止咳平喘糖漿中麻黃堿的含量測定方法研究

馮 旭 覃潔萍 梁臣艷 牛晉英 郭 蕊 王 卉

廣西中醫藥大學，廣西 南寧 530001

止咳平喘糖漿是由麻黃、石膏、苦杏仁等十一味中藥制成的一個成方制劑，收載于國家中藥部頒標準4部，具有清熱宣肺，止咳平喘等功效，用于風熱感冒引起的咳喘，氣粗痰多，周身不適，咽痛。止咳平喘糖漿的君藥為麻黃，原標準中無含量測定項。麻黃藥材中主要含麻黃堿等生物堿類化合物［1］。目前麻黃堿的含量測定應用較廣泛的是高效液相色譜法。其藥材及制劑含量測定時供試品的處理方法主要有萃取法［2－4］和蒸餾法［5－7］。萃取法操作復雜，所用的萃取液乙醚為麻醉藥品，易發生中毒且污染環境;蒸餾法則方便簡單，易于操作，提取效率高，但不同文獻報道的蒸餾條件不一。為了優化止咳平喘糖漿中麻黃堿含量測定的供試品溶液制備方法，本實驗采用正交試驗法，考察了不同氫氧化鈉濃度、氫氧化鈉用量、氯化鈉用量及蒸餾液接收量對止咳平喘糖漿中麻黃堿含量測定結果的影響，建立了制劑中麻黃堿的含量測定方法，現將實驗結果報道如下。

1 儀器與試藥

美國Agilent 1100 Series高效液相色譜儀:四元泵，在線脫氣機，自動進樣器 (G1313A)，柱溫箱，可變波長檢測器 (VWD)。

超純水系統 (MILLIPORE)。

乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為高純水。

麻黃堿對照品 (中國藥品生物品檢定所，供含量測定用，批號:171241－200303)。

止咳平喘糖漿樣品及陰性樣品由廣西三金藥業生物制品有限公司提供。

陰性樣品為按處方比例及制劑工藝制備的缺麻黃的空白對照樣品。

2 方法與結果

2.1 麻黃堿測定條件

2.1.1 色譜條件 美國Phenomenex公司Luna 5μ C18(2)柱 (4.6mmID×250mm);

流動相:乙腈:0.1%磷酸 (含0.1%三乙胺) (3:97)，流速:1ml/min，柱溫:30℃，檢測波長:210nm。進樣量:20μl。理論板數以麻黃堿峰計不低于6000。

按上述色譜條件分別對對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液進行分析，分離效果較好，在與對照品出峰相應的保留時間未出現雜質峰，可見其它成分對主成分測定無干擾，說明本法具有專屬性。

2.1.2 對照品溶液的配制 精密稱取鹽酸麻黃堿對照品12.3mg，加入流動相制成每1ml含0.123mg的溶液即得。

2.1.3 供試品及陰性樣品溶液的制備 精密量取本品50ml，加入氯化鈉15g，3mol/l氫氧化鈉溶液100ml，蒸餾，用預先盛有0.1mol/l鹽酸溶液10ml的100ml量瓶收集蒸餾液近95ml，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜 (0.45μm)濾過，取續濾液即得。

2.1.4 線性關系的考察 分別精密吸取對照品儲備液0.50、1.25、2.50、5.00、7.50ml，置 10ml量瓶中，加0.1mol/l鹽酸溶液并稀釋至刻度，即得濃度分別為6.15、15.38、30.75、61.50、92.25μg/ml的對照品溶液。分別吸取上述標準溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定麻黃堿峰面積。以峰面積 (A)為縱坐標，以含量 (C)為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程為 A=38.924C+3.167，γ=0.9999(n=5)，線性范圍為 6.15 ～92.25μg/ml。

2.1.5 精密度試驗 精密吸取上述濃度為15.375μg/ml的對照品溶液20μl，連續進樣6次，測定麻黃堿峰面積，得平均峰面積為590.8，RSD為0.18%(n=6)，說明本法精密度良好。

2.1.6 穩定性試驗 精密吸取同一瓶供試品溶液20μl，注入色譜儀，在12小時內測定麻黃堿的峰面積，共測6次，得平均峰面積為595.6，RSD為0.81%(n=6)，表明樣品在12個小時內穩定。

2.1.7 重復性試驗 按供試品溶液制備項下的方法平行制備供試品溶液6份，在同等色譜條件下測定麻黃堿峰面積，計算其含量，RSD為0.69% (n=6)，說明本法重現性良好。

