左金方提取工藝研究

蔡育紅崔紅花

1.廣東省江門市新會區(qū)人民醫(yī)院，廣東 江門 529100；2.廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006

左金方提取工藝研究

蔡育紅1崔紅花2

1.廣東省江門市新會區(qū)人民醫(yī)院，廣東 江門 529100；2.廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006

目的：優(yōu)選左金方水提工藝。方法：采用L9（34）表設(shè)計水提正交實(shí)驗，水提工藝以提取時間、加水量、提取次數(shù)為考察因素，以鹽酸小檗堿含量及得膏率作為評價指標(biāo)。結(jié)果：最佳水提工藝為8倍水提取2小時，提取3次。結(jié)論：該水提工藝簡單可行，重復(fù)性良好，為左金方的工業(yè)化生產(chǎn)提供實(shí)驗依據(jù)。

左金方；提取工藝；正交實(shí)驗

左金丸出自《丹溪心法·火六》，為丹溪名方之一，由黃連、吳茱萸按6：1的比例組成。收載于《中華人民共和國藥典》2010年版一部。其作用原方僅“瀉肝火”，此方雖組方簡單，但適用甚為廣泛［1］，不但可以清肝膽之火，而且能瀉胃腸之熱，具有和胃降逆，制酸止嘔等功效，為辛開苦降的代表方劑。現(xiàn)代藥理研究表明，左金丸除了對消化系統(tǒng)疾病具有廣泛的療效之外，還具有抗癌［2］和降血壓［3］的作用，臨床應(yīng)用也不斷擴(kuò)展。

方中重用黃連為君藥，黃連性味苦寒，配以辛熱的吳茱萸能減輕黃連的苦寒?dāng)∥钢祝瑓擒镙瞧鸱醋舻淖饔谩６幹裕孕翢崤淇嗪钥嘟蹬湫灵_。研究表明黃連和吳茱萸［4－5］的有效成分主要是生物堿類，黃連主要含有小檗堿、巴馬丁、黃連堿、藥根堿，其中小檗堿含量最高，有的可達(dá)10%。大部分是原小檗堿型生物堿，水溶性較好。藥典中左金膠囊的提取方法是用60%的乙醇回流提取，傳統(tǒng)以水提取為主。目前左金制劑的研究有丸劑、片劑、膠囊劑、緩釋微丸和滴丸，中醫(yī)認(rèn)為“丸者緩也，湯者蕩也”，即湯劑起效更快。

本文通過L9（34）表設(shè)計水提工藝正交實(shí)驗，優(yōu)選提取方案。水提正交實(shí)驗以提取時間、加水量、提取次數(shù)為考察因素，以鹽酸小檗堿含量、得膏率為評價指標(biāo)。本實(shí)驗為左金方顆粒的生產(chǎn)實(shí)踐提供實(shí)驗依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 材料 黃連（批號：110508763）為毛茛科植物三角葉黃連Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao.的干燥根莖；吳茱萸（批號：110408491）為蕓香科植物吳茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.的干燥近成熟果實(shí)，均購自廣東康美藥業(yè)股份有限公司，經(jīng)廣東藥學(xué)院中藥鑒定教研室李書淵教授鑒定。鹽酸小檗堿（中國藥品生物制品檢定所，批號：713－9003）。

1.2 試劑 乙腈為色譜純；鹽酸為優(yōu)級純；無水乙醇、磷酸二氫鉀等試劑均為分析純；二次蒸餾水、純化水（自制）。

1.3 儀器 島津LC－20AT型HPLC儀，包括SPD－20A紫外檢測器、CBM－10A信息收集器（日本島津公司）；Kromasil C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm，Dikma Technologies）；KQ－250B型超聲波清洗器（昆明市超聲儀器有限公司）；HH－4恒溫水浴鍋（江蘇金壇市宏華儀器廠）；電子萬用爐（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；TC－15型恒溫電熱套（海寧市華星儀器廠）；馬頭牌JYT－10藥物天平（上海醫(yī)用激光儀器廠）；DZX－1型真空干燥箱（上海福瑪實(shí)驗設(shè)備有限公司）；電子天平（AY120，SHIMADZU）；RE－52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠），ZF－20C紫外分析儀（上海寶山顧村電光儀器廠）；SHB－IV雙B循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

傳統(tǒng)復(fù)方湯劑以水為溶劑，左金丸中主要有效成分為生物堿，以季銨型生物堿居多，該類型的生物堿極性較大，故確定以水為提取溶劑。結(jié)合左金丸處方中藥材的理化性質(zhì)及生產(chǎn)上的適用性，選擇加熱回流提取。根據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)和資料，通過L9（34）正交表［6］設(shè)計三因素三水平（見表1）正交實(shí)驗，以提取時間（A）、加水量（B）和提取次數(shù)（C）為考察因素，優(yōu)選左金丸的提取工藝，以鹽酸小檗堿含量及得膏率作為評價指標(biāo)，最終獲得左金丸的最佳水提取工藝。

2.1 提取方法考察 精密稱取黃連（段）30g，吳茱萸5g在平行操作下，按L9（34）正交實(shí)驗設(shè)計表（見表2）安排回流提取實(shí)驗，過濾、濃縮，水浴蒸干，烘至恒重，作為供試品。精密稱定干浸膏，按下式計算得膏率：得膏率＝（干浸膏重量／藥材重量）×100%，并測定鹽酸小檗堿含量。

