不同形態(tài)、用量培養(yǎng)基對(duì)黃皮洋蔥試管苗生長的影響

閆芳 ，張春梅

（1.河西學(xué)院生態(tài)與綠洲農(nóng)業(yè)研究院，甘肅張掖，734000；2.河西學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院）

洋蔥學(xué)名Allium cepaL.，別名蔥頭、圓蔥、胡蔥、玉蔥，是百合科蔥屬草本植物，具有極高的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值，它不僅能夠改善食物風(fēng)味，而且具有殺菌、抗腫瘤、降血壓、抗血栓及動(dòng)脈硬化等生理功能，耐寒，喜溫，適應(yīng)性強(qiáng)，產(chǎn)量高，易栽培，耐貯運(yùn)且供應(yīng)期長，對(duì)調(diào)節(jié)淡季蔬菜供應(yīng)具有重要作用[1]。莖尖培養(yǎng)是進(jìn)行洋蔥脫毒、生產(chǎn)無毒種苗、恢復(fù)優(yōu)良種性的有效手段[2，3]。姜璐琰等[4]研究了洋蔥胚狀體的誘導(dǎo)及再生系統(tǒng)的建立。徐啟江等[5]對(duì)分蘗洋蔥試管鱗莖微繁技術(shù)進(jìn)行了研究。但對(duì)洋蔥鱗莖快繁環(huán)節(jié)中培養(yǎng)基形態(tài)和用量的研究鮮有報(bào)道，特進(jìn)行了此次試驗(yàn)，以期獲得洋蔥鱗莖的最佳培養(yǎng)體系。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為黃皮洋蔥鱗莖，購自甘肅省張掖市甘州區(qū)某蔬菜超市；50 mL三角瓶。

1.2 試驗(yàn)處理

設(shè)3組試驗(yàn)，每組試驗(yàn)設(shè)4個(gè)處理。第一組MS固體培養(yǎng)基不同用量試驗(yàn)，處理A1為50 mL三角瓶放入培養(yǎng)基10 mL，處理B1為15 mL，處理C1為20 mL，處理D1為25 mL。第二組MS液體培養(yǎng)基不同用量試驗(yàn)，處理A2為50 mL三角瓶放入培養(yǎng)液10 mL，處理 B2為 15 mL，處理 C2為 20 mL，處理 D2為25 mL。第三組White固體培養(yǎng)基不同用量試驗(yàn)，處理A3為50 mL三角瓶放入培養(yǎng)基10 mL，處理B3為 15 mL，處理 C3為 20 mL，處理 D3為 25 mL。

1.3 試驗(yàn)方法

調(diào)整培養(yǎng)基pH值至5.8，消毒滅菌后于無菌條件下用莖盤切割方式切取0.3～0.5 mm洋蔥鱗莖為外植體，接種到MS+BA 0.4 mg/L+NAA 0.1 mg/L培養(yǎng)基（固體或液體）和White+BA 0.4 mg/L+NAA 0.1 mg/L培養(yǎng)基（固體）上，鱗莖每一處理接種10瓶，每瓶接種6個(gè)切段，然后放置在相同條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)10、20、30 d時(shí)分別隨機(jī)抽取每處理5瓶30株調(diào)查，觀察植株生長發(fā)育動(dòng)態(tài)，記載葉片數(shù)、莖節(jié)數(shù)、株高、發(fā)根數(shù)、小苗長勢、葉片狀態(tài)、小苗狀態(tài)等。

①無菌材料的獲得、接種 剝?nèi)パ笫[蔥皮，用自來水沖洗10 min左右，采用莖盤切割的方式切取外層鱗莖上半部0.3～0.5 mm為外植體，將外植體放入75%酒精消毒滅菌30 s，再放入0.1%HgCl2消毒滅菌10 min，用無菌水認(rèn)真沖洗4次。在超凈工作臺(tái)接種到培養(yǎng)基上，進(jìn)行無菌培養(yǎng)。

②培養(yǎng)條件 培養(yǎng)溫度（25±2）℃，光照強(qiáng)度2 000～3 000 lx，光照培養(yǎng) 16 h，暗培養(yǎng) 8 h。

2 結(jié)果與分析

2.1 MS固體培養(yǎng)基不同用量對(duì)試管苗生長的影響

由圖1可知，MS固體培養(yǎng)基不同用量對(duì)洋蔥試管苗的生長影響比較明顯，鱗莖在MS固體培養(yǎng)基上前期生長無差異，葉片數(shù)、莖節(jié)數(shù)、株高、發(fā)根數(shù)都基本一致；后期試管苗差異很大，從10～20 mL范圍內(nèi)試管苗葉片數(shù)、莖節(jié)數(shù)、株高、發(fā)根數(shù)都隨培養(yǎng)基用量的增加而增加，20 mL時(shí)達(dá)到最大值，20 mL以后試管苗生長無明顯變化。表明MS固體培養(yǎng)基用量過多會(huì)超過洋蔥試管苗生長所需的營養(yǎng)而造成浪費(fèi)。由此可見，50 mL三角瓶放入20 mL是MS固體培養(yǎng)基的最佳用量。

