HPLC法測定藏藥十五味乳鵬丸中大黃酚的含量

巴桑卓嘎 蘭 鈞

西藏自治區食品藥品檢驗所，西藏 拉薩 850000

HPLC法測定藏藥十五味乳鵬丸中大黃酚的含量

巴桑卓嘎 蘭 鈞

西藏自治區食品藥品檢驗所，西藏 拉薩 850000

目的：建立藏藥十五味乳鵬丸中大黃酚的含量測定方法。方法：色譜柱為島津VP－ODS C18（4.6mm×250mm，5μm）；以甲醇－0.1%磷酸溶液（85：15）為流動相；流速為1.0mL／min；檢測波長為430nm。結果：大黃酚的線性范圍為0.015884～0.07942μg （r＝0.9992），平均回收率為100.81%， RSD%＝1.6%。結論：本方法高效，快速，靈敏，可用于藏藥催湯丸的質量控制。

十五味乳鵬丸；HPLC；大黃酚；含量測定

藏藥十五味乳鵬丸是由乳香、寬筋藤、決明子、渣馴膏、黃葵子、藏菖蒲等15味蔵藥制成的復方藏藥制劑。具有消炎止痛，干黃水的功效，用于關節紅腫疼痛，發癢，痛風，黃水積聚［1］。決明子為主藥，大黃酚為其主要成分。為有效控制產品質量，建立了十五味乳鵬丸中大黃酚含量的高效液相色譜（HPLC）測定法［2］。本法操作簡便、準確、重復性好，可作為藏藥十五味乳鵬丸的質量控制方法。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀，Waters2696泵自動進樣器，2998二極管陣列紫外檢測器，Waters自帶數據處理器，超聲儀，旋轉蒸發儀，十萬分之一電子天平。

大黃酚（中國生物制品檢定所，批號：110796－2000716）；十五味乳鵬丸（西藏雄霸拉去藏藥廠，批號：20090901、20091101；西藏金珠雅礱藏藥責任有限公司，批號：090301）；陰性樣品藥材（西藏自治區食品藥品檢驗所）；甲醇、磷酸為色譜級，水為超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

島津VP－ODS C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），以甲醇－0.1%磷酸溶液（85：15）為流動相；檢測波長：430nm；流速：1.0ml／mim；進樣：10μl。

2.2 空白試驗 按處方中藥味比例，配制不含決明子的藥群，按其工藝制成空白制劑，再按供試品溶液的制備方法制備并測定，色譜圖見圖1。表明陰性樣品溶液在與大黃酚對照品相同保留時間處未現色譜峰，故認為無干擾。

2.3 對照品溶液的制備 取大黃酚對照品適量，精密稱定，置容量品中，加甲醇制成1ml含8μg的溶液，即得。取寬筋藤對照藥材1g，加甲醇10ml，同法制成對照藥材溶液。

2.4 供試品溶液的制備 取本品粉末2g，精密稱定，置100ml錐形瓶中，精密加入甲醇50ml稱定重量，加熱回流1h，放冷；再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液25ml，置50ml燒瓶中，揮去甲醇；加2.5mol／l硫酸溶液20ml，超聲處理5分鐘，再加三氯甲烷20ml，加熱回流1h，冷卻；移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取2次，每次約10ml，合并三氯甲烷液，用無水硫酸鈉脫水，三氯甲烷液移置50ml燒瓶中，回收三氯甲烷，殘渣加無水乙醇－醋酸乙酯（2∶1）溶解定容置10ml量瓶中，搖勻，用0.45μm超濾膜過濾，取續濾液，即得。

2.5 線性關系的考察 精密量取大黃酚對照品溶液（7.942μg／ml），分別進樣2、4、6、8、10μl，記錄色譜圖，以峰面積（A）對進樣量（C）作圖，得一直線（r＝0.9992）。大黃酚在0.015884～0.07942μg范圍內線性關系良好。結果見表1。

表1 線性范圍考察

2.6 精密度試驗 精密吸取大黃酚對照品溶液（7.924μg／ml）10μl，重復進樣5次，測得大黃酚峰面積值的相對標準偏差（RSD）為0.3%。

2.7 穩定性試驗 取供試品溶液（批號：20090901）分別于0、2、4、8、12h，各進樣10μl，測得樣品中大黃酚峰面積值的相對標準偏差（RSD）為2.0%，表明供試品溶液在24h內基本穩定。

2.8 重復性試驗 按照擬定的含量測定方法，取同一批樣品（由雄巴拉曲藏藥廠生產批號：20090901）5份，分別制成供試品溶液，進樣10μl，測得大黃酚含量，其相對標準偏差（RSD）為0.7%

2.9 加樣回收率 取已知含量（63.2μg／g）（批號：20090901）的樣品約1.2g，精密稱定，精密加入對照品溶液（大黃酚8.2944μg／ml）4ml，按照供試品制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀，計算回收率。結果見表2。

表2 大黃酚對照品加樣回收率試驗結果（n＝6）

2.10 樣品的測定 按上述方法制備供試品溶液和對照品溶液（7.942、8.36μg／ml），分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。結果見表3。

表3 十五味乳鵬丸中大黃酚含量測定結果

3 討論

本品功效消炎止痛，干黃水。用于關節紅腫疼痛，發癢，痛風，黃水積聚。處方中決明子具有干黃水、止癢、止痛的功效［3］，涵蓋了本處方的主要功能主治。因此本標準建立了決明子中的大黃酚含量測定，并參考文獻建立了高效液相色譜法測定十五味乳鵬丸中大黃酚的含量，該法簡便，準確，靈敏度高，重復性好，可用于本品中大黃酚的含量測定。

對本品中大黃酚進行相應的提取方法考察，甲醇加熱回流提取1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液25ml，置50ml燒瓶中，揮去甲醇，再加2.5mol／L硫酸溶液和三氯甲烷加熱回流，其次用三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷液，回收溶劑，最后殘渣用甲醇－三氯甲烷（1∶1）和乙醇－乙酸乙酯（2∶1）不同的混合溶液溶解，綜合提取率、干擾背景、分離度等因素，最終確定了殘渣加乙醇－乙酸乙酯（2∶1）溶解。

［1］中國衛生部藥典委員會編.中華人民共和國衛生部藥品標準［S］.藏藥（第一冊），1995.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010.

［3］占堆，趙軍寧.藏醫成方制劑現代研究與臨床應用［M］.四川：四川科學技術出版社，2009：12.

Content determination of Chrysophanol in Tibet traditional medicine Shiwuwei Rupeng pills by HPLC

BaSang Zhuoga，LAN Jun
Tibet Institute for Food and Drug Control，Lhasa 850000，China

ObjectiveTo set up a method for determining the content of chrysophanol in Shiwuwei Rupeng Wan.MethodsThe chromatogram column was SHIMADZU VP－ODS C18（4.6mm×250mm，5μm），the mobile phase composition was methanol－0.1%orthphosphoric acid（85：15），the flow rate was 1 mL／min，the detection wavelength was at 430nm.ResultsThe linear range of chrysophanol was 0.015884～0.07942μg，r＝0.9992.The average recovery rate was 100.81%，RSD%＝1.6%.ConclusionThe method is highly effective，quick and sensitive，and suitable for quality control of Tibet traditional medicine Shiwuwei Rupeng pills.

shiwuwei Rupeng Wan；HPLC；chrysophanol；content determination

R291.406

A

1007－8517（2013）16－0004－02

2013.06.04）