何首烏二苯乙烯苷的提取工藝研究

薛天樂王 慶葉 敏

1.亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，安徽 亳州 236800；2.畢節(jié)學(xué)院，貴州 畢節(jié) 551700

何首烏二苯乙烯苷的提取工藝研究

薛天樂1王 慶1葉 敏2

1.亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，安徽 亳州 236800；2.畢節(jié)學(xué)院，貴州 畢節(jié) 551700

目的：優(yōu)選何首烏中二苯乙烯苷的提取工藝。方法：利用紫外分光光度法測(cè)定何首烏中二苯乙烯苷，運(yùn)用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以二苯乙烯苷得率為考察指標(biāo)，篩選最佳提取工藝。結(jié)果：何首烏中二苯乙烯苷的最佳提取工藝參數(shù)為：溫度70℃，提取時(shí)間為80min，料液比1：7，乙醇濃度40%。

何首烏；二苯乙烯苷；正交設(shè)計(jì)

何首烏為蓼科蓼屬多年生草本植物何首烏（Polygonum multiflorum Thunb.）的塊根，藤莖及葉也可供藥用［1－2］。其性微溫，味苦、甘、澀，具有補(bǔ)肝腎、益筋血、壯筋骨、烏須發(fā)之效［3］。現(xiàn)代藥理研究證明，何首烏及其所含的二苯乙烯苷類化合物具有降血脂、抗衰老、提高免疫功能、防治動(dòng)脈硬化等作用［4－5］。將測(cè)定二苯乙烯苷類化合物的含量作為何首烏及其制劑的質(zhì)控指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)采用正交設(shè)計(jì)方案，以二苯乙烯苷得率為指標(biāo)，優(yōu)選出何首烏乙醇回流提取的工藝參數(shù)，希望為何首烏的利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SPECORD50型紫外可見分光光度計(jì)（德國(guó)耶拿分析儀器股份公司），恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療器械五廠），賽多利斯BT－25－S電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

1.2 試藥 二苯乙烯苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物檢定所，批號(hào)：0844－200003），乙醇為分析純，蒸餾水自制。制何首烏購(gòu)自和義堂中藥材公司，由安徽中醫(yī)學(xué)院中藥鑒定教研室鑒定為何首烏（Polygonum multiflorum Thunb.）。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取5.8mg二苯乙烯苷標(biāo)準(zhǔn)品，用95%乙醇溶解，定容于25mL容量瓶中，搖勻作為對(duì)照品溶液。

2.2 何首烏樣品溶液的制備 稱取何首烏粉末10g置于250mL圓底燒瓶中，加60%的乙醇70mL，60℃水浴鍋中加熱1h。過濾，濾液置于250mL容量瓶中，用蒸餾水定容。再?gòu)闹腥?mL置于100mL的容量瓶中，用蒸餾水定容，作為何首烏樣品溶液。再吸取5.0mL置于50mL容量瓶中，用95%乙醇定容，得供試品溶液。

2.3 最大吸收波長(zhǎng)的確定 吸取2.5mL對(duì)照品溶液置于50mL容量瓶中，用95%乙醇定容，另取何首烏樣品溶液分別在300～400nm測(cè)定吸光度，二者吸收光譜基本一致，且都在324nm處有最大吸收，故選擇324nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.4 二苯乙烯苷穩(wěn)定性試驗(yàn) 取何首烏樣品溶液分別在0min、10min、20min、30min、40min、50min、60min、80min、100min、150min、200min時(shí)測(cè)定其吸光度。結(jié)果表明，二苯乙烯苷的吸光度在0min～60min間隨時(shí)間的延長(zhǎng)下降較快，但在60min后，RSD＝1.15%，能達(dá)到穩(wěn)定，故各樣品的測(cè)定時(shí)擇在配制后1h進(jìn)行。

2.5 二苯乙烯苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 從對(duì)照品溶液中準(zhǔn)確吸取0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL置于50mL容量瓶中，用95%乙醇定容，用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定吸光度，得到二苯乙烯苷標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，結(jié)果見圖1。

2.6 精密度的測(cè)定 從樣品液中平行吸取2mL 5份，分別置于10mL的容量瓶中，用95%乙醇定容。用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定吸光度。計(jì)算RSD＝1.53%，說明精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 分別取5份何首烏粉末各10g，精密稱定，按樣品溶液制備方法制備樣品溶液，測(cè)定吸光度值，計(jì)算吸光度值的RSD＝2.17%，表明重現(xiàn)性好。

2.8 回收率試驗(yàn) 平行取樣品溶液1.0ml于6個(gè)10mL的容量瓶中，分別向其中加入標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.2、0.2、0.3、0.3、0.4、0.4mL，用95%乙醇定容，用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算二苯乙烯苷的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果加樣回收率為99.27%，RSD為0.65%。2.9 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，采用正交試驗(yàn)方法對(duì)提取工藝參數(shù)影響較大的4個(gè)因素：溫度（A）、時(shí)間（B）、料液比（C）、乙醇濃度（D）4個(gè)因素進(jìn)行考察。用L9（34）正交表安排試驗(yàn)，因素水平和實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1、表2。

表1 正交試驗(yàn)因素水平

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果

由正交結(jié)果可看出各因素對(duì)何首烏中二苯乙烯苷提取率影響大小依次為：D＞A＞B＞C，結(jié)合各因素直觀分析K1、K2、K3的數(shù)據(jù)大小，確定本實(shí)驗(yàn)的最佳水平組合是A3B3C2D1，即最佳工藝條件為：提取溫度70℃，提取時(shí)間為80min，料液比1：7，乙醇濃度40%。

3 討論

二苯乙烯苷的提取效率隨時(shí)間不同而不同，當(dāng)提取達(dá)到一定時(shí)間時(shí)，有效成分濃度達(dá)到平衡，提取率最高。隨著時(shí)間的進(jìn)一步延長(zhǎng)，其提取率有所下降，可能是雜質(zhì)成分競(jìng)爭(zhēng)溶出的結(jié)果。但提取時(shí)間過短，二苯乙烯苷則不能從何首烏細(xì)胞中溶出，影響提取率。

何首烏有生首烏和制首烏之分，和生首烏性比，制首烏毒性較小，臨床多用，但有報(bào)道稱何首烏炮制后二苯乙烯苷含量下降［6－8］，有必要從工藝和化學(xué)分析、藥理方面進(jìn)一步研究制首烏的合理性和科學(xué)性，為何首烏炮制和質(zhì)量改進(jìn)提供新的科學(xué)依據(jù)，以便于更好地開發(fā)利用何首烏。

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Optimization of stilbeneglyco side extractingprocedure from Polygonum multiflorum Thunb

XUE Tian－le1，WANG Qing1，YE Min2
1.Bozhou vocational and technical College，Bozhu 236800，China；2.Bijie University，Bijie 551700，China

ObjectiveTo select the best extracting procedure for stilbeneglyco side from Polygonum multiflorum Thunb..MethodsThe orthogonal test was used to optimize the extracting procedure for total flavonoids from Polygonum multiflorum Thunb.，and the extracting procedure was selected with the content of rutin.ResultsThe total flavonoids extracting procedure was determined with 7 times of 40%aleohol extracting 80 minutes for two times.

Polygonum multif lorum Thunb.；stilbeneglyco side；Orthogonal test

R962

A

1007－8517（2013）16－0039－02

2013.06.05）

安徽省教育廳自然科學(xué)基金項(xiàng)目（KJ2012B112）。

薛天樂，男，碩士，研究方向：中藥活性成分提取分離。E－mail：84181713＠qq.com