2.2 MS液體培養(yǎng)基不同用量對(duì)試管苗生長的影響

由圖2可知，隨著培養(yǎng)液用量的增加，洋蔥試管苗葉片數(shù)、莖節(jié)數(shù)、發(fā)根數(shù)、株高先增大后逐漸減小，至15 mL時(shí)洋蔥試管苗葉片數(shù)、莖節(jié)數(shù)、發(fā)根數(shù)、株高達(dá)到最大值；20 mL以上時(shí)洋蔥試管苗的各項(xiàng)指標(biāo)逐漸減小。表明液體培養(yǎng)基用量過多會(huì)使接種的切段浸沒于其中，因缺氧而不易發(fā)芽，導(dǎo)致試管苗生長勢弱。因此，50 mL三角瓶放入15 mL是MS液體培養(yǎng)基的最佳用量。

2.3 White固體培養(yǎng)基不同用量對(duì)試管苗生長的影響

由圖3可知，鱗莖在White固體培養(yǎng)基上生長差異較小，隨著培養(yǎng)基用量的增加，葉片數(shù)、莖節(jié)數(shù)、株高、發(fā)根數(shù)都隨著培養(yǎng)基用量的增加而增加，25 mL時(shí)達(dá)到最大值。White固體培養(yǎng)基為低濃度鹽培養(yǎng)基，其營養(yǎng)元素與前兩組基本相同，pH值和培養(yǎng)條件也相同，至25 mL時(shí)洋蔥試管苗的各項(xiàng)指標(biāo)達(dá)最大值，這與營養(yǎng)元素的濃度有關(guān)，因此，50 mL三角瓶放入 25 mL是White固體培養(yǎng)基的最佳用量。

2.4 不同形態(tài)、用量培養(yǎng)基對(duì)洋蔥試管苗生長的影響

由圖4可知，B2處理 （MS液體培養(yǎng)基）明顯優(yōu)于C1處理（MS固體培養(yǎng)基）和D3處理（White固體培養(yǎng)基），其表現(xiàn)在葉片數(shù)多、植株高、發(fā)根數(shù)多、莖粗壯、長勢強(qiáng)、苗壯、發(fā)芽生長快。同時(shí)處理B2培養(yǎng)成苗（達(dá)到4～6片有效葉的植株稱為成苗株）時(shí)間要比處理C1和處理D3提早5 d左右。因此50 mL三角瓶放入15 mL MS液體培養(yǎng)液是洋蔥鱗莖快繁的最佳用量及方式。

3 小結(jié)與討論

圖1 MS固體培養(yǎng)基不同用量對(duì)試管苗生長的影響

圖2 MS液體培養(yǎng)基不同用量對(duì)試管苗生長的影響

Phillips等[6]在 BDS+毒莠定 0.75 mg/L+BA 2 mg/L固體培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出愈傷組織和體細(xì)胞胚。Fridborg[7]在 MS+NAA 1 mg/L+KT 1.5 mg/L固體培養(yǎng)基上把洋蔥鱗片直接誘導(dǎo)成芽，此試驗(yàn)與本試驗(yàn)的MS固體培養(yǎng)基相同，均能獲得小植株；不同之處是培養(yǎng)基激素種類及其配比和外植體不同，表現(xiàn)為對(duì)洋蔥試管苗生長的影響效果不同。徐啟江等[5]對(duì)分蘗洋蔥試管鱗莖微繁技術(shù)進(jìn)行研究，以洋蔥鱗莖莖尖為外植體，以25 mL MS+BA 0.4 mg/L+NAA 0.1 mg/L固體培養(yǎng)基為起始培養(yǎng)基，培養(yǎng)40 d后獲得試管苗，再誘導(dǎo)獲得微鱗莖，此試驗(yàn)與本試驗(yàn)的不同之處在于培養(yǎng)基的形態(tài)和外植體的選取，本試驗(yàn)選用洋蔥外層鱗莖上半部，可能由于不同形態(tài)培養(yǎng)基對(duì)洋蔥試管苗的生長影響不同。本試驗(yàn)得出液體培養(yǎng)基有利于洋蔥試管苗的生長。

綜上所述，在洋蔥鱗莖快繁階段，MS液體培養(yǎng)基優(yōu)于MS固體培養(yǎng)基，其用量以50 mL三角瓶中放15 mL培養(yǎng)液最佳。但洋蔥鱗莖快繁過程中易產(chǎn)生遺傳性變異，特別是染色體倍性的變化有待進(jìn)一步研究。

圖3 White固體培養(yǎng)基不同用量對(duì)試管苗生長的影響

圖4 不同形態(tài)、用量培養(yǎng)基對(duì)洋蔥試管苗生長的影響

[1]郭玉華，李鈺金，殷詩強(qiáng).洋蔥食品的研究進(jìn)展[J].中國調(diào)味品，2009，34（11）：35-37.

[2]徐啟江，陳典，張?jiān)菩?分蘗洋蔥莖尖培養(yǎng)脫毒苗技術(shù)研究[J].北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2002（2）：6-11.

[3]陳典，徐啟江.分蘗洋蔥莖尖愈傷組織誘導(dǎo)及植株再生[J].園藝學(xué)報(bào)，2001，28（4）：359-360.

[4]姜璐琰，楊建平，張松，等.洋蔥組織培養(yǎng)研究進(jìn)展[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2003，34（2）：299-302.

[5]徐啟江，楊守志，池春玉，等.分蘗洋蔥試管鱗莖微繁技術(shù)研究[J].植物學(xué)學(xué)報(bào)，2003，20（1）：80-84.

[6]Phillips G C,Luyten J.Effectsof picloram and other auxious ononion tissue cultures[J].J Amer Soc Hort Sci,1987,108(6):948-950.

[7]Fridborg G.Growth and organogenesis in tissue cultures ofAllium cepavar.proliferum[J].Physiologia Plantarum,1971,25(3):436-440.