胃癌組織中CyclinD1和p21WAF1蛋白的表達及臨床意義

李 慧，張 晶，耿 明，秦 軍

(1解放軍第107醫院，山東煙臺264002;2山東省醫學科學院附屬醫院;3濟南軍區總醫院)

胃癌是常見的惡性腫瘤之一，其發生涉及多種因素，細胞周期調控異常就是近年來研究熱點之一。本研究中，我們選取細胞周期的正負兩種調控因子CyclinD1和 p21WAF1［1］，采用免疫組化 S-P法檢測了88例胃癌及癌旁組織中的表達情況，旨在了解其與胃癌發生、發展的關系，為胃癌的診斷及基因治療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇濟南軍區總醫院病理科2006年9月～2007年6月存檔的88份胃癌及癌旁組織(距腫瘤大于5 cm，病理證實為正常胃黏膜組織)石蠟包埋標本，其中患者男50例、女38例，年齡35～78歲、中位年齡62歲。所有患者術前未行化療、放療。按WHO標準分類:乳頭狀腺癌18例，管狀腺癌30例，黏液腺癌22例，印戒細胞癌18例。病理學分級和pTNM分期按國際抗癌協會標準。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學染色 所有標本經10%甲醛固定、常規脫水、石蠟包埋。切片經微波抗原修復處理后，采用免疫組化S-P法觀察CyclinD1、p21WAF1陽性蛋白的表達。所用試劑購自邁新公司。

1.2.2 結果判斷 以細胞核著棕黃色為陽性細胞，著色呈顆粒型或彌散型。染色結果判定參照文獻［2，3］。

1.2.3 統計學方法 采用SPSS11.0統計軟件，計數資料以百分數表示，結果比較采用χ2檢驗。相關分析采用Pearson相關分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CyclinD1、p21WAF1蛋白在胃癌及癌旁組織的表達 CyclinD1蛋白染色陽性信號定位于細胞核，呈棕黃色顆粒型或彌散型。CyclinD1蛋白在88例胃癌、癌旁組織中的陽性表達率分別為62.5%(55/88)和2.3%(2/88)，兩者陽性表達率比較 P＜0.05。p21WAF1蛋白染色陽性信號散在分布，定位于細胞核，呈棕黃色顆粒。p21WAF1蛋白在88例胃癌、癌旁組織中的陽性表達率分別為26.1%(23/88)、79.5%(70/88)，兩者陽性表達率比較 P ＜0.05。

2.2 CyclinD1、p21WAF1蛋白陽性表達與胃癌臨床病理因素的關系 見表1。

2.3 胃癌組織中p21WAF1與CyclinD1蛋白表達的關系 Pearson相關分析發現，p21WAF1蛋白陽性表達與CyclinD1蛋白陽性表達呈負相關(r=－0.488，P＜0.05)。

3 討論

細胞周期調控失衡主要是指細胞過度增殖，也是腫瘤發生的主要原因。CyclinD1是一種原癌基因，是細胞周期運行的起始因子，對細胞周期起正性調控作用。正常情況下，CyclinD1與CDK4/CDK6結合，活化的CDK4/CDK6促使Rb蛋白磷酸化，使失活的Rb蛋白釋放出轉錄因子E2F，促使DNA合成，細胞由G1期進入S期［4］，導致細胞增殖。生理狀況下，細胞進入S期后，CyclinD1迅速分解，而在有絲分裂原或生長因子存在的情況下，CyclinD1可持續表達，導致G1期縮短，細胞提前進入S期，使細胞增殖失控，最終形成腫瘤［5］。本研究顯示，在胃癌組織中，CyclinD1蛋白陽性表達率顯著高于癌旁正常組織，證實CyclinD1蛋白過度表達與胃癌發病有關，與 Morsaki等［6］的研究結果一致。CyclinD1蛋白在黏液腺癌、印戒細胞癌中的陽性表達率顯著高于乳頭狀腺癌和管狀腺癌，這可能是因后兩者在組織形態上尚保留著腺體的結構，而前兩者為產生黏液的癌，組織學類型上有較大差異，惡性程度相對較高。CyclinD1蛋白在胃癌組織中的表達隨分化程度的降低，其陽性表達率明顯升高，而與浸潤深度、淋巴結轉移等腫瘤進展因素無相關性，提示CyclinD1蛋白高表達可能是胃癌發生過程中一個較早的事件，是重要的胃癌促發因素。

表1 CyclinD1、p21WAF1蛋白表達與胃癌患者臨床病理因素的關系

p21WAF1基因是抑癌基因，編碼目前已知的具有最廣泛激酶抑制活性的細胞周期抑制蛋白。p21第21～26及第49～72位氨基酸處分別與Cyclin、CDK結合，能抑制CyclinD1-CDK4和CyclinE-CDK2的活性，使Rb蛋白不能發生磷酸化，E2F不能釋放，從而使細胞周期停滯在G1期［7］，DNA復制受抑制，從而使受損的細胞有充分的時間修復。陳惠新等［8］研究發現，p21WAF1陽性蛋白在胃癌癌變多階段組織中均有表達，隨著病變惡性程度的演進，p21WAF1陽性蛋白表達水平明顯下降。因此，p21WAF1蛋白可作為檢測胃黏膜惡性病變的特異性分子標志物，p21WAF1蛋白表達減少或缺如在胃癌的發生中發揮重要作用。Akama等［9］研究證實，胃癌組織中無 p21基因突變，p21基因可能是通過其編碼蛋白的表達水平來調節細胞周期，從而參與腫瘤的發生和發展。本實驗研究中，p21WAF1蛋白在胃癌組織中的陽性表達率顯著低于癌旁正常胃組織(P＜0.05)，證實p21WAF1基因是作用于細胞周期中G1期的負性調控因子，抑制細胞增殖，其蛋白的低表達可能是腫瘤形成的重要因素之一。p21WAF1蛋白在黏液腺癌和印戒細胞癌中的陽性表達率顯著低于乳頭狀腺癌和管狀腺癌，提示其表達可能與組織病理學類型有關。隨著胃癌組織分化程度及惡性程度的降低，p21WAF1蛋白的表達率降低，這可能因為p21WAF1蛋白是癌細胞分化的誘導介質，其低表達可導致細胞增殖失去有效監控及腫瘤惡性表型的增加［10］，提示p21WAF1蛋白在胃癌的發生、發展中起著重要的作用，p21WAF1蛋白的表達缺失可能導致了腫瘤細胞的無限制增殖，p21WAF1蛋白檢測可能是一個有用的臨床預后指標。

總之，胃癌組織中存在CyclinD1及p21WAF1蛋白的異常表達，并與胃癌的發生、發展有關。

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