DC－CIK細胞用于治療急性髓系白血病MRD的研究

西安市中心醫院血液病研究所（西安710003） 王 漪 張 曦 李罡燦 宋艷萍 郭 亮

白血病微小殘留病（Minimal residual disease，MRD）的克隆性增殖［1，2］是AL復發的根源，MRD的監測與治療直接關系到AL的預后，最大限度地殺滅MRD是白血病患者長期無病生存的關鍵，但清除MRD是AL治療的難點。強化治療與異基因造血干細胞移植均因其相關缺陷限制了臨床應用。過繼免疫細胞治療（Adoptive cellular immunotherapy），尤其是樹突狀細胞（DC）與細胞因子誘導的殺傷細胞（CIK）共培養細胞（DC－CIK）過繼療法以其強大的抗腫瘤效應越來越受到人們的關注。我們回顧用FCM監測MRD持續陽性的11例急性髓系白血病患者化療聯合自體共培養DC－CIK過繼免疫細胞治療的情況，現報告如下。

資料與方法

1 研究對象 本組11例急性髓細胞白血病患者均為我院2007年1月至2010年12月收治的初診患者，依據《血液病診斷及療效標準》明確診斷［3］，其中M23例，M33例，M44例，M51例，男性7例，女性4例，中位年齡48歲（17～62歲）。以上患者明確診斷后進行常規化療1～2個療程達到血液學完全緩解后再鞏固或強化2～3個療程，多次FCM檢測MRD持續陽性。11例患者共接受25例次DC－CIK細胞過繼免疫治療，其中過繼免疫治療與鞏固、強化治療方案交替。MRD陽性定義：正常表達抗原強度改變（包括增強或者減弱）和（或）丟失、異常表達其他系別的標志、早期和晚期抗原同時表達、幼稚細胞比例明顯增多且均質性表達，以這些殘存的細胞占骨髓單個核細胞總數的比例作為MRD的數值，其比例﹥0．1%定義為MRD陽性。

2 DC－CIK細胞的制備及回輸 在患者化療后骨髓造血功能完全恢復階段采血。培養擴增［4］后的DC－CIK細胞經質檢合格后分2次（間隔24h）靜脈回輸給患者。間隔3個月后可酌情行下一個療程過繼免疫治療［5，6］。

3 不良反應觀察 所有患者DC－CIK細胞治療中及治療后監測生命體征變化，觀察患者有無發熱、寒戰、皮疹、惡心、嘔吐、喘憋、休克等情況，并于治療中及治療后進行血常規、肝腎功電解質血糖、心電圖等檢查。回輸后3個月及隨訪、治療中監測感染性疾病、自身免疫疾病及第二腫瘤等的發生情況。

4 療效觀察 采集患者細胞治療前、治療后3個月及每次隨訪、治療時的骨髓標本行多參數流式細胞術檢測白血病細胞異常免疫表型，即MRD檢測。

結 果

1 DC－CIK細胞治療的安全性 11例患者應用DC－CIK細胞治療1～3療程，共輸注25次，培養及回輸過程均較順利，無1例培養后檢出病原菌。輸注過程順利，患者均無明顯不適。3例次在輸注后24h內出現發熱，最高體溫均低于38℃，給予物理降溫后體溫恢復正常。2例次出現輸注后乏力、肌肉酸痛等不適，24h內自行消退。無1例出現寒戰、過敏，患者的血常規、肝腎功電解質血糖及心電圖在治療前后無明顯變化。所有患者均未出現嚴重感染性疾病、第二腫瘤及自身免疫性疾病等。

2 DC－CIK細胞治療情況及MRD檢測 中位隨訪31個月，經FCM檢測，11例患者中7例（63．6%）MRD轉陰，處于持續完全緩解（Continuous complete remission，CCR）狀態（圖1，2）。1例患者（M2）經DCCIK細胞過繼免疫治療后曾一度MRD轉陰，持續約8個月后復發；3例患者（2例 M4、1例 M5）分別經3療程（M4）、2療程（M4）、2療程（M5）DC－CIK細胞過繼免疫治療MRD仍持續陽性，并于初次診斷后11個月（M4）、17個月（M4）、9個月（M5）復發。

圖1 M2患者細胞血液學完全緩解，MRD陽性

圖2 同一M2患者血液學完全緩解，MRD陰性

討 論

MRD細胞負荷越大，白血病復發的可能性越高。MRD的敏感特異性檢測一直備受關注。由于臨床上出現基因和染色體異常者不到50%，而FCM適用范圍廣，幾乎可用于所有急性白血病患者的MRD檢測。已有許多體內外研究證實了DC－CIK的過繼免疫對白血病細胞的清除作用［7］為其臨床治療白血病MRD提供了理論基礎。

過繼免疫治療應在較大程度減少白血病負荷的基礎上進行，以免造成浪費［5］，本研究中，所有患者經正規化療后血液學達到完全緩解。在骨髓恢復期采集患者外周血單個核細胞后體外共培養了DC－CIK細胞，培養前后細胞計數增殖約7倍，3次病原菌檢測均未陰性，提示細胞培養過程中的質量控制良好。并對培養后的CIK細胞做了淋巴細胞亞群檢測，結果顯示符合CIK效應細胞的免疫表型。11例MRD持續陽性的急性髓系白血病骨髓完全緩解患者，進行了25個療程的DC－CIK細胞過繼免疫治療，回輸后僅有3例低熱，2例乏力、肌肉酸痛，給予對癥處理后癥狀迅速消退，余無明顯不適，提示不良反應輕微，且對血常規、肝腎功電解質血糖及心電圖等檢查影響不大，安全性好，隨訪過程中未見明顯并發癥發生。中位隨訪31個月，經FCM檢測，11例患者中7例（63．6%）MRD轉陰，處于持續完全緩解（CCR）狀態，未見復發，初步顯示了免疫治療在清除MRD中的作用，療效滿意。比童春容［8?研究的AML患者MRD陽性僅化療維持的CCR率要高，但有可能與我們研究的患者中有3例M3，且隨訪時間較短有關。大量臨床研究表明化療聯合細胞治療是安全的，無嚴重不良反應，可提高白血病患者CCR率，延長患者 OS（Overall survival，OS），改善患者生存質量。但有研究［9］顯示DC－CIK治療療效與療程有關。

MRD不僅可以作為判斷預后的重要指標還可指導臨床治療。在化療藥物最大限度地降低瘤負荷后，用DC－CIK過繼免疫治療MRD，兩者配合可望達到根除白血病細胞、減少復發的目的。

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