樹鼩的動物福利措施探討

匡德宣，孫曉梅 ，江勤芳，仝品芬，陸彩霞，高家紅，代解杰

(中國醫學科學院/北京協和醫學院醫學生物學研究所，云南省重大傳染病疫苗研發重點實驗室，昆明 650118)

樹鼩 (tree shrew，Tupaia belangeri)，又稱北方樹鼩(northern tree shrew)，是外形酷似松鼠的小型哺乳動物，動物學分類地位屬于介于食蟲目與靈長目之間攀鼩目 (Scandentia)［1］。

由于樹鼩特殊的分類地位和存在許多自發性疾病，體形小，易于飼養，成本低廉，來源廣泛及新陳代謝、生理機能、大體解剖和基因組與人類具有相似性等特點，已被應用于生殖生物學、社會心理學、免疫學、癲癇病、腦血管疾病、糖尿病等方面研究的實驗材料，被認為是一種在醫學和生物學研究方面具有廣泛開發應用前景的動物資源［2，3］，可能成為替代靈長類動物的值得選擇的小型實驗動物。為了保證樹鼩動物福利的規范化和科學化，提高樹鼩繁殖率和成活率，本文從獸醫公共衛生及實驗動物科學的角度，對野生樹鼩的捕捉、運輸、檢疫、馴化、飼養、繁育及質量控制等方面的原則及基本技術知識作一簡述，為從事樹鼩工作的有關人員及樹鼩實驗動物化研究提供參考。

1 樹鼩技術開發

1.1 樹鼩的野外捕捉

野外捕捉的樹鼩數量必須嚴格控制，不應高于科學研究需要的最低數量。野生動物引種工作人員負責野生樹鼩引種、馴養繁殖許可證的合法手續辦理、組織抓捕、運輸等工作。野生樹鼩的引進采購應通過合法、正規的渠道，同時要保證樹鼩的質量，從野外直接捕捉樹鼩，必須具有當地林業部門開具的“野生動物特許獵捕證”方能捕捉［4，5］。采用的捕捉方法不能使被捕樹鼩的身體嚴重傷害或發生應激反應，具體方法采用在小型設置彈簧法條的鼠籠具內放置引誘食物捕捉，有可能積水或直接日曬的地點，不宜作為捕捉點。每天需到捕捉點查看數次，落網者應盡快移送到集中關養處或檢疫設施內。

1.2 樹鼩的運輸

運輸要保證樹鼩不被污染，并保持正常狀態，樹鼩運輸籠具表面用消毒藥，如0.5% ～1%的過氧乙酸、1% ～2%的消毒靈、75%酒精或2% ～3%的碘伏等噴霧消毒。操作運輸籠時務必小心，操作運輸箱時最好帶上皮質和橡膠手套、特制外衣及橡皮鞋靴。籠具的大小應保證樹鼩有正常活動的空間，根據樹鼩喜暗怕光的特點，需要在籠具內放置一些棉布，便于樹鼩在籠具內躲藏，避免造成過度驚嚇;減少由于溫度變化而引起動物不適或死亡，過冷或雨天均不適宜運輸，過熱時要進行必要的通風降溫。樹鼩運輸到飼養隔離區后，打開隔離區(大籠)的外門，將樹鼩運輸籠具放入大籠內，再用消毒液噴霧后，打開運輸籠具的門，輕輕將樹鼩拿出，避免樹鼩逃逸，同時放入飼料與潔凈飲水，按照動物運輸箱上的標簽，核對動物的出生日、性別、數量、供應單位或來源地，記錄必要的背景資料，檢查實際情況與標簽是否相符。運輸籠具內的臟物，如糞便、尿、剩食物要收集，放入不漏水且可燒毀的袋內焚化，被污染的地面需用消毒液噴霧消毒。

