過敏性紫癜腎炎患兒IgA1異常糖基化的研究

劉 云，徐漢云

（江西省兒童醫院兒內科，南昌 330006）

過敏性紫癜（HSP）是兒童時期最常見的血管炎之一，以非血小板減少性紫癜、關節炎或關節痛、腹痛、胃腸道出血及腎炎為主要表現，腎臟是否受累是HSP患兒預后的關鍵因素。目前HSP發病機制不清楚，主要與體液免疫異常、凝血機制異常、遺傳免疫因素異常等有關［1］。有研究［2］表明，HSP 患者血中IgA1明顯增高，而皮膚、腎臟及消化道黏膜中均以IgA1沉積為主，推測黏膜免疫系統對進入人體內的抗原產生免疫反應而使IgA1增多是HSP的發病機制。本研究主要探討IgA1的異常糖基化是否與過敏性紫癜性腎炎（HSPN）發病有關。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2011年2月至2012年3月在江西省兒童醫院住院治療的過敏性紫癜腎炎患兒20例 （過敏性紫癜腎炎組），男 15例，女 5例，年齡（8.39±2.99）歲，病程（10±3.60）d。 臨床表現:雙下肢對稱壓之不褪色紅色皮疹，鏡下檢查有血尿和（或）蛋白尿，經腎活檢確診為過敏性紫癜腎炎。另選擇在本院體檢的健康兒童20例（對照組），男13例，女7例，年齡（7.6±3.1）歲。近期無呼吸道、胃腸道等黏膜感染史，無血尿及蛋白尿、肝腎及系統性疾病史。

1.2 IgA1低糖基化水平檢測方法

1.2.1 標本采集

清晨空腹抽取靜脈血3 mL置干燥管，以3500 r·min-1離心10 min分離血清，分裝后置-70℃冰箱保存待測,不反復凍融。

1.2.2 血清IgA1低糖基化水平測定

蠶豆凝集素（VVL）親和 ELIsA測定。VVL與血清IgA1的結合力，間接反映血清IgA1糖基化程度，結合力增高說明IgA1呈低糖基化，說明存在異常糖基化IgA1。具體步驟:將VVL（美國Vector公司）稀釋至0.5 mg·L-1，包被酶標板，4℃冰箱過夜洗滌，以10 g·L-1牛血清清蛋白在37℃封閉1 h洗滌。每孔稀釋待測血清50 μL，空白對照為10 g·L-1牛血清清蛋白，室溫下孵育1 h洗滌。加入鼠抗人IgA1單克隆抗體，每孔加入稀釋后的酶標抗體50 μL，室溫下孵育1 h洗滌，最后加入酶作用底物溶液，置室溫暗處顯色30 min，每孔再加入硫酸中止酶促反應。用酶標儀在450 nm波長處測定吸光度（A），用單位U表示。

1.3 統計學方法

2 結果

過敏性紫癜性腎炎組異常糖基化的IgA1為（0.35±0.06）U，對照組異常糖基化的 IgA1 為（0.12±0.07）U，過敏性紫癜性腎炎組異常糖基化的IgA1明顯高于正常組（t=3.658，P＜0.05）。

3 討論

正常IgA1分子O-連接糖基最基本的結構是N-乙酞半乳糖胺（GalNAc），以O-連接方式與膚骨架上的絲氨酸和蘇氨酸殘基相連。在此基礎上N-乙酞半乳糖胺可通過β1，3半乳糖轉移酶在其末端加上半乳糖基，該糖鏈可通過α2,3唾液酸轉移酶或α2,6唾液酸轉移酶進一步連接上1個或2個帶有負電荷的唾液酸。IgA1分子鉸鏈區β1，3半乳糖轉移酶活性降低可能引起IgA1分子O-糖基化異常［3］。 有研究［4］表明，異常糖基化的 IgA1 分子與去唾液酸糖蛋白受體（ASGPR）結合減少，不能被肝細胞識別、攝取和清除，使得大量異常糖基化的IgA1沉積；異常糖基化的IgA1有自身聚集或與IgG形成的抗原抗體復合物的傾向，直接與鉸鏈區肽結合，免疫復合物沉積在相應的臟器，造成臟器損傷。異常糖基化的IgA1在體外實驗中對細胞外基質成分親和力增加,如纖連素、Ⅳ膠原等增加了系膜捕獲和腎小球沉積，提示IgA1異常糖基化可能與腎臟損傷有關［5］。有研究［6］表明，IgA 腎病的患者，IgA1 分子存在糖基化的異常。本研究通過測定IgA1與VVL的結合力，間接反映IgA1的半乳糖水平，結合力越高說明IgA1半乳糖水平越低，說明存在異常糖基化IgA1。正常兒童體內血清IgA1也可與VVL結合，因為IgA1結構正常，所以與VVL的結合力是不高的。本研究中，過敏性紫癜腎炎組患兒血清IgA1與VVL的結合力高，說明過敏性紫癜腎炎患兒血清IgA1分子上的N-乙酰半乳糖胺暴露多，IgA1半乳糖水平低。Lau等［7］研究提示，異常糖基化IgA1與HSPN發病有關。

HSP患兒預后的關鍵因素是腎臟是否有損害，可是目前仍沒有很好的方法早期提示HSP患兒腎臟是否會損害，異常糖基化IgA1與HSPN發病有關，但是異常糖基化IgA1的檢測能否起到一個預測腎臟損害的早期預測因子呢，這仍需要更加系統、詳細、大樣本的研究。

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