失笑散顆粒對實驗性心肌缺血大鼠心肌組織NO及eNOS的影響

靳剛強徐 敏李福雷尹 航于永軍

（1 河北省滄州市人民醫(yī)院，河北 滄州 061000；2 河北省滄州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，河北 滄州 061000）

失笑散顆粒對實驗性心肌缺血大鼠心肌組織NO及eNOS的影響

靳剛強1徐 敏1李福雷1尹 航1于永軍2

（1 河北省滄州市人民醫(yī)院，河北 滄州 061000；2 河北省滄州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，河北 滄州 061000）

目的觀察失笑散顆粒對實驗性心肌缺血大鼠心肌組織NO及eNOS的影響。方法將心電圖正常的Wistar健康大鼠隨機分成空白對照組、模型對照組、失笑散顆粒低劑量組、中劑量組、高劑量組和陽性對照組（復(fù)方丹參滴丸），連續(xù)灌胃給藥7d，從第3日起除正常對照組外，其余各組均于給藥后1h皮下注射異丙腎上腺素5mg/（kg·d），連續(xù)5d，時間間隔為24h，正常對照組給予等量生理鹽水皮下注射，末次注射iso 2h后取心肌組織測定NO、eNOS的活性。結(jié)果與空白對照組相比，模型對照組大鼠的eNOS活力、總NOS活力明顯提高，NO濃度明顯降低，P＜0.05；與模型對照組相比，失笑散顆粒低劑量組大鼠eNOS活力、總NOS活力降低，NO濃度提高，P＞0.05，差異不顯著，無統(tǒng)計學(xué)意義，而中劑量組及高劑量組、陽性對照組大鼠血清eNOS活力、總NOS活力明顯減輕，NO濃度明顯提高，P＜0.05；失笑散顆粒中劑量組及高劑量組與陽性對照組比較，eNOS活力、總NOS活力降低程度，NO濃度提高程度相當。結(jié)論失笑散顆粒能有效地升高心肌組織NO 濃度，抑制eNOS及總NOS活力系數(shù)，清除自由基，減輕心肌損傷。

實驗性心肌缺血；失笑散；異丙腎上腺素；NO；eNOS

失笑散顆粒是出自于宋·《太平惠民和劑局方》，由蒲黃和五靈脂等份經(jīng)過一系列顆粒制作工藝而制成顆粒，具有活血祛瘀，散結(jié)止痛的功效。其蒲黃能夠提高心肌及腦對缺氧的耐受性或降低心、腦等組織的耗氧量，還可使缺氧心、肝超氧化物歧化酶恢復(fù)或接近正常水平，對心腦缺氧有保護作用。五靈脂能夠顯著降低大鼠乳鼠體外培養(yǎng)心肌細胞的耗氧量，降低血管阻力。經(jīng)過大量的臨床研究，失笑散能有效地改善心電圖異常，抗動脈粥樣硬化，抗心肌缺血，改善心肌供血能力[1]。本文通過觀察實驗性心肌缺血大鼠心肌組織NO及eNOS的影響，現(xiàn)將工作總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 材料

動物：雄性Wistar健康大鼠，體質(zhì)量180～220g，由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號：DK0608-0062。儀器：XDH-B型心電圖機（上海醫(yī)用電子儀器廠）；Humalyzer 2000型半自動生化分析儀（美國）；藥物：異丙腎上腺素（iso）為上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)，批號20120706；復(fù)方丹參滴丸為天津天士力制藥股份有限公司產(chǎn)品，批號20120608；藥物：失笑散顆粒（蒲黃，五靈脂等份自制）。

1.2 分組及給藥處理

將心電圖正常的大鼠隨機分為6組，每組10只，共60只。空白對照組給等容量生理鹽水，模型對照組給等容量生理鹽水，低劑量組8g/kg，中劑量組12g/kg，高劑量組16g/kg，陽性對照組81.0mg/kg復(fù)方丹參滴丸，各組均連續(xù)灌胃給藥7d。從第3日起除正常對照組外，其余各組均于給藥后1h皮下注射異丙腎上腺素5mg/kg.d，連續(xù)5d，時間間隔為24h，正常對照組給予等量生理鹽水皮下注射。

