丹紅注射液的質量標準及其穩定性研究*

弋金龍 黃 翔 何春曉 汪興宇 張茹萍 韓 進 陳 波 諶曉曦（浙江中醫藥大學，浙江 杭州 310053）

丹紅注射液的質量標準及其穩定性研究*

弋金龍 黃 翔 何春曉 汪興宇 張茹萍 韓 進 陳 波 諶曉曦△（浙江中醫藥大學，浙江 杭州 310053）

目的 建立檢測丹紅注射液中有效部位含量的方法，并考察丹紅注射液質量標準及其穩定性。方法丹紅注射液中黃酮定量應用紫外可見分光光度法，以蘆丁為標準品定量，檢測波長506 nm；采用pH計法和沉淀法對注射液進行pH，鞣質、蛋白質、草酸鹽、抗氧化試驗和穩定性試驗。結果 蘆丁在0.021～0.103 mg/mL范圍內，濃度與吸光度成良好線性關系，r=0.9999，平均回收率100.46%，RSD為1.20%。6批注射液中總黃酮的含量分別 9.68、9.85、9.58、11.80、10.42、11.67 mg/mL，pH 5.62～5.83，鞣質、蛋白質、草酸鹽含量都符合藥典規定。結論 本實驗方法操作簡單，結果準確，可為丹紅注射液的質量控制提供參考。

丹紅注射液 總黃酮 分光光度法 質量標準 穩定性

丹紅注射液中黃酮類化合物是該藥發揮藥效的有效部位。因此本實驗以蘆丁為指標，采用分光光度法，通過方法學的系統考察和6批樣品的含量測定，建立了丹紅注射液中總黃酮的含量測定方法。為對丹紅注射液質量的評價和控制提供更全面的依據，本實驗同時考查注射液中鞣質、蛋白質、草酸鹽等質量標準及其穩定性。

1 材 料

TU-1900型雙光束紫外可見分光光度計 （北京普析通用儀器有限責任公司）；超聲波清洗器（上?？茖С晝x器有限公司）；XS105DualRange分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）。InoLab pH720實驗室臺式酸度計（德國WTW公司）。丹紅注射液（批號110858，110926，110927，110934，110937，110928。 規格 10 mL/支），山東步長制藥有限公司提供。蘆丁對照品（批號100080-200707）購于中國藥品生物制品檢定所，甲醇（批號101437）購于美國Fisher公司，為色譜純。鹽酸（批號20101030），中國杭州化學試劑有限公司。明膠（批號 F20091228）、冰醋酸（批號 T20100913）、氫氧化鈉（批號 20120809）、氯化鈉（批號 20120926）、磺基水楊酸（批號 T20100112）、氯化鈣（批號 F20111012）、亞硫酸氫鈉（批號F20080528）均購于國藥集團化學試劑公司，為分析純。

2 方法與結果

2.1 丹紅注射液中總黃酮含量測定

2.1.1 溶液的配制 對照品溶液：精密稱定蘆丁對照品2.06 mg，以50%甲醇溶解并定容于10 mL量瓶中，搖勻，得質量濃度為0.206 mg/mL的對照品溶液。供試品溶液：精密吸取丹紅注射液0.5 mL，置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液。

2.1.2 測定波長的選擇 分別精密吸取蘆丁對照品溶液和供試品溶液各1.0 mL，分別置于10 mL容量瓶中，各加入5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，搖勻后放置6 min，再加入10%硝酸鋁溶液0.3 mL，搖勻后放置6 min，加1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，再分別以50%甲醇稀釋至刻度，搖勻后放置15 min，以相應的試劑為空白，在300～700 nm波長范圍內掃描。蘆丁標準品顯色后和丹紅注射液顯色前后紫外可見吸收光譜圖如圖1所示。由此確定對照品溶液和供試品溶液在506 nm波長處均有最大吸收，故選擇506 nm作為總黃酮的檢測波長。