1.3 樹鼩的檢疫

1.3.1 檢疫設施及籠器具:新捕捉的樹鼩運輸到專門的檢疫室籠具內集中管養，檢疫室和其它樹鼩飼養室分隔開，應經常保持清潔衛生，室內應有防滲透的地面及適用的地漏，以便清洗消毒，檢疫室內應無野鼠、鳥、蚊子及其它昆蟲。檢疫期間，每只樹鼩應關養在單獨籠具內，并可清洗消毒，籠具應有足夠空間并以適宜金屬材料制成。不同品種的或捕自不同地區的樹鼩，不可混合關養，也不可混合關養在同一室內。動物室、籠具及飼喂用具每天清洗一次，必須定期清洗消毒。經2～4周觀察檢疫后，未被發現可疑現象時方可進入飼養室。動物移出時，對房間要做徹底的清洗消毒。

1.3.2 檢疫內容:檢疫內容包括一般性健康情況檢查和實驗室檢測。一般性健康情況檢查主要是觀察樹鼩皮毛有無光澤、豎毛、脫毛、出血、污物等;眼有無眼屎、流淚、白內障、角膜損傷等;口腔有無流涎、出血等;耳有無外傷、耳殼曲折等;四肢有無外傷、彎曲、脫臼、腫脹、關節炎等;肛門有無腹瀉、血便、脫肛等;精神(沉默、倦怠、動作不活潑)、食欲(食欲不振、拒食)及營養狀況(消瘦、過度肥胖、成長異常)等。是否有姿勢異常、行走和站立困難、運動失調、跛行等狀態。實驗室檢測包括細菌、病毒、寄生蟲等，具體檢測樹鼩支原體、腸道細菌、真菌、肝炎病毒、輪狀病毒、單純皰疹病毒及體內外寄生蟲(螨蟲、原蟲、弓形蟲)等。

1.3.3 檢疫期的馴化飼養管理:在自然條件下生活的野生樹鼩移到人工條件下飼養時，不宜立即改變原來的條件，宜采用群居的方式并模擬野外的生存環境，同時提供適合的飼料，逐漸地改變，以便動物適應新的環境［6］。樹鼩每天最少供飼一次足夠適宜的當地食物，含有適量平衡的各種營養成分，尤其是維生素C及蛋白質。飲水應經常不斷地供給。檢疫期內由合格人員(如獸醫)每天最少一次巡視動物健康狀況。巡視內容包括活動、食欲、下痢、流血、紅斑疹等。有臨床癥狀的動物應立即給予隔離診斷治療。治療無效死亡的動物(應盡可能做良好的檢查)，并應盡快移離籠具，并按合乎公共衛生準則的方法焚化。此籠具也應立即徹底清洗消毒。檢疫期間的記錄必須準確詳細，包括收到及出口動物數量、編號、性別、來源、用途、檢疫期每批動物的死亡率、發病率、治療程序、臨床癥狀及診斷測試等。

2 相關的生物安全性措施

2.1 工作人員安全措施

樹鼩飼養管理相關工作人員負責樹鼩的馴化、飼養繁殖、疾病預防、質量控制和管理等工作，工作中最重要的注意事項是防備對人有傳染性并有生物危害性質的樹鼩病原菌，人員必須嚴格遵守生物安全措施通則。樹鼩種群及實驗室有關工作人員上任前及任職后的血清必須定期抽樣儲存在－80℃冰箱，當工作人員可能接觸到或感染上樹鼩病原菌時，這些血清可作為測定體內抗體變化的對照，所有操作樹鼩或其組織的人員，最好對破傷風、狂犬病、腦脊髓炎及乙型肝炎實行免疫。

進入樹鼩關養區的人員必須穿戴清潔的保護衣裝。如橡膠鞋靴、手術用手套、面罩、頭帽、防毒面具、護目鏡及全副外裝等。在實驗室捕捉或固定接觸樹鼩時務必小心，必須穿戴這些保護用衣罩，如不慎被樹鼩咬傷、抓傷或被樹鼩籠劃傷時，應當場立刻以肥皂水、清水及75%的酒精沖洗消毒，然后再采取其他醫療措施醫護。由于手套較易傳染動物之間的病原菌，因此，每間動物室需用專用手套，不能在不同動物室間混用。除手套外，當進入其它樹鼩飼養室時，其它保護衣罩都要換下，所有保護及罩用完后必須徹底清洗消毒。在動物室及實驗室內嚴禁吸煙、飲水及吃食物。使用樹鼩的單位應對工作人員進行健康及安全的具體培訓。