表1 水提取工藝條件因素水平表

2.2 鹽酸小檗堿含量測定 鹽酸小檗堿的含量測定參照2010年版《中國藥典》左金丸項下及附錄VID相關(guān)HPLC的規(guī)定。

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18（Dikma Technologies，250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈－0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液（磷酸調(diào)pH值至3.0）（30：70）；柱溫：室溫；流速：1mL／min；檢測波長：345nm。

2.2.2 溶液的制備 ①對照品溶液的制備：取鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，加鹽酸－甲醇（1：100）超聲處理30min，放冷，定容，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，制成每1mL含50μg的對照品溶液。②供試品溶液的制備：精密稱定干浸膏（相當(dāng)于生藥量120mg），置50mL容量瓶中，加鹽酸－甲醇（1：100）40mL，超聲處理30min，放冷，定容，過濾，取續(xù)濾液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。

2.2.3 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，依上述色譜條件測定，高效液相色譜圖見圖1。

2.3 水提結(jié)果與討論 由表2極差R值可知，影響得膏率及鹽酸小檗堿含量的因素順序為C（提取次數(shù)）＞A（提取時間）＞B（加水量）。以得膏率為評價指標(biāo)，最佳的組合是A3B3C3；以小檗堿含量為評價指標(biāo)，最佳的組合是A3B2C3；由表3的方差分析表可知，加水量的影響最小，以經(jīng)濟(jì)為原則并考慮藥材有一定的吸水性，加水量B取水平2，由此可得水提的最佳工藝是A3B2C3，即8倍量水提取3次，每次2小時。

2.4 水提驗證試驗 按最優(yōu)水提工藝提取左金方，按“3.1.1”和“3.1.2”項下測定得膏率和鹽酸小檗堿含量，各項指標(biāo)RSD均＜3.0%，表明該工藝穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，故8倍量水提取3次，每次2小時，作為左金方的最佳水提取工藝。驗證結(jié)果見表4。

表2 水提正交實(shí)驗表及實(shí)驗結(jié)果

K3得膏率22.0220.724.6120.26 R得膏率4.961.510.160.55 K1小檗堿25.7531.7117.3536.71 K2小檗堿31.1633.7335.8227.76 K3小檗堿40.6932.1744.4333.14 R小檗堿14.952.0227.078.95

表3 水提正交方差分析結(jié)果

表4 水提驗證試驗結(jié)果（n＝3）

3 討論

左金丸中黃連和吳茱萸分別屬于根莖和果實(shí)類的藥材，吸水性較小，故加水量水平定為6～10倍；質(zhì)地較堅實(shí)，故提取時間水平定為1～2h，提取次數(shù)水平定為1～3次。藥材經(jīng)過粉碎能加快提取效率，但是過濾效率會隨藥材粒度的減小而降低，所以藥材不宜粉碎得過細(xì)。

通過水提醇沉正交實(shí)驗，優(yōu)選出左金方提取精制最佳工藝是8倍量水，提取3次，每次2小時。經(jīng)驗證性試驗，最優(yōu)提取工藝穩(wěn)定。左金方含量測定沿用2010年版藥典左金丸項下的方法，稍作改良，結(jié)果藥典的方法可靠。為左金方顆粒的工業(yè)生產(chǎn)研究提供依據(jù)。

［1］孔維軍，趙艷玲，山麗梅，等.左金丸的研究進(jìn)展［J］.中國實(shí)驗方劑學(xué)雜志，2008，14（5）：73－77.

［2］Lina Xu，Yan Qi，Linlin Lv，et al.In vitro anti－proliferative effects of Zuojinwan on eight kinds of human cancer cell lines［R］.Springer Science＆Business Media Dordrecht，2013.

［3］鮑晨汝，潘宗海，年莉.左金丸的藥理作用及臨床研究進(jìn)展［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2010，44（11）：79－82.

［4］Xiu－Wei Yang，Jie Teng.Chemical constituents of the unripe fruits of Evodia rutaecarpa［J］.Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences，2007，（16），20 －23.

［5］文麗梅，馬超英，余德林，等.吳茱萸的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012，30（9）：1976－1977.

［6］騰海英，祝國強(qiáng)，黃平，等.正交試驗設(shè)計實(shí)例分析［J］.藥學(xué)服務(wù)與研究，2008，8（1）：75－76.

Study on the orthogonal extraction process of Zuo Jinfang

Cai YuhongCui1，Honghua2
1.Xinhui People＇s Hospital，Jiangmen，529100，China；2.School of Tranditional Chinese Medicine College of Chinese Traditional Medicine，Guangdong Phamaceutical University，Guangzhou，510006，China

ObjectiveOptimization of Zuojinfang water extraction process.MethodsUsing the orthogonal test of L9（34）to design water extraction and alcohol precipitation of orthogonal experiment，Water extraction process with extraction time，the amount of water，extraction time as factors，The content of berberine hydrochloride，extract yield as the evaluation index.ResultsThe optimum extraction technology was 8 times of water extraction of 2 hours，3 times of extraction.ConclusionThe water extraction process is simple and feasible，and good reproducibility.It can provide the experimental basis for the industrial production of Zuo Jinfang.

Zuo Jinfang；Water extraction process；Orthogonal

R284.2

A

1007－8517（2013）16－0024－03

2013.06.13）

蔡育紅（1968－），女，廣東江門，學(xué)士，副主任藥師，從事醫(yī)院藥學(xué)研究。

崔紅花（1976－），女（朝鮮族），博士，副教授，研究方向為中藥及中藥制劑的分析研究與新藥開發(fā)。E－mail：honghuacui＠163.com