HPLC測定維藥羅補甫克比日丸中丁香酚的含量

司馬義江.阿布都熱西提 木合塔爾.木明

新疆維吾爾自治區(qū)喀什地區(qū)藥品檢驗所，新疆 喀什 844000

HPLC測定維藥羅補甫克比日丸中丁香酚的含量

司馬義江.阿布都熱西提 木合塔爾.木明

新疆維吾爾自治區(qū)喀什地區(qū)藥品檢驗所，新疆 喀什 844000

目的：高效液相色譜法測定羅補甫克比日丸中丁香酚的含量。方法：甲醇－5%甲醇溶液（50∶50）；流速lmL／min；檢測波長225nm；柱溫：25℃；進樣量：l0μL；分析方法：外標法。結(jié)果：丁香酚在6.32～126.46μg／mL范圍內(nèi)線性良好（r＝0.9995），方法精密度為RSD為0.7%（n＝5），平均回收率為97.2%，RSD為1.3%（n＝6）。結(jié)論：該方法簡便、準確、測得結(jié)果穩(wěn)定重現(xiàn)性好，可作為該制劑中丁香酚的含量測定方法。

HPLC；丁香酚；羅補甫克比日丸；含量測定

羅補甫克比日丸是新疆維吾爾族名藥之一，主要由牛鞭、肉桂、苜蓿子、洋蔥子、丁香、花椒、胡蘿卜子、甜瓜子、巴丹仁、韭菜子等30味藥材組成。具有溫補腦腎，益心填精的功效。主要用于陽痿、抑郁、早泄、滑精、體虛、消瘦、神經(jīng)衰弱，屬部頒標準－維吾爾藥分冊收錄品種［2］。部頒標準僅采用定性鑒別試驗來控制該制劑的質(zhì)量，研究該成分的含量測定方法可以更好的反映和控制本品的內(nèi)在質(zhì)量。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 島津高效液相色譜系統(tǒng)：包括LC 20AT型雙泵，SIL 20AC型自動進樣器，SPD-M20A型PDA檢測器；島津uv－2450紫外可見分光光度計；BP211D型分析天平（德國Sartorius公司）

1.2試藥 丁香酚對照品（批號：110725－200711，中國藥品生物制品鑒定所）；羅補甫克比日丸（批號：20110830、20110836、20120419，和田維吾爾藥業(yè)有限責任公司）；甲醇為色譜純；水為重蒸餾水；所有色譜用試劑均用0.45μm微孔濾膜過濾，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：島津VP－ODS 250×4.6mm 5μm；流動相：甲醇－5%甲醇溶液（50∶50），流速lml／mi，檢測波長225 nm，柱溫25℃；進樣量：l0μL；分析方法：外標法［1］。

2.2 對照品溶液的配制 精密稱取丁香酚對照品，加流動相溶解制成1.2646mg／ml的溶液，精密量取5ml置50m l量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成126.46μg／ml的溶液，作為對照品溶液儲備液。

2.3 供試品溶液的配制 取樣品（批號：20110830、20110836、20120419），研碎，稱取1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入流動相50m l，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率50kHz）30min，擦干，放冷，再稱定重量，用流動相補足減失的重量，用微孔濾膜 （0. 45μm）濾過，取續(xù)濾液即得。

2.4 系統(tǒng)適應性試驗 分別按照2.2、2.3項下方法制備對照品溶液及供試品溶液，按2.1項下色譜條件，各進樣10μL，同時采集225nm光譜數(shù)據(jù)，結(jié)果顯示，供試品溶液相應色譜峰的光譜與對照品丁香酚一致。丁香酚酸對照品保留時間為11.2min，理論塔板數(shù)大于6000。

2.5 線性關系考察 精密量取對照品儲備液（126.46μg／ml）0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0ml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別取10μL，按“2.1”色譜條件下操作，以6次測定的峰面積平均值考察線性范圍。線性方程為：Y＝1.09×10－4X＋1.54（r＝0.9995），結(jié)果表明，丁香酚在線性范圍：6.32～126.46μg／m l范圍內(nèi)線性關系良好。