2.2 使用單位的購買及管理

使用單位購入樹鼩時，實驗人員應向相應部門索取所用動物相應的《國家重點保護野生動物馴養繁殖許可證》復印件，動物的遺傳背景資料、動物微生物檢查資料及動物年齡和健康方面的資料，必要時要求對方提供方便運輸的有關證明材料［7］。樹鼩和對之間可能潛在相互傳染的病原菌，樹鼩運到后不能直接進入飼養區，必須在檢疫區隔離1～2周，因此，實驗單位隨時隨地都要把樹鼩(即已通過檢疫)的活體及血液、淋巴唾液、排泄物等認作其對人具有潛在的危險性。操作樹鼩及其組織的人員必須遵從適當程序來保護自己的安全，為達到保護目的，必須有獸醫及相關人員對樹鼩及實驗室的支持。

3 樹鼩繁殖種群的建立及管理

樹鼩的繁殖是其實現實驗動物化及各項研究不可缺少的基礎條件［8］。由于大部分樹鼩的生殖、生理不清楚，因此繁育水平工作需依靠科學研究來推動。只有經過適當檢疫期而判為健康無傳染病原的動物才可作為種群。建立樹鼩人工繁育中心不但能保障有足夠數量的樹鼩供科研使用，避免使用野生樹鼩所帶來的危害性，還能供應高品質、年齡、血源及遺傳性更明確的樹鼩，從而成為保護野生樹鼩的良策。擁有原生樹鼩資源的國家較易得到所需高品質的繁育種群，因此政府當局應鼓勵建立樹鼩的繁育。種群的維持、管理及定期檢查是導致成功繁育的基本條件，要想提高樹鼩種群的繁殖力，應特別注意以下幾方面的工作:

3.1 種樹鼩的選種原則

挑選體況好無傷病，被毛光亮，雌樹鼩乳頭大且均勻，雄樹鼩睪丸明顯。有下列情況不作為種用:體重小于110 g，體況消瘦的母樹鼩;被毛粗亂、無光澤或脫毛的樹鼩;骨盆腔狹窄的母樹鼩;陰莖斷裂或隱睪的公樹鼩。把母性好、產仔數多的母樹鼩作為基礎，進行選種;一般從第2胎至第4胎中選取繁殖種用樹鼩;從一窩中選取發育較好、體格健壯，并符合品系特征的作為種用樹鼩［9］。

3.2 交配及孕檢

雄雌樹鼩按1∶5留種，采用隨機交配法，雌雄樹鼩按1∶1合籠同居交配，自合籠之日起，第20～30天進行妊娠檢查，通過腹部觸診的方法觸摸子宮內胚胎，如摸到子宮內有一節節的圓或長形的硬滑塊，則斷定母樹鼩已經懷孕［10］。

3.3 妊娠期管理

確診懷孕的母樹鼩轉移到生產間單籠分居飼養待產，轉入妊娠期管理，需保持安靜，加強營養，以籠號為樹鼩固定編號進行生產記錄管理，到生產間超過(20～25)d還未生產的，需要核實是否為假孕或已經食仔。交配用雄樹鼩每次交配后休息(7～12)d便可繼續交配使用。交配用雌樹鼩的管理，交配后觸摸孕檢未孕的雌樹鼩可繼續交配，體質欠佳未配的雌樹鼩待恢復后可再次交配，受孕雌樹鼩生產斷乳后休息2周即可再次交配，未孕雌樹鼩每月有兩次交配受孕機會［11］。

3.4 產后及離乳管理

產后檢查產仔數，每天觀察幼仔生長情況;按規定格式，每日記錄生產狀況，產仔數在2只或3只時，通常在40日齡時可全部離乳。產仔數大于3只時，一窩可選擇不同的時期離乳，極個別幼仔可在45 日齡時離乳［12］。

