兩種防脫片劑在免疫組化染色中的應用比較

張婉儀 胡垚 葉勇

免疫組化（IHC）是應用抗原抗體反應的原理，通過化學反應顯色確定組織細胞內抗原對其進行定位、定性及定量的技術，由于IHC步驟多、環節多、影響因素多，要求組織切片在實驗過程中要有較高的耐受能力，避免脫片的發生，耗損人力物力，延誤了實驗結果準確診斷，故防脫片是保證病理診斷工作的關鍵[1-2]。筆者為了探討免疫組化染色中防脫片的方法，通過對50 份切片進行處理觀察，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 材料 選自我院50 例經10%中性甲醛液固定的乳腺組織、宮頸組織、前列腺組織、脫鈣骨組織、細胞塊組織、腸癌組織、淋巴組織、甲狀腺組織等，每個病例挑選同一個組織塊進行切片兩張，分成兩組。對照組50 張切片，觀察組50 張切片。兩組標本比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 儀器和試劑盒 免疫組化試劑盒、多聚賴氨酸、APES由北京中杉金橋生物技術開發有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 防脫玻片的制備 選擇同一批高清潔度免洗載玻片。對照組處理方法： 將載玻片浸泡在2%的APES無水乙醇溶液中1～2 min，再分別在無水乙醇（Ⅰ）（Ⅱ）（Ⅲ）浸洗1～2 min，洗去未結合的APES，置60℃烤干1 h，備用。觀察組處理方法：將載玻片浸泡在0.01%多聚賴氨酸水溶液中5 min，取出置60℃烤干1 h或室溫晾干備用。

1.3.2 切片 組織塊經脫水包埋后，連續切片2 張，厚4 μm，分別用APES及多聚賴氨酸玻片撈片，置65℃烤箱烤片2～3 h。

1.3.3 顯色 切片脫蠟至水，蒸餾水洗，PBS洗，分別采用高壓鍋熱修復、微波熱修復和胃酶消化3 種抗原修復方式后，PBS洗3 min/2 次，H2O2室溫10 min，PBS洗5 min/2 次，山羊血清室溫封閉30 min，PBS洗5 min/2 次，滴加一抗抗體并4℃孵育過夜，PBS洗5 min/3 次，滴加相應二抗，37℃孵育15 min，PBS洗5 min/3 次，滴加相應三抗，37℃孵育15 min，PBS洗5 min/3 次，加DAB顯色液，自來水沖洗、復染、脫水、透明、封片。

1.4 脫片判斷標準 輕度脫片：切片邊緣輕度卷曲至脫落面積＜10%；中度脫片：10%＜切片脫落面積＜80%；重度脫片：切片脫落面積＞80%。

1.5 統計學方法 所有數據采用SPSS 18.0 統計學軟件進行處理，計量資料采用均數±標準差（±s）表示，計數資料采用χ2檢驗或秩和檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

觀察組完整貼片率為100%，對照組完整貼片率為92%，觀察組完整貼片率優于對照組，差異有統計學意義（P=0.023＜0.05），見表1。

表1 兩組脫片情況比較

3 討論

由于病理組織常規使用的甲醛固定劑可以造成蛋白質的交聯，即在氨基酸分子間形成亞基橋從而造成部分或大部分抗原結合位點（抗原決定族）的封閉，通過抗原熱修復可以使抗原結合位點重新暴露[3]，從而增加免疫組化染色的強度。免疫組化實驗過程中，步驟多、環節多，通常會用到高壓熱修復、微波熱修復和酶消化等方式進行抗原修復，防止組織因高溫、高壓和酶消化等的外力作用而出現脫片現象，是保證及時準確的實驗結果的重要條件。

本研究結果顯示，多聚賴氨酸防脫劑有理想效果，多聚賴氨酸其分子結構中所具有的多個陽離子集團與組織上陰離子相互作用會產生較強的粘合力，可有效防止免疫組化、原位雜交等過程中的脫片現象[4-6]。采用浸泡方法進行多聚賴氨玻片的制備，可以使多聚賴氨酸水膜在玻片均勻分布，通過長時間的浸泡，使玻片表面充分與試劑接觸，產生良好的防脫片效果[7]。組織粘附于玻片后完全可以耐受多重物理化學環境劇變，可運用于常規免疫組化、冷凍免疫組化、分子實驗技術等，且易于標準化制作，操作簡單，節約試劑。

筆者認為免疫組化防脫片還應注意幾點：(1)在進行多聚賴氨酸浸泡過程中容器應選擇塑料制品，避免玻璃器皿；(2)烤片時間以1 h為宜，不可過久，烤干即可；(3)多聚賴氨酸工作液不使用時置于4℃環境保存，同批工作也循環使用次數不超過3 次，保留時間短于1 個月。

[1]郭麗，祁榮，吳鵬.不同的抗原修復方法在免疫組化染色中的應用[J].沈陽醫學院學報，2012，11(3) ：152-153.

[2]李慧，黃景陽，袁中瑞.提高腦組織冰凍切片質量的幾點體會[J].中國免疫學雜志，2012，2(11) ：1019-1022.

[3]王德田，董建強，梁智通.實用現代病理學技術[M].北京：中國協和醫科大學出版社，2012：158.

[4]王文勇，黃曉峰，閆慶國，等.DPX封片膠在牙組織免疫組化染色防脫片中的作用[J].細胞與分子免疫學雜志，2012，7(4) ：418，421.

[5]王興波，任仕俊，陳懷敏，等.抗原熱修復退色法在HE切片改做免疫組化染色中的探索[J].臨床與實驗病理學雜志，2012，4(10) ：1176-1177.

[6]張宏桃.免疫組化切片質量控制的幾點體會[J].中國社區醫師(醫學專業)，2012，12(7) ：271.

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