2.1.8 回收率試驗 精密量取同批已知濃度止咳平喘糖漿25.00ml(麻黃堿含量為30.85μg/ml)，置圓底燒瓶中，再精密吸取對照品儲備液10.00ml(濃度61.5mg/ml)，以下按供試品制備項下的方法制備，進樣20μl，同法測定 (n=6)。結果見表1，說明本法準確度良好。

表1 麻黃堿回收率試驗結果

2.2 正交實驗優選麻黃堿的提取條件

2.2.1 影響因素考察 參照有關文獻［7］，在樣品中加入氫氧化鈉 (2mol/L)150ml和20g氯化鈉，加熱蒸餾提取，用裝有10ml 0.1mol/L鹽酸溶液的100ml容量瓶收集蒸餾液約95ml后定容，制成供試品，按上述色譜條件進行含量測定。分別改變不同條件，其余條件按上述條件進行提取，對影響提取效率的因素進行考察。從測量結果可知，氫氧化鈉的加入體積、氫氧化鈉溶液的濃度、氯化鈉的加入量、蒸餾液接收體積等因素對測量結果均有明顯影響，為考察各因素的綜合影響結果，以下通過正交設計法來優選麻黃堿的最佳提取條件。

2.2.2 正交實驗方案 考察指標:測得的麻黃堿含量。

考察因素:氫氧化鈉的加入體積、氫氧化鈉溶液的濃度、氯化鈉的加入量、蒸餾液接收體積。

采取L9(34)正交試驗進行考察，取正交設計表的1，2，3，4列分別對應于A、B、C、D四個因素。其因素水平見表2，結果見表3。

表2 因素水平表

表3 正交實驗方案及結果

所在列2 3 4實驗1 9 200 3 15 80 66.73均值1 79.513 49.627 63.453 63.447均值2 69.887 71.587 70.387 71.543均值3 54.11 82.297 69.67 68.52極差25.403 32.67 6.934 8.096

2.2.3 結果分析 由麻黃堿含量的直觀分析可知，四個因素的極差大小順序為B＞A＞D＞C。進一步進行方差分析(結果見表4)，B因素和A因素有顯著性，C因素及D因素無顯著性。因此確定最佳工藝為:A1B3C2D2，即加入3mol/L氫氧化鈉的體積100ml，氯化鈉15g，蒸餾液接至約95ml。

2.2.4 樣品的含量測定 參照正交實驗結果采用以氫氧化鈉 (3mol/L)100ml和15g氯化鈉加熱蒸餾提取，用裝有10ml 0.1mol/L鹽酸溶液的100ml容量瓶收集蒸餾液約95ml后加水至刻度，制成供試品，按上述色譜條件進行含量測定。結果見表5。

表5 含量測定結果(n=3)

3 討論

3.1 本試驗曾參照文獻用萃取法提取供試品，將制得的供試品溶液注入高效液相色譜儀，同法測定鹽酸麻黃堿的含量，將測得的結果與蒸餾法的結果進行比較，結果表明，蒸餾法較萃取法處理時間短，提取效率高，方法簡便，易于操作，準確性好;并且不需使用有機溶劑，對環境影響小，故采用蒸餾法作為提取方法。

3.2 按照正交表中的實驗3蒸餾時，由于加入氫氧化鈉的體積少，氯化鈉的量較大，造成蒸餾快結束時氯化鈉的濃度相對較高，此時容易出現爆沸現象，并出現氯化鈉析出晶體。此現象是氯化鈉加入量太大和氫氧化鈉溶液體積太少所致，且氯化鈉加入量的增加對提取效率影響不大，故最佳提取方法中氯化鈉的加入量為15g。

3.3 正交實驗得到的結果表明氫氧化鈉的加入體積與提取效率之間并非成正比關系，造成此結果的原因可能為由于加入的氫氧化鈉體積增大導致氯化鈉的濃度降低，從而降低了提取效率的緣故。

3.4 氫氧化鈉的濃度越大對其提取效率越高，但氫氧化鈉的濃度大于3mol/L后對提取效率的影響不大，且過高濃度的氫氧化鈉對玻璃儀器的腐蝕作用很強，因此最佳提取方法中氫氧化鈉的濃度為3mol/L即可。

3.5 試驗結果表明，氫氧化鈉溶液的濃度和體積是影響提取的最關鍵因素。本結果為含麻黃堿的中藥及制劑的含量測定提供了實驗依據。

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