1.3 觀察指標

末次注射iso 2h后取心肌組織測定NO、eNOS的活性：取左心房前壁心肌組織，0.3g，加入2.7mL 0.9%生理鹽水（40℃），制成勻漿組織，4000r/min，10℃，離心20min，分離上清液，測定NO 濃度、eNOS 活力及總NOS 活力（化學(xué)比色法）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計處理及分析，計量資料以（χ—±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0.05差異顯著，認為具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

與空白對照組相比，模型對照組大鼠的eNOS活力、總NOS活力明顯提高，NO濃度明顯降低，P＜0.05，說明動物造模很成功；與模型對照組相比，失笑散顆粒低劑量組大鼠eNOS活力、總NOS活力降低，NO濃度提高，P＞0.05，差異不顯著，無統(tǒng)計學(xué)意義，而中劑量組及高劑量組、陽性對照組大鼠血清eNOS活力、總NOS活力明顯減輕，NO濃度明顯提高，P＜0.05，說明心肌缺血大鼠心肌組織eNOS活力及總NOS活力增強了，NO濃度降低，而失笑散顆粒能抑制eNOS活力及總NOS活力，提高NO濃度；失笑散顆粒中劑量組及高劑量組與陽性對照組比較，eNOS活力、總NOS活力降低程度，NO濃度提高程度相當，效果相當。見表1。

表1 六組大鼠血清 eNOS活力、總NOS活力及NO濃度變化（χ—±s）

3 討 論

目前，大量研究表明心肌缺血性損傷與自由基的大量產(chǎn)生、細胞內(nèi)鈣離子的超載、心肌能量代謝紊亂、內(nèi)分泌細胞因子增多等有直接的關(guān)系[2]。自由基數(shù)量的增多，造成心肌細胞組織脂質(zhì)體數(shù)量的大增，改變了心肌細胞膜的結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致膜的性質(zhì)發(fā)生異常，對各種物質(zhì)的通透性增大，大量因子釋放到血清中[3-4]。

失笑散顆粒能夠減輕心肌缺血程度及范圍，降低血清心肌酶水平，維持細胞膜的完整性，減少自由基對心肌細胞膜的損害，起到保護受損心肌細胞的作用改善冠脈循環(huán)，提高心肌氧的供應(yīng)，調(diào)節(jié)心肌氧的供需平衡，減輕心肌缺血性損傷[5]。

本實驗通過觀察失笑散顆粒對心肌缺血大鼠心肌組織 eNOS活性、總NOS 活性及NO 濃度的變化，探討失笑散顆粒對大鼠心肌缺血損傷的保護機制。本文研究顯示，與模型對照組相比，失笑散顆粒中劑量組及高劑量組、陽性對照組大鼠血清eNOS活力、總NOS活力明顯減輕，NO濃度明顯提高，P＜0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義，說明心肌缺血大鼠心肌組織eNOS 活力及總NOS活力增強了，NO濃度降低，而失笑散顆粒能抑制eNOS 活力及總NOS活力，提高NO濃度，減少氧化反應(yīng)，降低對心肌缺血組織的損傷。

綜上所述，失笑散顆粒對實驗性心肌缺血大鼠心肌缺血有明顯的保護作用，對自由基有較強的清除作用，減少自由基對心肌細胞膜的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，有效地升高心肌組織NO 濃度，抑制eNOS及總NOS活力系數(shù)，清除自由基，能有效地減輕心肌損傷，值得進一步研究與應(yīng)用。

[1] 陳瑩,周波,路秀云,等.全真一氣湯合并失笑散治療冠心病穩(wěn)定型心絞痛的臨床觀察[J].中醫(yī)藥學(xué)報,2012,40(1)∶108-110.

[2] 吳克芹,牟艷玲,李杰.甲胺鳶尾素對異丙腎上腺素致大鼠心肌損傷的影響[J].中藥藥理與臨床,2011,27(3)∶20-22.

[3] 曹康,陳光亮,李莉.復(fù)方銀杏丹參顆粒對異丙腎上腺素致心肌損傷的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2007,13(4)∶51-53.

[4] 祝光禮,周凡,陳鐵龍.黃芪失笑散抗心肌缺血的實驗研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2007,25(11)∶2232-2234.

[5] 任雪梅,曹志然.加味失笑散治療冠心病心絞痛的臨床應(yīng)用及作用機理研究進展[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志,2010,5(12)∶1084-1089.

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1671-8194（2013）13-0072-02