正交實驗法優化龍眼葉提取工藝

梁 潔 柳賢福 孫正伊 呂松林 翁 翎

廣西中醫藥大學，廣西 南寧 530001

龍眼葉藥材為無患子科龍眼屬龍眼Dimocarpus longan Lour．的葉或嫩芽，具有發表清熱，利濕解毒之功效，主治感冒發熱，瘧疾，疔瘡，濕疹［1］。龍眼葉主要含有鞣質、酚酸類、黃酮類及揮發油等成分［2－4］，其中黃酮類化合物是龍眼葉的主要化學成分。本實驗通過正交設計對龍眼葉超聲提取工藝進行了研究，以槲皮素的含量為考察指標，采用高效液相色譜法進行測定，考察了甲醇濃度、溶劑用量和提取時間對提取效果的影響，優選出最佳提取工藝，為龍眼葉的提取工藝研究提供試驗參考。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀 (美國Agilent公司);LG 16－W型高速離心機 (北京醫用離心機廠);B3500S－MT超聲清洗儀 (上海必能信超聲有限公司);Millipore Simplicity－185超純水儀 (美國密里博公司);BP211D電子分析天平 (德國賽多利斯)。

槲皮素對照品 (中國藥品生物制品檢定所，批號100081－200406，供含量測定用);甲醇 (色譜純，美國Fisher科學世界公司);水為超純水。龍眼葉采自廣西賀州市，經廣西中醫藥大學中藥鑒定教研室滕建北副教授鑒定為Dimocarpus longan Lour．的葉;實驗所用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 槲皮素含量測定方法

2.1.1 色譜條件 色譜柱:Hypersil C18柱 (4.6mm×250mm，5μm);流動相:甲醇－0.2%磷酸 (47∶53);檢測波長為360nm;流速:1.0ml·min－1。柱溫:30℃;進樣量為10 μl。槲皮素理論板數≥5000。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱定經五氧化二磷減壓干燥36h槲皮素對照品9.00mg置25ml量瓶中，加甲醇適量使溶解并定容至刻度，搖勻，即得濃度為0.36mg·ml－1的槲皮素對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 取龍眼葉藥材粉末約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇－鹽酸 (4∶1)混合溶液20ml，密塞，稱定重量，超聲提取50min，放冷，再稱定重量，用甲醇－鹽酸 (4∶1)混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.2 龍眼葉提取正交試驗設計與結果

2.2.1 正交試驗的設計 選擇甲醇體積濃度 (A)、甲醇用量 (B)、提取時間 (C)3因素為考察因素，每個因素選3個水平，以L9(34)正交設計表安排試驗，以龍眼葉中槲皮素的含量為評價指標。因素水平表見表1，正交試驗結果見表2，方差分析結果見表3。

表1 因素水平表

表2 L9(34)正交試驗結果表

表3 方差分析表

2.2.2 結果 因素極差R越大，說明因素的水平改變對實驗結果影響也越大。由實驗結果的直觀分析及方差分析可知，影響槲皮素提取效果的因素大小順序為A＞B＞C，即甲醇濃度＞甲醇用量＞提取時間，其中甲醇濃度對試驗結果有顯著性影響，根據實驗結果確定最佳提取方法為A3B1C3，即用20ml的100%甲醇－鹽酸 (4∶1)超聲處理50min。

2.2.3 驗證實驗 為了進一步考察優選工藝的可靠性和穩定性，取3份龍眼葉藥材粉末1g按上述最佳工藝條件A3B1C3進行驗證試驗，按“2.1.1”項下所述方法進行測定，結果表明槲皮素含量為 3.6545mg·g－1，RSD=0.72%，與正交試驗最佳方案一致，說明優化是成功的。

3 討論

超聲提取主要是利用超聲波產生的強烈震動和空化效應加速植物細胞內物質的釋放、擴散并溶入溶劑中，同時可保持被提取物質的結構和生物活性不發生變化［5］。目前，超聲提取法已廣泛應用于多糖、苷類、生物堿、黃酮類等化合物的提取，并已顯現出明顯的優勢。

本實驗以槲皮素的含量為指標，通過正交試驗確定了龍眼葉超聲提取的最佳提取工藝，為龍眼葉的純化工藝奠定基礎。

［1］國家中醫藥管理局《中華本草》編委會．中華本草 (13卷)［M］．上海:上海科學技術出版社，1999:112．

［2］江蘇新醫學院．中藥大辭典 (第2版)(上冊)［M］．上海:上海科學技術出版社，2006:879．

［3］梁潔，滕建北，柳賢福，等．龍眼葉化學成分預試研究［J］．中國民族民間醫藥，2010，19(4):142－143．

［4］梁潔，王雯慧，甄漢深，等．廣西產龍眼葉及花揮發油成分氣質聯用分析［J］．中國實驗方劑學雜志，2010:16(9):52－55．

［5］邱天堯，王秀芬，姚中華．超聲技術在中草藥成分提取中的應用．黑龍江醫藥，2007，20(5):455－456．