2.1.3 標準曲線的制備 分別精密吸取蘆丁對照品溶液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，按“2.1.2”項 下操 作，在506 nm處測定吸光度。以溶液的質量濃度（mg/mL）為橫坐標（X），吸光度（A）為縱坐標（Y），繪制標準曲線，得回歸方程為Y=11.735X+0.028，r=0.9999。說明蘆丁在0.021～0.103 mg/mL范圍內，質量濃度與吸光度有良好的線性關系。

2.1.4 精密度試驗 精密吸取蘆丁對照品溶液1.0 mL，按“2.1.2”項下操作后，在506 nm測定6次吸光度，并計算其相對標準偏差（RSD）=0.13%。

2.1.5 重復性試驗 精密吸取批號111033丹紅注射液0.5 mL各6份，配制供試品，依法測定其含量，結果其RSD=0.43%，表明該方法的重現性良好。

2.1.6 穩定性試驗 精密吸取供試品溶液1.0 mL，按“2.1.2”項下操作，對顯色后的供試品溶液每隔15 min測1次吸光度，連續測定9次，結果吸光度平均值為0.643，RSD=0.22%，表明樣品在顯色后120 min內穩定。2.1.7 加樣回收率試驗 精密吸取已知含量的同批供試品液0.5 mL共6份，各加入蘆丁對照品0.250 mg，依法測定各份樣品中總黃酮的含量并計算回收率，結果平均回收率100.46%，見表1。2.1.8 樣品含量測定 取6個不同批號的丹紅注射液，按“2.1.1”項方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液1 mL，按“2.1.2”項中方法測定，每批樣品測定3次。將其吸光度值代入蘆丁標準曲線可得對應樣品濃度，結果見表2。

表1 加樣回收率試驗

表2 6批丹紅注射液中總黃酮的含量（mg/mL）

2.2丹紅注射液質量穩定性研究

2.2.1 pH值測定試驗 取注射液10 mL，緩慢加入0.1 mol/L HCl，觀察注射液外觀變化情況，并測定pH值。取注射液10 mL，緩慢加入0.1 mol／L氫氧化鈉，觀察注射液外觀變化情況，并測定pH值。結果注射液在加鹽酸溶液的過程注射液出現渾濁，而加氫氧化鈉溶液5 mL仍然未出現渾濁。見表3。

表3 丹紅注射液pH值測定結果

2.2.2 鞣質檢查試驗 取注射液1 mL加0.1 mol/L醋酸溶液1滴，再加明膠氯化鈉溶液（明膠1%，氯化鈉10%的水溶液，新鮮配制）5滴，3 min內觀察其澄清度變化。按方法連續測定6批注射液樣品，結果均未見產生沉淀或渾濁。

2.2.3 蛋白質檢查試驗 取注射液1 mL加新制的30%磺基水楊酸液1 mL，搖勻，放置5 min，觀察其澄清度變化。按方法連續測定6批注射液樣品，結果均未見見產生沉淀或渾濁。

2.2.4 草酸鹽檢查試驗 取注射液2 mL加0.1 mol/L醋酸溶液0.2 mL，蒸餾水稀釋至5 mL，加3%氯化鈣試液3滴，放置10 min，觀察其澄清度變化。按方法連續測定6批注射液樣品，結果均未見產生沉淀或渾濁。

2.2.5 抗氧化試驗 取注射液2 mL，緩慢加入0.1 mol/L亞硫酸氫鈉0.5 mL，觀察其對藥液澄明度的影響。按方法連續測定6批注射液樣品，結果丹紅注射液的澄明度均無明顯變化。

2.2.6 穩定性試驗 選取批號111033丹紅注射液，分別在低溫（4±2）℃、高溫（60±2） ℃、光照（2500±300） lx 3種條件放置0、7、14 d進行穩定性考查，重復3次。結果穩定性良好。見表4。