3.5 建立繁殖種群記錄檔案

繁育工作的開始，進行情況及種群生長表現狀態等均要有良好的記錄。每只動物均要有準確詳細的記錄，包括健康情況、血緣關系等。

4 樹鼩的人工飼養環境條件

4.1 樹鼩飼養室的準備

在啟用前應對設施、籠具及用具等統一進行徹底消毒。將與外界相通的進出氣孔，電源插座等用膠帶紙封閉，門縫用塑料紙密封，在盛有10%濃度的甲醛液(規定量40 mL/m3)的容器內中加入高錳酸鉀(規定量30 g/m3)后，放入房間內進行熏蒸或用純甲醛加熱熏蒸。操作人員必須迅速退出門外，熏蒸24 h即可;啟封進出氣孔和門窗，自然通風7 d［13］。

4.2 籠具要求

樹鼩的人工飼養應有專用的樹鼩飼養籠具，包括籠具及巢箱，必須每周換一次，保證舒適和衛生。籠具皆要求無毒，易消毒、規格統一，堅固耐用，操作使用方便，經濟適用;籠架要求牢固、穩定，便于拆卸、組裝，推薦使用實驗室人工飼養繁殖及實驗用樹鼩專用籠具(窩箱和籠子的大小分別為350 mm×168 mm×211 mm和400 mm×380 mm×355 mm)，以及獨立換氣樹鼩專用隔離籠具。籠架各部件均選用無毒、無味、無磁性，耐酸、耐堿、易清洗，易消毒、耐高溫、耐高壓的材料制成。其中，主架選用AISI304不銹鋼無縫型材或有縫型材制作，不銹鋼內外表面宜電刨光，獨立換氣樹鼩專用隔離籠具的籠盒采用聚砜(PSU)材料，光滑、透明，便于實驗觀察;巢箱采用 PVC 材料［14，15］。

4.3 樹鼩飼養室的環境要求

樹鼩飼養室應控制好溫度、濕度、通風、噪聲、采光及照明等環境因素［16－18］。最適溫度為(23±l)℃，推薦值為 (23±3)℃，允許范圍為 (23±5)℃;最適濕度為 (50±5)%，允許濕度為40% ～70%，每天打開動物房門窗自然通風8～10 h，噪聲＜60 dB。采用自然光照采光，避免直射陽光的照射，如用人工照明應控制在12 h:12 h或11 h:1 3 h的明暗交替。照度要求室內離地面1 m處達到150 lux。

5 樹鼩的飼料、日常飼喂管理與質量控制

5.1 樹鼩的飼料及營養需要

樹鼩飼料多種多樣，有全價營養顆粒料、混合飼料、水果、面包蟲和牛奶。混合飼料的配方(以100 kg 計算)及制作如下［19－21］:玉米面 32 kg，大米面 10 kg，小麥面 25 kg，豆粕 18 kg，骨粉 1.5 kg，魚粉 1.5 kg，奶粉 8 kg，白糖 4 kg，食鹽 0.2 kg，VC50 g，VE50 g，復合 VB100 g，煙酸 50 g，葉酸 50 g，VAD50 g，多種維生素50 g，酵母100 g。將主要成分混勻，加水少許攪拌均勻，放入蒸箱蒸40 min即可，待蒸料冷卻后，再添加維生素拌勻即可飼喂。水果用高錳酸鉀水浸泡10 min，清水洗凈切成小塊喂食，面包蟲，純牛奶直接喂。樹鼩正常生長發育營養需求:水分30%、粗蛋白25%、粗脂肪 6%、無氮浸出物24.5%、粗纖維6%、粗灰分6%、鈣1.5%、磷1%，并補給適量的水果、面包蟲等營養品。懷孕樹鼩營養需求是在普通正常飼料的基礎上補充動物性蛋白 10g/d/只，純牛奶 5 mL/d/只，水果 20 g/d/只。

