高效液相色譜法測定人參超微粉中人參皂苷的含量

王寶春++孫萍++丁桃紅++殷海霞

【摘要】皂苷類是人參的主要成分和藥效成分，采用高效液相色譜法可準確測定人參中各皂苷類成分，本文主要介紹采用液相色譜測定在超微粉碎技術下得到不同粒度的粉末中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1的含量。

【關鍵詞】高效液相色譜法，人參，人參皂昔

【中圖分類號】R284 【文獻標識碼】B 【文章編號】ISSN.2095-6681.2016.36..02

本品為五加科植物人參Pana：c ginseng C.A.Mey.的干燥根和根莖。它具有大補元氣，補脾益肺，生津養血，安神益智等之功效。臨床用于體虛欲脫，肺虛氣喘，肢冷脈微，脾虛食少，口渴少津，內熱消渴，氣血不足等[1]。皂苷類成分是人參的主要活性物質和藥效成分，因此提高它的提取率就可增強其生物利用率，以下將介紹同一批次的人參，在樣品經過振動磨型超微粉碎機粉碎后得到不同粒度的粉體的皂苷含量進行測量[2]。

1 實驗儀器與材料

1.1 實驗儀器

AEL-200電子天平（沈陽龍騰電子稱量儀器有限公司），AB204-N精密分析天平（METTLER TOLEDO），Agilent 1260型HPLC（Agilent Technologies），TKCD-1006超聲波清洗儀（南昌科昌達超聲波設備廠），Heal Force final Filter超純水機（上海浦東分析儀器設備廠），HH-4數顯恒溫水浴鍋（常州國華電器有限公司），SQW-25系列超微粉碎機（山東濟南三清易辰）。

1.2 實驗材料

人參皂苷標準品Rb1，Re，Rg1：中國藥品生物制品檢定所；乙腈（HPLC）。

1.3 樣品制備

同一批次人參（吉林省長白山）：人參粗粉（過40目篩）；人參樣品經過超微振動磨型得到粒徑分別為76.006～86.348 μm、29.963～30.025 μm、25.088～25.488 μm、22.163 μm。

1.4 對照品溶液的制備

取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rg1對照品適量，精密稱定，加甲醇定容；分別精密量取上述對照品溶液各1 mL，置于同一10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。每1 mL各含0.2 mg的混合溶液。

1.5 供試品溶液的制備

稱取5種人參樣品各約1 g，精密稱定，置索氏提取器中，精密加50 mL三氯甲烷置于磨口錐形瓶內，于水浴加熱80℃回流3 h，倒掉三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，將濾紙筒一并移入100 mL錐形瓶中，加50 mL水飽和正丁醇，密塞，放置過夜，經過30 min超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz），濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液25mL，置蒸發皿中蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移至5 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

1.6 色譜條件

色譜條件：色譜柱為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相C設為乙腈，流動相D設為水，按下表規定進行梯度洗脫；檢測波長為203 nm，柱溫為30°C，流速1 ml/min。理論塔板數按人參皂苷Rg1峰計算應不低于6000。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 uL，注入液相色譜儀，測定，即得，結果見各圖。

2 方法學考察

2.1 線性關系

分別精密吸取“1.4”項下對照品儲備液0.2 ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml置于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度。在上述“1.6”色譜條件下對對照品溶液進行液相分析和測定，記錄高效液相色譜圖并記錄各對照品峰面積，以對照品濃度（ug/ml）為橫坐標（x），以對照品峰面積為縱坐標（y），繪制對照品的標準曲線，并計算回歸方程。人參皂苷Rg1：y=5.8176x-26.169，R2=0.9995，、人參皂苷Rg1：y=6.2582x-20.610 ，R2=0.9996和人參皂苷Rg1：y=12.435x+10.380，R2=0.9998。結果表明范圍內濃度與峰面積具有良好的線性關系。

2.2 精密度試驗

選取同一濃度的混合對照品溶液，在“1.6”色譜條件下連續進樣6次，記錄峰面積，并分別計算峰面積的相對標準偏差RSD%值，結果如下：樣品中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1相對標準偏差RSD值分別為0.94%，0.57%，1.57%，，表明該方法穩定性良好。

2.3 穩定性實驗

取同一批人參供試品溶液1ml，精密量取，按“1.5”供試品制備方法制備樣品，分別于0、2、4、8、12、24h在“1.6”色譜條件下對供試品進行液相分析，記錄峰面積，并分別計算峰面積的相對標準偏差RSD%值，結果如下：0.23%，1.14%，0.59%說明供試品溶液在24h 內其化學性質有較好的的穩定性。

2.4 重復性實驗

取同一批人參供試品溶液1ml，精密量取，按“1.5”供試品制備方法制備6份樣品，按上述方法測定，以峰面積計算人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1的含量，并分別計算含量相對標準偏差RSD%值，結果如下：人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1相對標準偏差RSD值分別為：0.48%，0.53%，1.28%，表明該方法重復性良好。

2.5 回收率試驗

稱取0.5 g人參粗粉置于50 mL容量瓶中，加入“1.4”節中所配溶液1.0 mL，將其混勻后按“1.5”節所述處理方法進行提取。進樣測定Rg1，Re和Rb1，回收率分別為100.1%，98.3%，96.5%；RSD分別為1.32%，0.95%，1.26%，表明該方法回收率良好，方法可行。

3 樣品含測

按供試品溶液制備方法操作，對人參粗粉（過40目篩），超微粉碎粒徑分別為76.006～86.348 μm、29.963～30.025 μm、25.088～25.488 μm、22.163 μm的微粉進行人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1含量進行測定。結果如下。

3 小 結

超微粉碎在中藥范疇的應用初步已經具有規模，在單味藥生產中已經應用十分廣泛。因此超微技術在人參中的應用會越來越多，經試驗證明不同粒徑的人參微粉中，隨著粉體的粒徑越小，人參中皂苷的測定量明顯增大，本文中超微粉碎粒徑為22.163 μm的微粉中人參皂苷總含量為最高，比粗粉中皂苷測定量高出55%。超微粉碎粒徑為22.163 μm時，皂苷的測定量與粗粉相近，繼續減小粒徑，皂苷的溶出率又增加。超微粉碎粒徑為25.088～25.488 μm與超微粉碎粒徑為22.163 μm的微粉中皂苷的測定量增長不大，因此，出于節約時間節省物料考慮，超微粉碎粒徑為25.088～25.488μm的微粉是最佳。

參考文獻

[1] 中華人民共和國藥典委員會. 中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2015：8-9.

[2] 張 晶.超微粉碎對人參中皂苷測定量的影響[J].食品科學. 2009，30（18）： 96-97.

[3] 何 翌，郭 琪，杜曉敏.中藥細胞級微粉碎對體內吸收的影響[J].中成藥，1999，21（11）：601-602.

本文編輯：李 豆