表4 丹紅注射液穩定性試驗

3 討 論

由圖1可知蘆丁經過硝酸鋁-亞硝酸鈉顯色后在506 nm有吸收峰。而丹紅注射液不顯色在400～600 nm沒有吸收峰，而經過顯色后在499 nm有吸收峰。因而選定在506 nm下測定丹紅注射液中黃酮含量，排除自身吸光度干擾，具有較強專屬性［1］。

測得6批樣品中總黃酮的含量分別為9.68、9.85、9.58、11.80、10.42、11.67，均符合國家藥品標準規定（丹紅注射液每1 mL含總黃酮以蘆丁（C27H30O16）計，不得少于 5.0 mg）。

由黃酮測定穩定性實驗可知，樣品在顯色后120 min內穩定。但樣品中含有多種還原性很強成分［2］，長時間非密封狀態下放置對其含量測定是否有影響，需要近一步研究確定。

pH值是影響藥用成分的穩定性和澄明度變化的一個因素，控制好pH值能保證注射液的澄明度。本實驗中6批次注射液pH值5.62～5.83，較為穩定。注射液中添加一定量鹽酸，注射液會出現渾濁情況，而添加氫氧化鈉溶液與添加抗氧化劑亞硫酸氫鈉對其澄明度均無影響。說明該注射液在強酸環境下澄明度不穩定，而在微酸或堿性環境下澄明度較穩定［3］。

由實驗結果可知，6批樣品中的鞣質、蛋白質、草酸鹽等項目檢測，均符合中藥、天然藥物注射液質量要求。注射液分別在低溫、高溫及光照條件下放置7 d，14 d與0 d比較，其外觀性狀、pH、澄明度、總黃酮含量等均基本無改變，表明其穩定性良好。

［1］朱明，王靜，張小寧，等.紫外光譜法測定蒙藥紫檀香總黃酮的含量［J］.中華中醫藥雜志，2012，27（10）：2517-2520.

［2］Zhan Y，Xu J，Liang J，et al.Simultaneous LC-MS-MS analysis of danshensu，salvianolic acid B，and hydroxysafflor yellow a in beagle dog plasma，and application of the method to a pharmacokinetic study of danhong lyophilized powder for injection ［J］.Chromatographia，2008，68（1）：71.

［3］呂應年，GG Chen，龔先玲，等.半邊旗5F注射液的質量標準研究［J］.中國中藥雜志，2008，33（20）：2343-2346.

Study on Quality Standard and Stability of Danhong Injection

YI Jin-long，HUANG Xiang，HE Chun-xiao，et al. Zhejiang Chinese Medical University，Zhejiang，Hangzhou 310053，China

Objective:To establish a method to detect the content of effective site in Danhong Injection and research for the quality standard and stability of it.Methods:The quantitative of flavonoids in Danhong Injection was tested by ultraviolet-visible spectrophotometer （UV-VIS），rutin as standard，detection wavelength 506 nm.The pH value and stability test of the six batchs injection were determined with pH meter and the contents of tannin，protein，oxlaicacid slalt were detected by deferent methods.Results:From 0.021 to 0.103 mg/mL，the concentration and absorbance of rutin had a good linear relationship （r=0.9999），the average recovery rate was 100.46% ，and the RSD was 1.20%.Six batchs injection of total flavonoids were 9.68，9.85， 9.58，11.80，10.42，11.67 mg/mL，pH 5.62～5.83.Its content of tannin，protein，oxalate were complied Pharmacopoeia standard.

Conclusion:The method is simple，accurate，and can provide a reference control for quality of Danhong injection.

Danhong Injection；Flavonoids；Spectrophotometer method；Quality standard；Stability

R944.1+1

A

1004-745X（2013）06-0864-03

國家自然科學基金項目（30973933，81274176）；浙江省自然科學基金項目（Z2101201，LR12H27001）；浙江省中醫藥重點學科（2012-XK-A06）；浙江省科技廳公益技術應用研究項目（2012C33122）

△通信作者

2013-02-14）