2.6 精密度實驗精密量取對照品溶液儲備液（126.46μg／ml）5ml置25ml量瓶中加流動相稀釋至刻度，搖勻，取10μL，重復進樣5次，以峰面積計算RSD（n＝5）為0.69%。證明本法有較高的精密度。

2.7 穩(wěn)定性實驗 取同一批號本品（20110836），按“2.6”方法配制溶液，分別于0、1、2、4、6h進樣，進樣量為10μL，測定丁香酚的峰面積，RSD為1.68%，表明樣品在6h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復性實驗 取同一批號本品（20110836），平行制備5份樣品，按樣品測定法測定，并對所得數(shù)據(jù)進行處理，結(jié)果測得丁香酚含量的RSD為1.28%。

2.9 加樣回收率實驗 精密量取已知含量的樣品 （批號：20110836，含量860.7μg／g）稱取1g，精密稱定，置50ml容量瓶中，精密加入丁香酚對照品溶液儲備液 （濃度為126.46μg／g）5ml，再加流動相適量密塞，超聲處理（功率250W，頻率50kHz）30min，放冷，加流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，作為加樣回收率樣品。同法制備6份加樣回收率樣品。按照樣品測定項下的方法測定含量，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率實驗結(jié)果（n＝6）

2.10 樣品測定 取3批樣品按“2.3”方法制備供試品溶液，按 “2.1”色譜條件下測定，按外標法計算沒食子酸含量。結(jié)果見表2。對照品和供試品色譜圖見圖1。

表2 羅補甫克比日丸中丁香酚的含量測定結(jié)果（n＝3）mg／mL

圖1 HPLC色譜圖

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 取丁香酚對照品適量，用流動相溶解并稀釋成0.1mg／ml溶液，用紫外可見分光光度計于200～400nm處進行掃描，從其紫外圖譜中可見其在225nm、280nm處有最大吸收，但在225nm處吸收比較強，故選擇225nm為檢測波長。

3.2 流動相的選擇 參考文獻報道的方法試驗，流動相用甲醇－水（65：35）［3］，甲醇－水（58：42）［4］，在該制劑中丁香酚的分離效果均不佳，通過不斷改變甲醇與水的比例及流速，選定甲醇－5%甲醇溶液（50∶50）及流速lml／min比較合適，分離度好且保留時間適宜。

本實驗測定了不同批號的羅補甫克比日丸，結(jié)果均能檢出丁香酚，但含量有所差異。本篇通過實驗研究，建立了羅補甫克比日丸中丁香酚含量的HPLC測定法，本法取樣量少，方法簡單，重現(xiàn)性好，結(jié)果準確，可作為質(zhì)量控制分析方法，為丁香酚的含量測定提供了有效的方法。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 （一部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄36.

［2］中國藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準 （維吾爾藥分冊）［M］.烏魯木齊：新疆科技衛(wèi)生出版社，1998：155.

［3］余小平.高效液相色譜法測定丁香中丁香酚的含量 ［J］.中國藥物分析雜志，2008，28（6）：975.

［4］吳軍俠，趙紅俠.高效液相色譜法測定蒙藥暖宮七味散中丁香酚含量［J］.中國藥業(yè)2010，19（5）：31.

Determ ination of Uygur Medicine Preparation Luobupukebiri Pills Solution of Eugenol by HPLC

Simayijiang Abudurexiti Muhetaer Muming
（Kashi Institute for Drog Control，Kashi Xinjiang 844000，China）

ObjectiveDetermination of Luobufukebiripills solution of Eugenol.Methods Amethanol，5%methanol（four Fifty－Fifty）；flow lmL／min；detection wavelength 225 nm column temperature：25℃；injection volume：l0μL；analysismethods：external standard method.Results：Eugenol.in 6.32～126.46μg／mL range of good linearity（r＝0.9995），method precision was RSD＝0.7%（n＝5），the average recovery was 97.2%，RSD was 1.3%（n＝6）.Conclusions Themethod is，accurate and measured results are stable and reproducible and can be used in thesimple preparation of Eugenolmethod.

HPLC；Eugenol；Luobufukebiri pills；content determination

R29

A

1007－8517（2013）20－0001－02

2013.08.16）

司馬義江.阿布都熱西提（1973－），男，大學本科，主管藥師。E－mail：simayi1102＠126.com