鹿角壯骨膠囊質量標準研究

周 勇 文芳杰

貴州省黔南布依族苗族自治州中醫醫院，貴州 都勻 558000

鹿角壯骨膠囊質量標準研究

周 勇 文芳杰

貴州省黔南布依族苗族自治州中醫醫院，貴州 都勻 558000

目的：鹿角壯骨膠囊為黔南州中醫醫院“骨傷Ⅲ”號驗方，根據醫院制劑的注冊要求，對其質量標準進行研究。方法：采用薄層色譜法定性鑒別處方中臣藥炙黃芪和佐藥川芎；采用高效液相色譜法測定骨碎補中柚皮苷含量。結果：炙黃芪、川芎能定性鑒別出，陰性無干擾；柚皮苷的回歸方程分別為Y＝1745.5X＋31.35，r＝0.9998，膠囊中柚皮苷含量為0.036～0.052%。結論：該質量標準及相關檢測方法正確、簡便、重現性好，對于控制和評價鹿角壯骨膠囊的品質有重要意義。

鹿角壯骨膠囊；薄層色譜法；高效液相色譜法；柚皮苷

鹿角壯骨膠囊處方為黔南州中醫醫院老中醫豐仕多年的臨床實踐總結出來的經驗方。全方配伍嚴謹，方中鹿角霜具溫腎助陽、收斂止血之功，為君藥；枸杞子、黃芪、自然銅共為臣藥，協助君藥補腎益氣，接骨續筋；熟地黃、骨碎補、白術、川芎四藥共為佐藥，佐助君、臣藥，補腎填髓，養血和肝，益氣續筋之功。諸藥合用，共奏補益肝腎，強筋壯骨之功效。適用于骨折肝腎虧虛證，癥見骨連未堅，腰膝酸軟，肢體萎軟，神疲乏力，舌質紅、苔薄白，脈細。此方在臨床療效好。根據臨床需要和劑型選擇依據將原湯劑改進為硬膠囊劑，提高患者應用的順應性，以更好的服務于廣大患者。本文在劑型改進的基礎上，采用中試穩定的鹿角壯骨膠囊進行質量標準研究，為鹿角壯骨膠囊醫院制劑的注冊提供依據。

1 儀器與試藥

Agilent12000高效液相色譜儀；Agilent－G1311A四元泵；Agilent-G1322A真空脫氣器；Agilent－G1314B可變波長檢測器；CHEMSTATION B.04.02化學工作站；AT－330柱溫箱（天津奧特賽恩斯科學儀器有限公司）；超聲清洗機（無錫超聲電子設備廠）；電子天平（瑞士Mettler公司）；KQ－250B型超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器公司）；

鹿角壯骨膠囊，黔南州中醫醫院制劑室自制；柚皮苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110722－201111）；阿魏酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110773－200611）；黃芪甲苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：0781－200210）。甲醇為色譜純，水為純凈水；其它試劑均為分析純。

2 定性鑒別

2.1 川芎的薄層鑒別 取本品4g，加1%碳酸氫鈉溶液50mL，超聲處理30min，離心，取上清液用稀鹽酸調節pH值至2～3，用乙醚提取3次，合并乙醚液，揮干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。按處方及膠囊制備工藝制作缺川芎膠囊，稱取4g，同法制得陰性對照樣品。另取阿魏酸對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VIB）試驗，吸取上述三種溶液各5μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸（4：1：0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下觀察。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照樣品在在與對照品色譜相應的位置上，無相同顏色的熒光斑點。見圖1。

2.2 炙黃芪薄層鑒別 取本品5g，加甲醇50mL，回流提取1.5h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30mL使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20mL，合并正丁醇液；用氨試液洗滌兩次，每次20mL，棄去洗液，再用正丁醇飽和的水洗至中性，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加水5mL使溶解；通過D101大孔吸附樹脂柱層析，以水50mL洗脫，棄去水液，再以30%乙醇50mL洗脫，棄去洗脫液，繼續用70%乙醇50mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。按處方及膠囊制備工藝制作缺川芎膠囊，稱取4g，同法制得陰性對照樣品。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成1mg／mL的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VIB）試驗，吸取上述三種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－水（13：7：2）的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，日光下顯示相同顏色的斑點；紫外光燈（365nm）下顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照樣品在在與對照品色譜相應的位置上，無相同顏色的斑點與熒光斑點。見圖2、3。

3 柚皮苷含量測定

3.1 色譜條件 色譜柱為Lincrospher－C18（江蘇漢邦科技，250×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇：醋酸：水＝35：4：65；檢測波長：283nm；柱溫：35℃；流速：1.0mL／min；進樣量10μL。

