TRAF4 mRNA在系統性紅斑狼瘡患者外周血白細胞中的表達

賀 丹柴華旗

（1 常熟市第二人民醫院腎內科，江蘇 常熟 215500；2 蘇州大學附屬第一醫院腎內科，江蘇 蘇州 215000）

TRAF4 mRNA在系統性紅斑狼瘡患者外周血白細胞中的表達

賀 丹1柴華旗2

（1 常熟市第二人民醫院腎內科，江蘇 常熟 215500；2 蘇州大學附屬第一醫院腎內科，江蘇 蘇州 215000）

目的探討腫瘤壞死因子受體相關因子4（TRAF4）mRNA在系統性紅斑狼瘡（SLE）患者外周血白細胞中的表達是否存在異常。方法收集2010年8月至20012年9月我院腎內科、風濕科院住院SLE女性患者25例，所有患者均符合1982年美國風濕病學會SLE診斷標準，SLEDAI評分在4～26分之間；以健康獻血者15例為對照組。取外周靜脈血，分離外周血白細胞，提取細胞總RNA，以β肌動蛋白（β-actin）為內參照，采用逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）技術半定量檢測TRAF4 mRNA在外周血白細胞中的相對表達水平。結果SLE患者外周血白細胞TRAF4 mRNA的表達低于正常人（P＜0.05）。結論TRAF4 mRNA可能參與了SLE的發生發展。

系統性紅斑狼瘡；TRAF4；白細胞；RT-PCR

系統性紅斑狼瘡(SLE)是一種典型的自身免疫性疾病，存在多種免疫學異常[1]。有文獻報道約50%的SLE患者發生中性粒細胞凋亡增加，致自身抗原增加，與疾病的活動程度正相關，其發生機制與Fas/ FasL復合物有關[2]，而TRAF4過表達可以抑制由Fas介導的細胞凋亡。TRAF4是TRAFs家族成員之一，在正常人外周血中只有粒細胞和單核細胞表達TRAF4，所以我們選用外周血白細胞作為研究對象分析SLE患者TRAF4 mRNA的表達是否存在異常。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2010年8月至20012年9月我院腎內科住院SLE女性患者25例，年齡14～56歲，所有患者均符合1982年美國風濕病學會SLE診斷標準，采用Bombardier等的SLE活動指數[3]（SLEDAI）評價疾病活動程度，患者評分在4～26分之間。以健康獻血者15例為對照組，均為女性，18～42歲。

1.2 治療方法

取外周靜脈血，EDTAK2抗凝，離心后獲得白細胞；采用Trizol總RNA一步法提取細胞總RNA；用M-MLV逆轉錄酶合成第一鏈cDNA；TRAF4、β-actin引物設計、合成由上海生物工程公司設計并合成。TRAF4引物序列為ACACCATCCAGAGCCACCAG（sense）和ACCACTGCCATTGCCATTGAG（antisense），產物大小為461bp；β-actin：GGGACCTGACTGACTACCTC（sense）和GCATTTGCGGTGGACGATGG（antisense）。產物大小為575bp；每組均以β-actin作內參照，分管進行擴增；取PCR擴增產物行瓊脂糖凝膠電泳，在凝膠成像儀（VILBERLOURMAT）上對產物定量掃描，參照電泳Marker的條帶位置判斷目的條帶。以目的基因與內對照β-actin的掃描值之比為該基因相對表達水平。擴增PCR產物送上海基康生物技術有限公司進行測序。

1.3 觀察指標

觀察SLE患者外周血白細胞中TRAF4mRNA的表達是否存在異常。

1.4 統計學分析

計量資料用均數±標準差描述，組間比較采用t檢驗。結果以P＜0.05為顯著統計學差異。采用SPSS12.0軟件進行分析。

2 結 果

TRAF4 PCR擴增產物經上海基康生物技術有限公司測序，結果與原基因序列符合。SLE患者外周血白細胞TRAF4 mRNA表達見圖1。

圖1 SLE患者外周血白細胞TRAF4 mRNA表達（1-4：SLE患者；5-8：正常對照；M：Marker）

本文對SLE患者以及正常對照組外周血白細胞中TRAF4 mRNA的表達進行了半定量RT-PCR分析，用β-actin為內參照，結果以百分數形式出現，兩組TRAF4 mRNA的表達分別為（30.01±19.05）%和（45.58±11.65）%，SLE患者TRAF4 mRNA表達低于正常對照組，P=0.008，兩組之間存在顯著差異（P＜0.05）。見表1。

表1 SLE患者外周血白細胞TRAF4 mRNA表達量(χ—±s)

3 討 論

凋亡異常及凋亡細胞清除障礙在SLE的發病機制中起重要作用。SLE患者外周血粒細胞、淋巴細胞、單核細胞凋亡增多，加上凋亡細胞清除障礙，使細胞內物質釋放入血，成為自身抗原[4]，促進自身反應性淋巴細胞激活、抗自身抗體產生和免疫復合物形成[1]，從而促進SLE的發生發展。

TRAF4是TRAFs家族成員之一，最早是1995年Regnier等在乳腺癌上皮細胞的細胞核中發現的。在人外周血粒細胞TRAF4表達強陽性，單核細胞陽性[5]，在胚胎發育過程中起重要的生物學作用。

Fas在免疫系統中表達廣泛，介導外周血單核細胞、淋巴細胞的凋亡增加[4]，在SLE的發病中起重要作用。而TRAF4過表達能抑制由Fas誘導的細胞凋亡，具有抗凋亡作用[6]。此外，TRAF4能擴大糖皮質激素誘導的TNFR（GITR）介導的NF-κB活化，提高T細胞的活性，在調節由自身抗原、外來抗原觸發的免疫反應中起重要作用；在體內或體外使用抗GITR的抗體處理后可以誘發自身免疫性疾病的發生[7]。因此TRAF4mRNA表達下調，可能通過抑制GITR的信號轉導，參與SLE等自身免疫性疾病的發生發展。綜上所述，TRAF4mRNA在SLE患者外周血白細胞中表達下調，可能通過促進Fas介導的外周血粒細胞和單核細胞凋亡增加，導致自身抗原增加，免疫復合物形成以及自身反應性淋巴細胞激活等，從而參與SLE的發生和發展。

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1671-8194（2013）17-0126-02