湖南省不同產(chǎn)地絞股藍(lán)藥材中總皂苷含量測定

陳 丹 李 柯 吳梅青 劉捷頻 李 君

1.湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)教研組，湖南 湘潭 411102;2.湖南省中醫(yī)藥研究院，湖南 長沙 410006;3.中藥新藥研究與開發(fā)湖南省重點實驗室，湖南 長沙 410013

絞股藍(lán)［1－3］為葫蘆科多年生草本植物 Gynostemma pentaphylla(Thunb．)Makino的根莖或全草，味甘、苦，性寒，有益氣健脾、化痰止咳、清熱解毒之功效。現(xiàn)代研究表明絞股藍(lán)中含有皂苷、氨基酸、黃酮、多糖和多種無機(jī)元素等，其中皂苷有80多種，6種與人參皂苷相似，絞股藍(lán)的提取物具有抗疲勞、抗缺氧、免疫調(diào)節(jié)、降血脂、降血糖、保肝、抗?jié)兊茸饔谩＝g股藍(lán)作為五加科以外的唯一含有與人參皂苷相似結(jié)構(gòu)的有效成分的植物，因其所含的化學(xué)成份較多，藥理活性廣泛，使其不僅可以供藥用，還可以制成保健滋補(bǔ)品。湖南省有許多地方如綏寧、平江、瀏陽、桑植都產(chǎn)絞股藍(lán)，但質(zhì)量差別很大，目前湖南省還沒有一個絞股藍(lán)GAP種植基地，加上對藥材質(zhì)量監(jiān)控力度不夠健全，使絞股藍(lán)藥材質(zhì)量得不到保障，嚴(yán)重的影響了絞股藍(lán)及其產(chǎn)品的療效，制約了絞股藍(lán)的開發(fā)利用。本文建立了用紫外分光光度法測定絞股藍(lán)藥材中皂苷的含量，同時，測定了不同產(chǎn)地絞股藍(lán)藥材皂苷的含量。

1 儀器、試劑與藥材

UV－2450紫外分光光度計 (日本島津);HX－06型超聲波清洗器 (武漢恒信世紀(jì)科技有限公司);AE－240型電子天平［梅特勒－托利多 (上海)有限公司］。人參皂苷Re購于中國藥品生物制品檢定研究院，批號:110754－200320，其它試劑均為分析純 (湖南匯虹試劑有限公司提供)。絞股藍(lán)藥材來源于湖南省瀏陽、平江、桑植、綏寧，經(jīng)湖南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所生藥研究室鑒定為葫蘆科植物絞股藍(lán) Gynostema pentaphyllum(Thunb．)Makino的根莖或全草。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱定人參皂苷Re對照品11.42mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備 取本品粉末 (過三號篩)約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，靜置過夜，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，離心，取上清液通過D101型大孔樹脂柱 (內(nèi)徑1.5cm，柱高15cm)，用水洗至流出液無色，再用乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇5ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液［4－5］。

2.3 最大吸收波長的確定 將顯色后的對照品和各供試品溶液于紫外分光光度計400～600nm波長范圍內(nèi)掃描，對照品和供試品在550nm附近均有最大吸收。結(jié)果見圖1、圖2。

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液 (人參皂苷Re C=0.2284mg/ml)0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml分別置10ml具塞試管中，60℃揮干溶劑，分別精密加入5%香草醛冰乙酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，混勻，密塞，置60℃水浴中保溫15min，取出，冷卻，加冰醋酸5ml，混勻，以空白試劑為對照，在550nm處測定吸光度。以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程:人參皂苷Re Y=0.0137X－0.0027，r=0.9991。結(jié)果表明人參皂苷 Re在7.61～45.68μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗 取絞股藍(lán)藥材按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液。精密吸取0.6ml，置10ml具塞試管中，按2.4“線性關(guān)系考察”項下進(jìn)行操作，在同一條件下連續(xù)測得6次吸光度RSD為1.05%。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取2.5項下的供試品溶液，精密吸取0.6ml，置10ml具塞試管中，按2.4“線性關(guān)系考察”項下進(jìn)行操作，分別在0.0、0.5、1.0.1.5.2.0.4.0h測得吸光度，RSD為1.21%。

2.7 重復(fù)性試驗 取同一批藥材6份，每份2.0g，精密稱定，按2.2“供試品溶液的制備”制成供試品溶液，精密吸取各供試品溶液0.6ml，按2.4“線性關(guān)系考察”項下進(jìn)行操作，測定吸光度，計算其含量，結(jié)果RSD為2.3%。

2.8 回收率試驗 稱取6份已知含量的絞股藍(lán)藥材0.1g，精密稱定，每份加入人參皂苷Re約2mg，按2.2“供試品溶液制備”項下的方法進(jìn)行制備，依2.4“線性關(guān)系考察”項下測定。計算回收率，人參皂苷 Re平均回收率為96.97%，RSD為1.43%。結(jié)果見表1。

表1 人參皂苷Re回收率測定結(jié)果表

2.9 不同產(chǎn)地絞股藍(lán)含量測定 分別取各產(chǎn)地絞股藍(lán)約2.0g，精密稱定，平行2份，按2.2“供試品溶液的制備”方法制備成供試液，分別精密吸取0.6ml，加入具塞試管中，揮干溶劑，按照2.4“線性關(guān)系考察”項下方法測定吸光度，計算各產(chǎn)地絞股藍(lán)藥材中皂苷含量 (以人參皂苷Re計)，結(jié)果見表2。

表2 不同產(chǎn)地絞股藍(lán)中皂苷含量測定結(jié)果

3.0 不同采收月份絞股藍(lán)含量測定 取綏寧產(chǎn)不同采收月份絞股藍(lán)約2.0g，精密稱定，平行2份，按2.2“供試品溶液的制備”方法制備成供試液，分別精密吸取0.6ml，加入具塞試管中，揮干溶劑，按照2.4“線性關(guān)系考察”項下方法測定吸光度，計算不同月份絞股藍(lán)藥材中皂苷含量(以人參皂苷Re計)，結(jié)果見表3。

表3 不同采收月份絞股藍(lán)中皂苷含量測定結(jié)果

3 討論

綜上所述，本測定方法準(zhǔn)確、可行，可用于絞股藍(lán)中總皂苷的含量測定。為減少誤差，稱樣、加入顯色劑等操作均應(yīng)由專人操作。

試驗結(jié)果:就產(chǎn)地而言，所測樣品中湖南綏寧產(chǎn)絞股藍(lán)中總皂苷含量 (2.43%)最高;就采收月份而言，7月采收的絞股藍(lán)中總皂苷含量 (2.59%)最高。

［1］何顯忠，邱江沁．絞股藍(lán)化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展［J］．中國中醫(yī)藥信息雜，2008，5(增刊):84．

［2］孫萬森，吳喜利，喬成林，等．絞股藍(lán)總皂苷防治多臟器損傷的藥理研究進(jìn)展［J］．中成藥報，2009，30(2):241．

［3］李金青，楊洪軍．絞股藍(lán)的藥理作用研究進(jìn)展［J］．中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2009，3(7):189－190．

［4］黃敏珠，王棟，尹忠臣，等．紫外分光光度法測定絞股藍(lán)中絞股藍(lán)總苷的含量［J］．中國中藥雜志，2010，35(18):2410－2411．

［5］李風(fēng)華，陳素紅，呂圭源．7個不同產(chǎn)地絞股藍(lán)皂苷含量測定［J］．中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012，30(4):887－888．