3.2 對照品純度檢查 在選定色譜條件分離后，按面積歸一化法，計算其含量為100%。

3.3 系統適應性 在“3.1項”色譜條件下，柚皮苷和樣品中其它組分色譜峰可基線分離，按柚皮苷峰計算，理論板數為4177。同時取陰性供試品溶液進樣，結果表明，陰性供試品在柚皮苷色譜峰處無相應色譜峰出現。柚皮苷、樣品及陰性供試品的HPLC圖譜見圖4。

3.4 對照品溶液的制備 取柚皮苷對照品適量，精密稱定，置量瓶中，加甲醇制成每1mL含100μg的溶液，即得0.1mg／mL。

3.5 供試品溶液的制備 提取時間的考察：取鹿角壯骨膠囊（批號為1204231）約3.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱重，分別超聲處理不同時間，放冷后，加甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續濾液，即得。分別精密吸取供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述條件測定，結果表明：處理20min，柚皮苷含量基本不再增加，為保證提取完全，故確定超聲處理時間為30min。

3.6 線性關系考察 分別精密吸取柚皮苷對照品溶液（0.1mg／mL）2、4、6、8、10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，以峰面積積分值（Y）為縱坐標，柚皮苷進樣量（X）為橫坐標，得回歸方程為：Y＝1745.55X＋31.35，r＝0.9998。結果表明：柚皮苷進樣量在0.2－1.0μg范圍內，進樣量與峰面積積分值呈良好的線性關系。

3.7 精密度考察 分別精密吸取柚皮苷對照品溶液（0.1mg／mL）5μL，按上述色譜件重復進樣6次，柚皮苷峰面積積分值的RSD＜2%。結果表明：精密度良好。

3.8 穩定性試驗 分別精密吸取供試品溶液（批號1204231）10μL，于0、1、2、4、8h分別進樣，測得柚皮苷峰面積積分值，RSD為0.12%。結果表明：供試品溶液在8h內穩定。1個月后，取鹿角壯骨膠囊（批號1204231）約3.0g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法制成供試液，進樣10μL，測得峰面積積分值并計算含量，0月平均含量為0.048%，1個月后平均含量為0.050%。結果表明：樣品在1個月內穩定。

3.9 重復性試驗 取鹿角壯骨膠囊（批號1204231）約3.0g，精密稱定6份，按供試品溶液的制備方法制成供試液，分別進樣10μL，測得峰面積積分值并計算含量，含量平均為0.048%，RSD值為1.73%，試驗結果表明：重復性試驗良好。

3.10 回收率試驗 取已知含量的樣品（批號1204231）1.5g，精密稱定，分別加入柚皮苷對照品適量，按供試品溶液的制備方法制備加樣回收供試品溶液，分別進樣10μL，測定，結果見下表1。

表1 回收率試驗結果

試驗結果表明：回收率在96～100%之間，加樣回收良好。

3.11 樣品測定 取樣品約3.0g，精密稱定，按上述條件進行測定，結果鹿角壯骨膠囊中柚皮苷的含量為0.036－0.052%，結果見下表。

樣品測定結果

批號樣品重（g）柚皮苷含量（%）平均值（%）201200173.02630.051 3.00120.0520.052

4 討論

鹿角壯骨膠囊在臨床應用中收到了較好的療效，一直沿用至今。原為湯劑煎服，服用、攜帶不方便，不宜大量制備。根據臨床需要改進劑型為硬膠囊劑。劑型改進后為了保證其原有臨床療效，需制定相應質量標準，本文薄層定性鑒別為鑒定鹿角壯骨膠囊是否按方投料生產提供相關鑒定方法；柚皮苷含量為0.036～0.052%，考慮到不同批次含量的差異，暫定本品每1g含骨碎補以柚皮（C27H32O14）計，不得少于0.20mg。本文質量研究方法對鹿角壯骨膠囊的質量標準制定具有一定意義。

炙黃芪鑒別參考《中華人民共和國藥典》2010年版一部“黃芪”藥材的鑒別，以黃芪甲苷為對照品，以三氯甲烷－甲醇－水（13：7：2）的下層溶液為展開劑，但由于是復方，其它成分干擾大，導致其它成分的斑點與炙黃芪相重疊，影響其分離度，故對前處理方法進行改進，通過D101大孔吸附樹脂處理，選擇合適濃度的洗脫劑，可使樣品純化，有效除去其它雜質成分對黃芪甲苷的干擾。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：38、239、285.

［2］林昱，李新田，求財榮，等.芪參富康膠囊質量標準研究［J］.中成藥，2008，30（9）：26－27.

［3］鄒俊，張玉潔，田宏，等.川芎茶調丸（濃縮丸）的薄層色譜鑒別［J］.中國藥師，2002，5（8）：505－506.

R286.0

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1007－8517（2013）16－0020－03

2013.06.17）