5.2 樹鼩的日常飼養管理

樹鼩喂食次數及數量為每天飼喂蒸料兩次，共50 g/每只。懷孕的樹鼩需每天喂面包蟲20條，牛奶5 mL，水果50 g。飲水可用清潔的自來水加到水盒里。加水時注意水不要沖到樹鼩身上，每天兩次，保證樹鼩每天有充足的飲水。動物房每天打掃1次，清除剩余食物，果皮殘渣及其糞便，窩箱和籠子每月清潔一次，先用消毒藥水浸泡，然后刷洗干凈并晾干，食盒和水盒每周清洗1次。

5.3 樹鼩的質量控制

通過質量控制對樹鼩進行檢疫性檢查，了解樹鼩群中發生某種疾病或發生傳染病流行，經檢測確診病原，采取控制措施，提高對疾病的認識，積累經驗和收集病毒株標本，其內容包括:常規健康監測、寄生蟲檢測、細菌學診斷及病毒學檢查［22，23］。每季隨機取樣進行健康監測，樹鼩采樣數根據飼養的總數及地方標準所規定的抽檢率決定，待檢樹鼩包含6月齡成年樹鼩與老年的淘汰種樹鼩。常規定期對所飼養的樹鼩群抽樣進行病毒學檢查，以了解樹鼩群中病毒感染情況，是否符合原來級別。從樹鼩體內分離及培養病原菌，即細菌學診斷方法，各種致病菌均有一定的特性，因而采樣部位、分離和鑒定方法也不同，目前樹鼩細菌學檢驗仍使用比較成熟的分離培養法比較準確。

6 樹鼩的特殊需要性與未來的發展

樹鼩被應用于人類醫學實驗研究的多個領域，如病毒性肝炎、流感病毒、登革熱病毒、輪狀病毒、皰疹病毒、糖尿病、膽結石、癌癥等各種類型的人類疾病樹鼩模型。由于樹鼩的許多分子和細胞結構近似于人類，對多種人類重要病毒易感，可作為重要人類病毒的動物模型，并在腫瘤學、內分泌學、神經生物學、生殖生物學、免疫學等方面已有廣泛和深入的研究。世界衛生組織(WHO)多年前就呼吁用樹鼩代替大猩猩進行科學實驗，樹鼩替代黑猩猩作為常用的模式實驗動物已是一種趨勢和必然，并在一定領域具有靈長類明顯的優勢［1］。近些年來，已經有不少學者在樹鼩能否作為HCV感染的動物模型方面做了十分有益的探索，為盡快研究HCV丙肝病毒的感染機制、生活周期、致病機制、病理學變化以及為相關疫苗和藥物的研制提供科學可靠的研究平臺。

由于樹鼩實驗動物化研究的長期滯后，在不同程度上影響了樹鼩開發應用研究的進程，實驗樹鼩標準化研究滯后是長期以來實驗樹鼩應用研究發展緩慢的主要原因之一。對有關樹鼩的工作，各個國家及政府應給予鼓勵與支持，以國際合作方式解決樹鼩問題的探討已迫不及待。因此，擁有樹鼩自然資源的國家和政府當局及科學家們，有責任做捕捉、運輸時的動物福利工作，開展實驗樹鼩質量控制國家標準的研究和近交系實驗樹鼩的培育研究;進一步加強實驗樹鼩的基礎生物學研究;開展人類重大疾病的樹鼩動物模型的研究;建立國家級實驗樹鼩種源基地、生產供應基地和動物實驗研究基地。制定并促進保護與供應樹鼩的政策及辦法，同時在其實驗過程中的動物福利問題應當引起人類的足夠重視。中國近年也已將樹鼩資源的開發利用提到議事日程并列入國家科技部“十一五”、“十二五”科技支撐計劃項目［24］。在“十二五”期間，通過該項目的實施，促進我國樹鼩實驗動物化和標準化進程，將為國家建立和完善樹鼩種質資源管理體系、種質資源中心和保存基地提供有力支撐，樹鼩最終必將成為一種極具價值和科學研究需求的新型實驗動物。

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