表達的患者發生淋巴結轉移的概率明顯減小，較大腫瘤的發生概率亦明顯低于JAM-A陰性患者。結果表明，JAM-A在乳腺癌的發生發展中可能起腫瘤抑制因子的作用，這一結果與國外的一篇研究報道結果一致[13]。盡管JAM-A與淋巴結轉移和腫瘤大小明顯相關，但JAM-A陽性與JAM-A陰性患者的生存差異無統計學意義，認為該結果主要與樣本量較小有關，從生存率上可以看出，JAM-A陽性患者的生存要略好于JAM-A陰性患者，因此，本研究推測，如果適當擴大樣本量，兩組之間的生存差異很可能有統計學意義。

目前JAM-A正引起腫瘤學者的關注，相信隨著研究的不斷深入，JAM-A可能會成為輔助腫瘤診斷和判斷預后的一個標志物，并且可能為腫瘤的治療提供一個新靶點。

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