28 批次扁咽口服液中肉桂酸的含量測(cè)定

唐 亮，劉皈陽(yáng)，馬建麗，周 亮，李 翔

扁咽口服液［總制字(2008)F02001］是純中藥復(fù)方制劑，主要由玄參、連翹、冰片等17 味藥材組成，具有清熱解毒、利咽生津、軟堅(jiān)散結(jié)之功效，臨床上主要用于急慢性咽、扁桃體炎。原有質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)無含量測(cè)定。為了考察并更好地控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，保證用藥安全有效，本文采用HPLC 法對(duì)28 批扁咽口服溶液進(jìn)行了質(zhì)量考察，測(cè)定制劑中君藥玄參中肉桂酸的含量，并對(duì)考察結(jié)果及出現(xiàn)的問題進(jìn)行了分析與探討，為制訂完善的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent 1200 型高效液相色譜儀(包括四元泵，VWD 檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器，ChemStation 化學(xué)工作站);Mettler AE200 電子天平;肉桂酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110855-200801);藥材均由北京市鶴延齡中藥飲片有限公司提供;扁咽口服液(解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院中藥制劑室，批號(hào):111226，10 mL/支);甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1對(duì)照品儲(chǔ)備液取肉桂酸對(duì)照品12.68 mg置于25 mL 量瓶中，用甲醇定容，搖勻。精密量取1 mL，置于100 mL 量瓶中，用甲醇定容，搖勻，即得5.072 μg/mL 的對(duì)照品溶液，置4 ℃冰箱保存。

2.1.2 供試品溶液 精密量取1 mL 置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，0.45 μm 濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液 按處方比例及生產(chǎn)工藝制備缺玄參的陰性對(duì)照樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2 色譜條件 色譜柱為Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(4.6 mm ×150 mm，5 μm);流動(dòng)相為甲醇-1%冰醋酸溶液(50∶50);流速為1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為285 nm;柱溫為30 ℃。在此條件下，肉桂酸與樣品中其他色譜峰分離良好，保留時(shí)間約為12 min，理論塔板數(shù)按肉桂酸峰計(jì)算不低于4 000。

2.3 專屬性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，陰性對(duì)照對(duì)肉桂酸的測(cè)定無干擾。見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察 按“2.2”項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣對(duì)照品溶液1、2、5、10、20、40 μL，記錄肉桂酸峰面積。以肉桂酸的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y =6 397.06 X-0.131 6(r =0.999 9，n =6)。結(jié)果表明，肉桂酸在0.005 1 ～0.202 9 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖1 HPLC 色譜圖

2.5 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 μL。結(jié)果肉桂酸峰面積RSD 為0.28%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(批號(hào):111226)扁咽口服液供試品溶液(“2.1.2”項(xiàng))，在0、2、4、8、12、24 h 分別進(jìn)樣測(cè)定。計(jì)算肉桂酸峰面積RSD為1.60%(n =6)，結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(批號(hào):111226)扁咽口服液樣品6 份，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果肉桂酸的平均含量為33.96 μg/mL，RSD 為1.39%(n=6)，表明方法的重現(xiàn)性良好。

2.8回收率試驗(yàn)精密量取已知含量(33.96 μg/mL)的同一批號(hào)(批號(hào):111226)扁咽口服液樣品6 份，精密加入適量肉桂酸對(duì)照品溶液，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.9 樣品含量測(cè)定 按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按相同色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)定了28 批樣品(每批樣品測(cè)量3 個(gè)樣本，取其平均值)的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=28)

3 討論

扁咽口服液為中成藥制劑，組方藥味多，成分復(fù)雜，文獻(xiàn)報(bào)道的HPLC 法測(cè)定肉桂酸含量方法較多［1-2］。經(jīng)比較，采用甲醇-1% 冰醋酸溶液(50∶50)洗脫，結(jié)果發(fā)現(xiàn)肉桂酸與雜質(zhì)峰能得到較好的分離，所得圖譜基線平穩(wěn)、分離度良好，且陰性樣品在相應(yīng)保留時(shí)間的位置上無干擾。HPLC法方法學(xué)考察和實(shí)測(cè)樣品的含量結(jié)果顯示，本方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，提高了工作效率，為扁咽口服液的質(zhì)量控制提供了檢測(cè)依據(jù)。

本研究結(jié)果提示，應(yīng)在原有質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中增加含量測(cè)定檢測(cè)項(xiàng)，以更好地控制口服液內(nèi)在質(zhì)量，保障用藥安全有效的重要性;同時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按照制備工藝進(jìn)行生產(chǎn)。

［1］ 邱星安. 高效液相色譜法測(cè)定脈絡(luò)寧口服液中肉桂酸含量［J］.實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2011，15(11):118-120.

［2］ 袁祥慧，楊惠蓮.高效液相色譜法測(cè)定五苓片中肉桂酸含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2011，20(9):18-19.